六味地黄丸的综合质量检测（中药制剂检测课件）

六味地黄丸的综合质量检测【实训目的】1.能依据《中国药典》对六味地黄丸进行全面检验。2.能判断六味地黄丸的质量状况，能正确填写相关检验原始记录及检验报告单。【实训内容】（一）实训用品1.仪器：高效液相色谱仪、显微镜、水浴锅、烘箱、电子天平、崩解仪、培养箱、匀浆、超声振荡器、灭菌锅、硅胶G薄层板、中性氧化铝柱等。2.试剂：甲醇、乙醚、丙酮、环己烷、乙酸乙酯、四氢呋喃、乙腈、磷酸、甘油醋酸试、水合氯醛试液、5%三氯化铁乙醇溶液、营养琼脂培养基等。3.材料：六味地黄丸、丹皮酚对照品、马钱苷对照品等。（二）实训方法六味地黄丸为熟地黄、牡丹皮、山茱萸、茯苓、山药、泽泻六味中药制成的水蜜丸、小蜜丸或大蜜丸。本实训依据《中国药典》一部，利用显微方法对药材进行鉴别；利用薄层色谱方法，对牡丹皮中的主要有效成分丹皮酚进行鉴别。依据制剂通则进行水分、重量差异、装量、溶散时限和微生物限度等检；应用高效液相色谱法测定制剂中马钱苷和丹皮酚的含量，对六味地黄丸进行全面检验。（三）实训步骤1.查阅资料，设计方案阅《中国药典》正文597~598页及相应附录部分，设计检验方案。2.取样按检验要求取样，并记录品名、批号、规格、数量、来源等内容。然后根据需要进行适宜处理。3.性状取六味地黄丸数粒，按照由表及里的顺序，仔细观察其形状、色泽和气味等性状特征。为棕黑色的水蜜丸、黑褐色的小蜜丸或大蜜丸；味甜而酸。4.鉴别（1）显微鉴别：取六味地黄丸2~3粒，置乳钵中研成粉末，取适量粉末，置载玻片，滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他适宜的试液，盖上盖玻片（必要时，加热透化），置显微镜下观察：①山药：淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直径24~40μm，脐点短缝状或人字状。②茯苓：不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛试液溶化，菌丝无色，直径4~6μm。③熟地黄：薄壁组织灰棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物。④牡丹皮：草酸钙簇晶存在于无色薄壁细胞中，有时数个排列成行。⑤山茱萸：果皮表皮细胞橙黄色，表面观类多角形，垂周壁连珠状增厚。⑥泽泻：薄壁细胞类圆形，有椭圆形纹孔，集成纹孔群；内皮层细胞垂周壁波状弯曲，较厚，木化，有稀疏细孔沟。（2）牡丹皮中丹皮酚的TLC鉴别：①供试品溶液的制备：取本品水蜜丸6g，研细；或取小蜜丸或大蜜丸9g，剪碎，加硅藻土4g，研。加乙醚40ml，回流1小时，滤过，滤液挥去乙醚，残渣加丙酮1ml使溶解，即得。②对照品溶液的制备：取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含lmg的溶液，即得。③薄层色谱：吸取上述两种溶液各10μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（3：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5%三氯化铁乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。④结果判断：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点。5.常规检查（1）水分：取六味地黄丸25g，破碎成碎片，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，精密称定，打开瓶盖在100~105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置于干燥器中，冷却30分钟，精密称定，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算六味地黄丸中含水量（％），不得过12.0%（水蜜丸）或15.0%（小蜜丸或大蜜丸）。（2）重量差异：①大蜜丸：以本品1丸为1份，取供试品10份，分别称定重量，再与标示重量相比较（9g），超出±6%的不得多于2份，并不得有1份超出±12%。②水蜜丸或小蜜丸：以本品10丸为1份，取10份，分别称定重量，再与每份标示重量相比较，超出±6%不得多于2份，并不得有1份超出±12%。（3）装量：取六味地黄丸5个完整包装，除去外盖和标签，容器外壁用适宜的方法清洁并干燥，分别称定重量，除去内容物，容器用适宜的溶剂洗净并干燥，再分别称定空容器的重量，求出每个容器内容物的装量与平均装量。平均装量不得少于标示装量，且每个容器装量不得少于标示装量的97%。如有1个容器装量不符合规定，则另取3个复试，均应符合规定。（4）溶散时限：取六味地黄丸6丸，分别置于升降崩解仪吊篮的玻璃管中，加挡板，启动崩解仪进行检，应在1小时内全部溶散且通过筛网。如有1丸不能完全溶散，应另取6丸复试，均应符合规定。如果供试品黏附挡板，应另取6丸，不加挡板按上述方法检，应符合规定。（5）微生物限度：按微生物限度检法依法检查，应符合下列规定：①细菌数：每lg不得过30000cfu。②霉菌和酵母菌数：每lg不得过100cfu。③大肠埃希菌：每lg不得检出。④大肠菌群：每lg应小于100个。⑤霉变、长螨者以不合格论。6.含量测定按高效液相色谱法测定。（1）山茱萸1）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液（1：8：4：87）为流动相；检测波长为236nm；柱温40℃。理论板数按马钱苷峰计算应不低于4000

2）对照品溶液的制备：取马钱苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。3）供试品溶液的制备：取本品水蜜丸或小蜜丸，切碎，取约0.7g，精密称定；或取重量差异检项下的大蜜丸，剪碎，取约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）15分钟使溶散，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10ml，置中性氧化铝柱（100~200目，4g，内径1cm，干法装柱）上，用40%甲醇50ml洗脱，收集流出液及洗脱液，蒸干，残渣加50%甲醇适量使溶解，并转移至10ml量瓶中，50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。5）结果判断：本品含山茱萸以马钱苷计，水蜜丸每lg不得少于0.70mg；小蜜丸每lg不得少于0.50mg；大蜜丸每丸不得少于4.5mg。（2）牡丹皮1）色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（70：30）为流动相；检测波长为274mn。理论板数按丹皮酚峰计算应不低于3500。2）对照品溶液的制备：取丹皮酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20%的溶液，即得。3）供试品溶液的制备：取本品水蜜丸或小蜜丸，切碎，取约0.3g，精密称定；或取重量差异检项下的大蜜丸，剪碎，取约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，称定重量，超声提取（功率250W，频率33kHz）45分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。4）测定：分别精密吸取对照品溶液1μL与供试品溶液20μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。5）结果判断：本品含牡丹皮以丹皮酚，水蜜丸每lg不得少于0.90mg；小蜜丸每lg不得少于0.70mg；大蜜丸每丸不得少于6.3mg。【实训注意】1.进行薄层色谱鉴别时，展开槽的玻璃槽口与盖的边缘磨砂处应涂抹甘油淀粉糊（展开剂为脂溶性时）或凡士林（展开剂为水溶性时），使其密闭。展开前需用展开剂对展开缸进行预平衡15~30分钟，以防止边缘效应。注意展开过程中的恒温恒湿。展开剂应新鲜配制，所用溶剂纯度应高，应分别量取后再混合，不得在同一量具中累积量取。丹皮酚具挥发性，故提取时需缓缓加热，低温回流；由于点样量较大，宜点样成条带状。2.进行溶散时限检查时，如有细小颗粒状物未通过筛网，但已软化且无硬心者可按符合规定处理；大蜜丸不检溶散时限。3.进行微生物限度检查时，应从2个以上最小包装单位中随机抽取本品，且不少于30g，大蜜丸不得少于4丸。检出大肠埃希菌和大肠菌群时，按一次检出结果为准，不再复试；若细菌数、霉菌和酵母菌数其中一项不符合规定，应从同一批供试品中随机抽样，独立复试两次，以3次结果的平均值报告菌数，只有上述四项全部符合规定，才判断本品微生物限度符合规定。4.用于含量测定的马钱苷和丹皮酚标准品必须在60℃减压干燥4小时以上。1.为什么选择盐酸酸性5%三氯化铁乙醇溶液作为丹皮酚的显色剂？2.如果本品为单剂量包装，还应检何项目？3.六味地黄丸供试品制备时，加入硅藻土的作用是什么？【实训检测】【实训报告】记录检验结果，并将其与药品标准相比较，判断供试品是否符合规定。【实训测试】序号考核内容技能要求分值实得分1方案设计正确选取资料，科学设计实训方案，操作性强10

2取样正确取样5

3性状正确判断5

4

鉴别

药材的显微鉴别：正确操作与鉴别10