hpv-16感染与外阴营养不良的关系

hpv-16感染与外阴营养不良的关系

阴道疾病，也称为白色阴道疾病，是一种程度较低的疾病，其病因尚不清楚。有的学者提出,外阴白斑实际上是指外阴局部神经与血管在吸收营养物质和输送营养物质过程中出现障碍引起的组织变性与色素改变的一种疾病。中国中医研究院已将其列为世界性难以治愈性疾病,王家璧等认为该病变可发展为外阴鳞状细胞癌。WHO已正式将其列为癌前病变。人乳头状瘤病毒(humanpapillomavirusvirus,HPV)是一种DNA肿瘤病毒,与生殖道、肺、食道、呼吸道粘膜及皮肤的肿瘤发生有关,其致癌性已在宫颈癌中得到证实。高危型HPV(16、18型)对生殖器的致损伤作用尤为明显。有关HPV-16感染与外阴营养不良的关系,到目前为止,研究或报道的很少。本实验采用病理学、免疫组织化学和电镜技术,对临床病理诊断为外阴白斑或外阴营养不良标本进行HPV-16病毒的检测及其蛋白表达的研究,以探讨HPV-16在外阴营养不良的发生、发展中的作用,对临床的治疗具有重要的指导意义。1组织病理学观察标本来源:标本来自哈尔滨医科大学附属第一医院病理科和黑龙江省医院病理科。临床病理诊断为外阴白斑组织和外阴营养不良的共28例,平均年龄为47.1岁。28块组织中,临床诊断为外阴白斑有19例,外阴营养不良的有9例。另有7例外阴营养不良新鲜组织进行了电镜观察。HPV-16单克隆抗体、SP免疫组化试剂盒,均由福州迈新生物技术公司提供。免疫组织化学采用的是sABC法,具体方法略。电镜常规标本制备,Epon-812包埋,50~80nm的超薄切片,JEM-1220型透射电镜观察。2结果2.1增生型营养不良类型28例外阴标本,临床诊断19例外阴白斑中,9例属于外阴营养不良。在光镜下,病理诊断有11例(1128,39.3%)表皮增厚,角化过度或角化不全,棘细胞增生,上皮角延长,基底层或棘细胞层可出现不典型增生,棘细胞空泡变性等改变(图1),真皮乳头水肿以及慢性炎性细胞浸润,此型病理诊断为增生型营养不良(hyperplasticdystrophy)。有的在真皮毛囊周围的棘细胞增生明显。少数出现基底细胞层结构紊乱,有核分裂像。有3例(328,10.7%)表皮变薄,上皮角消失,表皮角化过度,棘细胞减少或消失,色素脱失,真皮浅层水肿,伴有少量的炎性细胞浸润,此型病理诊断为萎缩性硬化性苔癣(lichensclerosusetatrophicus)。另外50%(1428)上述两种改变同时存在,病理诊断为混合性营养不良(mixeddystrophy)。2.2pv-16表达部位和组织病理学结果28例外阴白斑和营养不良标本中,有17例HPV-16阳性表达,阳性率为60.7%(1728),其中有11例病理诊断为增生型营养不良,100%HPV-16阳性表达;而病理诊断为萎缩性硬化性苔癣或部分混合性营养不良的病例,HPV-16阳性表达减弱或无表达。阳性表达部位主要位于基底细胞和棘细胞的胞浆、胞膜及细胞间的连接上(图2),但以棘细胞为主,偶可见真皮下毛囊周围增生的棘细胞。棘细胞层和基底细胞层增生越明显,HPV-16表达越强。在外阴鳞状细胞癌的切片中,细胞浆内阳性颗粒表达减少。2.3胶质瘤基底细胞7例外阴营养不良标本中,5例(57,71.4%)可见棘细胞层细胞核畸变,染色质变异,核周细胞基质溶解形成微小空泡状,灶性溶合形成大的透明区而空泡化,棘细胞间连接紧密,桥粒丰富,胞浆内含有较多脂滴,张力丝增多,形成高密度斑块,有的线粒体肿胀,线粒体嵴消失。部分基底细胞呈凋亡状态,细胞内膜结构紊乱(图3)。2例(27,28.8%)在棘细胞和基底细胞核内查见呈类晶格排列的病毒颗粒(图4)。3pv-16在阴部细胞毒性与免疫活性关系方面的作用,主要在于细胞生根,HPV是一类分子长度大约为8kb左右的小分子环状双股DNA病毒。通过DNA序列分析,至今已发现大约有70多型,不同型HPV常常分布于不同组织的上皮表面,大约有20多型HPV易感染粘膜上皮,特别是生殖道的粘膜上皮。大量分子流行病学研究资料表明,HPV-16与生殖道肿瘤密切相关。在宫颈癌活检组织中,HPV-16的检出率显著高于正常宫颈组织。HPV-16基因组中共有8个开放阅读框架:E1、E2、E4、E5、E6、E7早期开放阅读框架和L1、L2晚期开放阅读框架,其中E1蛋白的功能主要涉及病毒DNA的复制,E1蛋白是参与病毒DNA的复制的重要因子,E1还有可能参与HPV-16诱导细胞永生化过程;E2蛋白的功能主要作为病毒基因转录的活化因子或抑制因子双向调节病毒早期基因的表达,同时还与病毒DNA的复制有关;E4蛋白可诱使上皮角质细胞骨架降解,帮助病毒从感染细胞中释放;E5蛋白的二聚体亚单位可能通过与PDGFβ受体结合并使其活化,引发一系列细胞内事件,最终刺激细胞有丝分裂;E6、E7基因编码具有转录活性的蛋白质,E6E7开放读框为调节病毒生长的编码区,已有报道将高危型HPV-E6E7转染人角质形成细胞后,可诱导人角质形成细胞永生化。HPV-E6E7介导的作用包括细胞永生化、转化、肿瘤形成和凋亡等,永生化被认为是发展为完全恶性的一个步骤。目前,对HPV-16在宫颈癌的发生发展中的作用研究的较多也较清楚,但对于外阴癌前病变和外阴营养不良的研究较少。本研究发现,28例外阴白斑和营养不良的标本中,有17例HPV-16强阳性表达,阳性率为60.7%(1728),而HPV-16强阳性表达与棘细胞增生呈正相关,电镜下可见棘细胞和基底细胞核内有病毒颗粒,HPV-16阳性检测率为28.8%(27)。本研究证实HPV-16感染与增生型营养不良的发生有密切关系,是促进棘细胞和基底细胞增生的重要因素。HPV-16的8个ORF的转录与表达发生在病毒增值的不同阶段,在表皮明显增生的11例标本中均可见以棘细胞为主的细胞浆内的HPV-16的高阳性表达,并由于电镜下棘细胞层细胞核畸变,染色质变异,核周空泡化,这些表明HPV-16对外阴部上皮的最初影响是E6、E7蛋白的表达使细胞发生的永生化和细胞增生,此时存在于胞浆中的阳性颗粒应为E1、E2蛋白,它们参与了E6、E7蛋白的作用过程外阴病毒感染的标本中,鳞状上皮高度增生,并可见局灶性棘细胞内HPV-16阳性高表达也支持了上述观点。在表皮过度增生发生癌前变的标本中,细胞浆中阳性颗粒表达减少,但可见棘细胞、基底细胞膜和细胞连接上有HPV-16阳性表达,这与Mugnus等人关于宫颈上皮细胞被HPV-16永生化后所见结果相似;电镜下棘细胞间连接紧密,桥粒丰富,胞浆内含有较多脂滴,张力丝增多,据此推测应该是E5蛋白的表达,通过改变与细胞增生相关的细胞膜蛋白活性与E6、E7蛋白共同