第七章 繁殖技术

第七章繁殖技术

第一节：人工授精技术

一、人工授精的意义

1、改变了家畜的交配过程（担心会改变其性欲），提高了优良种公畜（牛）的利用率，一头种公牛可配万头母牛以上。

2、减少了种公畜的饲养量，节约了大量的饲养管理费。

3、是迅速增殖良种家畜的有效方法。4、克服公、母畜因体格相差太大不易交配或生殖道某些异常不易受胎的困难。5、可防止各种生殖道传染病（传染性颗粒阴道炎），前提是人工授精必须遵守操作规程（消毒器具），只有健康的公母畜才能用作人工授精。6、精液保质、输精适时，有助于消灭母畜的不孕和提高受胎率。二、人工授精（一）发情鉴定

1、详细记录：心中有数：哪些牛应发情，哪些牛怀孕。注意对象：配种后18天；产后30天牛；16个月的育成牛

2、勤观察

1）发情表现：奶牛在生殖激素的调节下，生殖器官和性行为等发生的一系列变化，以及与此有关的为精、卵子结合创造条件的各种生殖生理的周期性变化，如：不安、不食、走动、爬跨、鸣叫。

2）变化：内部变化——生殖器官的变化：卵泡、激素——发情的本质变化、子宫、阴道。

外部变化——看到的外部表现和行为变化——阴门肿胀、粘液，爬跨其它牛，食欲加量。为此，发情鉴定要进行内部和外部表现进行综合判断、综合分析，最后确定输精时机，才能有较高的受胎率。发情母牛驾乘其他母牛具体方法如下：a.外部观察法：是目前大家多采用的方法发情前期：哞叫、追爬其它牛，但不接受爬跨，外阴肿胀，潮红，采食量异常，产奶量下降。发情中期：哞叫频繁、接受爬跨并爬跨其它牛，外阴肿胀明显，皱褶消失，流有粘液，对周围或雄性动物反应敏感。发情后期：拒绝爬跨，外阴部肿胀明显消退，皱褶恢复，流出透明液体。有些学者认为，发情检出率与观察次数成正相关;每天观察次数（次）1234发情检出率（%）618091100

早6点——中午：20%牛有发情症状晚6点——午夜：25%牛有发情症状中午——晚6点：10%牛有发情症状午夜——早6点：43%牛有发情症状（因此，越早或越晚观察越好！）b.试情法：根据母牛在接近公牛时的亲疏行为表现来判断其发情程度：发情时通常表现愿意接近公牛，弓腰举尾，后肢开张，频频排尿，有求配动作。c.电测法：阴道内粘液电流值为82—94MA，电阻值为25—15KΩ时输精最好，受胎率最高。有人试验：电测头数输精次数电流电阻妊娠头受胎率153150头92—9425—1513288%d.PH值测定法：发情周期中生殖道粘液的PH值呈现一定的变化，母牛子宫颈粘液PH值一般在6.0-7.8范围之间，而发情时呈弱酸性（抵制细菌），有人试验PH在6.8-6.6时，输精的受胎率最高。（但宫颈粘液比阴道粘液酸度大，取出时变小）e.宫颈粘液涂片法：粘液浮片——干燥——镜检发情盛期：镜检涂片呈羊齿状花纹，结晶花纹曲型，排列长而整齐，持续时间长，杂物少发情末期：结晶结构较短，保持时间较短，白细胞较多，少数牛宫颈涂片不呈结晶状态，受胎率较低f.阴门粘膜色泽变化来判定适宜输精时机：认为母牛阴门粘膜呈干、涩、沾贴感、色泽由潮红——粉红（或近粉白时），为输精适期。g.生殖激素测定法：应用激素测定技术（放射免疫测定法，酶免疫测定法等）可精确测出孕酮的含量，判定是否发情。h.直肠检查方法：此法是常用的方法，世界各国都在用，而且仍为最有效和最准确的方法，当触摸到卵泡大而柔软、波动感强，似成熟的葡萄状，有一触即溃的感觉时，即可考虑输精。（二）输精时机选择最适宜的时间输精，才能保证生活力强的精子和卵子在受精部位相遇，才能提高受胎率。1、一般建议在接受爬跨后6小时进行第一次输精，再过8小时进行第二次输精。2、发情后10-20小时（或排卵前10—20小时）输精。3、早上发情的母牛占总发情母牛的3/4：

午前配种的受胎率为69.90%中午—晚上之间配种的为68.90%晚6时以后配种为68.9%到次日中午前配种的受胎率仅为62.7%

4、傍晚母牛发情

次日早6时配种妊娠率为62%次日上午到下午两点配种，妊娠率为67.4%次日下午2时后到第三日配种妊娠率为63.8%

早上发情晚上配，晚上发情第二天早上配，但问题是：①个体牛可能发现发情早些。②牛场牛早晚两次观察发情，观察到时已晚了。③并非所有的牛都是接受配种18小时后排卵，14小时排卵。④并非一定在理论时间授精，例如美国的专职人员每两天去一次牛场，晚几小时的事是经常的，但不一定配种率低。5、壮年牛，拒爬后5-6小时，受精率达89.6%青年牛：拒爬后7-8小时，受胎率达85.5%

6、产后奶牛的最佳配种时期产后奶牛以76-85天配种受胎率最高，输精时间在排卵前为好。许多报道认为，夜间一次输精可比常规配种受胎率高8.18%，因为大多数母牛在夜间和凌晨排卵。夜间母牛处于安静状态，内分泌功能相对稳定，精卵结合可正常进行。

7、发情鉴定和输精口诀发情初期有特点，接近公牛又疏远，阴道流出水样液，母牛回头左右看，以上特点是“跑栏”，跟踪观察别怠慢；发情盛期不一般，精神紧张采食减，互相爬跨让交配，阴道液体亮多粘，表现明显是“稳栏”，不是冻配好时间，发情末期细察看，不让爬跨距离远，阴道液黄粘度大，末期正是配种前，再过八至十二时，准确输精莫迟延，触摸卵巢细体会，滤泡壁薄波动显，个体之间有差异，或前或后将排卵，优质精液准备妥，深部输精好经验。（三）授精1、冻精质量检查：由于贮存、运输和磁场等都对精液品质产生一定的影响，故一定时间内应对液氮罐中的精液进行质量检查。

1）精子的活力（具有直线运动能力的精子）不应低于0.3，精子畸形率在20%以下，精子顶体异常率不超过5.9%，方可用于人工授精。2）微生物污染指标：精液中不应含有病原微生物，特别是某些传染病的病原。按ISO标准，增减4小时，每ml精液中微生物不应超过500个。3）防止液氮罐的污染，液氮罐中的细菌并非都能冻死，故一定时间内应清洗消毒液氮罐。4）使用器械的严格消毒，输精枪放置中，灰尘污染，所致配种率低和流产。

5）输精器械室内要定期消毒，室内不能存放有毒试剂和使用强烈刺激性气味的消毒剂。个人卫生：酒、烟2、精液解冻

关于解冻方法很多，报道中每种受胎率也不一样。目前报道很杂，列举以下几种方法供参考。1）低温解冻：解冻后需要运输到较远的输精点，输精时，最好以冰水解冻为宜，即使高温，水温不应超过10℃。解冻后运输应尽量保持恒温。

2）室温下自然解冻：利用室温环境，自然解冻，此法不可取，因为室温相差太悬殊。3）手搓法解冻：用于细管冻精，手搓冻精5-7分钟，60-90分钟后输精，受胎率为63.9%（黄牛）。4）不解冻：将细管取出后即装入输精枪内，迅速直肠把握将精液缓慢输入到子宫体分叉处，此法时间短，受胎率可达75%，而对照组用40℃水温加热解冻，受胎率仅为58.7%。5）32，34，35，37，38，40℃水温解冻，发现37℃水温时，精子活力最高，受胎率比40℃水温平均提高10.2%（HSMS96.12.）；还有人用40℃水浴解冻4-5秒即输精，受胎率为62%；而用35℃水浴解冻，受胎率仅有57.10%。6）高温短时解冻法：①有人试验用70℃10秒；75℃8秒；40℃20秒解冻结果是70℃和75℃的解冻温度，精子活力分别比对照组高0.25和0.276，受胎率分别达到81.4%和59.1%，比对照组高24.9个百分点。70℃（8-10秒）60℃（8-10秒）40℃活力：0.70.550.37受胎率：82.27%69.17%56.56%②颗粒冻精的解冻温度提高温度可提高活力，但耗能多，存活的时间短。总之，类似的报道很多，从报道的结果看，不同的解冻温度确实有不同的受胎效果，各人应根据具体情况，结合实际，建立自己的解冻方法以获得较好的受胎率。

7）颗粒冻精用VB12解冻比柠檬酸钠解冻效果好。例：提出精液的时间不应超8秒，一般应在3-5秒钟内，解冻后应在15分钟内使用。例：最后的精液效果不良，因为反复提出放入会影响精液质量。3、输精方法及部位

1）输精方法：a.开膣器输精法（扩大阴道，手电光找宫颈外口，子宫颈内1-2cm），操作简单容易爱精率低。b.直肠把握输精：注意问题：

A、右手直检，右手入：左手直检，熟练后应用双手，以免一只手受伤。

B、一次性的长臂手套只能用一次，防止传染疾病。

C、站在牛的左、右后侧，全身放松并随牛移动，手伸入直肠后，再插入输精枪，更卫生的做法是先插枪后伸手。

D、尽可能不用肥皂水或消毒液（水）（刺激直肠，杀死精子）防止手伸入伸出带入空气。

E、防止输精枪头接触阴唇（后拉直肠，放面巾纸，扒开阴唇）。

2）母牛外阴部的消毒，清水洗净、擦干，防止污染，输精器具要彻底消毒，每输一头牛换一支输精管，以防交叉感染。例：返情率高的原因多数是隐性流产所致，隐性流产的原因是仔畜的不洁环境。实验表明：100头牛的发情鉴定率为100%，全部输精，一次配种最多有55头牛分娩，其余的45头中有10-15未受精，15-20头胚胎在配后13天内死亡，10头在14-42天内死亡，5头胚胎死于42天以后。原因是35%的胚胎在配种后40天死亡，原因是消毒不彻底的革兰氏阴性菌进入子宫——PGF2a——消黄——流产。可见卫生及严格消毒的重要性。

3）输精部位的选择：可将精液输到子宫颈口1-2cm处，宫颈中部3-4cm处，宫颈深部5-8cm处，子宫角分叉部和子宫角内。但据报道不同的输精部位，受胎率不一样。

沈文武：中国奶牛1988.4.26-27,关于最佳输精部位的探讨①子宫颈口稍内输精，受精率为36.36%②子宫角分叉处输精受胎率为50%③2/3的精液输到发育卵泡侧子宫角内，1/3输到体分叉处，结果受胎率68.18%。④1/2输到排卵侧子宫角内，1/4到另一侧角内，1/4到子宫体分叉处，受胎率为77.7%。

有人认为：精液应输到子宫颈前端（即子宫体后，子宫角分叉前）。因为a、因为未孕子宫松软，过子宫颈再向前很容易穿入子宫组织——透创+腹膜炎+不孕

b、如果输精部位较浅，易造成精子外流

c、雌性动物生殖道局部粘膜有体液免疫和细胞免疫，例如，可产生IgG，IgA和某些白细胞，而子宫颈内外粘膜处的抗体生成细胞的数量最多，提示，在输精时可考虑越过子宫颈，以免发生免疫排斥现象，分叉部输精克服了此缺点。母牛抗体的检查方法：精液一滴+母牛血清一滴（或阴道分泌物），盖玻璃片镜检，有凝集现象说明有抗精子抗体。试验：用小鼠的精子免疫小鼠，其妊娠率只有44%，对照组为100%，三、提高母牛受胎率的方法许多作者都试图在母牛输精前后采取措施，以提高其受胎率，有关报道很多，结果也各说不一，但归纳起来有两大类，一类以清理子宫内环境为主，另一类为应用激素制剂调节，现就我所知道和资料中报道的介绍几种。1、子宫内注药1）配种前注（8-12小时）注（80+100）青链毒素，受胎率达48.94%2）配种后注8-12小时，80+100万单位，受胎率达58.62%当然，这要根据具体情况具体对待，不能所有牛都子宫内注药，对不孕牛或屡配不孕者可施此方法，对正常牛当然大可不必，消毒不严可引起感染。也可输其它药，如乳酸环丙沙星。2、其他3）促排2号（3号）或hCG，对排卵延迟或迟缓的奶牛在输精前一次肌肉注射促排2-3号200Mg或hCG1000IU可增强排卵效果。

4）输精当天和第5-6天，肌肉注射VA57.5万国际单位、VD310万国际单位和维生素E50毫克。对产后120天以上，输精超过一个情期又发情及屡配不孕母牛，输精后肌注VE500毫克。5）新斯的明配种前15-20分钟肌肉注射0.5%的新斯地明2ml可提高受胎率，道理不清楚，但认为可能引起宫腔内催产素的释放有关，所以有人直接用催产素。6）输精后5-7分钟，肌肉注射催产素40IU，有利精卵结合7）孕酮：输精前肌注40-60mg孕酮对延期排卵和卵泡发育不成熟有效，输精后10天肌注孕酮60mg有助于维持妊娠8）促性腺激素释放激素：输精时1次肌注GnRH10-20Mg或GnRH类似物100微克或LRH-A3200-400微克综上可见，提高奶牛受胎率的方法很多，并且都有较好的效果，并且公说公有理，谁说都有理，所以我想要具体情况具体对待，不能一概而论，上述方法只应对难配准的牛（是否是自己的配种技术不良造成的；是由于病态造成的——应用上述方法）四、妊娠诊断及注意事项奶牛妊娠诊断具有重要作用，妊娠是人工授精成功与否的直接判定，也是奶牛繁殖和产奶的前提，及时进行妊娠诊断是提高生产力，减少空怀率的重要手段，所以配种员应把妊娠诊断当做一项大事来对待。对配种后17-20天的牛注意观察是否返情对配后60天的牛及时做妊娠检查，以确认其是否妊娠，未妊者再参加配种，妊娠者加强饲养管理，以防流产。

1、外部检查：母畜被毛光亮，膘情良好，食欲好，不再发情，性情温顺、安祥、动作谨慎等可能怀孕。

2、阴道检查：

1）阴道粘膜苍白，有少许浓稠分泌物，子宫口关闭，有粘液塞。

2）取少量子宫阴道分泌物，加入比重1.0的CuSO4溶液中，出现块状沉淀者为妊娠，30天以上即可检出。

3）附近取子宫液混于净水中煮沸1-2分，凝固的为妊娠。

4）取子宫颈口粘液于载片上，粘着性很强的果胨状为妊娠。

5）少量子宫分泌物，加入10%苟性钠2-3滴，混合煮沸，全部溶解，呈现褐色或橙色的为妊娠。

3、直肠检查法：

1）子宫颈拉长，位于骨盆腔中，颈细而坚实。

2）子宫膨大而柔软、波动感明显。

3）排卵侧卵巢有黄体存在，24天后检查依旧。马的直肠检查4、激素法：授精后20天，肌肉注射10ml/头乙烯雌酚孕牛第二天不表现发情为阳性。

5、测孕酮：配种后20天分别检测血浆中或尿中孕酮含量，如达到10ng/ml和20ng/ml以上者为阳性。

6、血清学检查：配后16天，取血清0.5ml于烘杯中，加入0.2NHCL7.5ml，混合1-2分钟，用13%HNO3滴定到PH为0.68，室温下静止20分钟，以黑色背景在透射光下观察，呈观乳色的为妊娠，此法准确率达93-97%。

7、牛奶检查：取0.5-1ml牛奶加3%CuSO41ml,凝固者为妊娠，也可取鲜牛奶5ml加95%酒精1ml，5分钟凝固的为妊娠，30分钟以后凝固的为未妊娠。

8、超声波诊断超声波诊断仪五、建立完备的授精繁殖记录

1、授精记录：牛号、授精时间、次数、精号，情后期表现，排卵侧卵