卡培他滨片的质量控制

卡培他滨片的质量控制1、实验材料1.1、材料甲醇、乙睛、冰醋酸购买于山东禹王实业有限公司化工分公司;高效液相用甲醇、乙睛为色谱纯，其它试剂为分析纯。表1材料信息一览表序号对照品批号含量(%)来源1卡培他滨GOJ20599.7美国药典委2杂质对照AGOJ207—美国药典委3杂质对照EFI1333——-W美国药典委4杂质对照CGO137015070401■■一・美国药典委5卡培他滨片1507050115070601规格上0.5g自制6卡培他滨片(希罗达巧SH0404规格：a宠上海罗氏制药有限公司1.2仪器表2仪器一览表仪器名称毘号来源电子天平AL204梅特勒•托利多仪器有限公司紫外分光光度计TU-1901北京普析通用仪器有限责任公司红外光谱仪FTIR-S400S岛津仪器设备公司恒温减压干燥器YBZ天津药典标准仪器/DAD检测器Agilent1200美国安捷伦公司恒温恒湿箱HWS^OSO上海精宏实验设备有限公司高效液相色谱仪Agilcntl260美国安捷伦公司智能溶岀仪ZRS-8G天津大学无线电厂2、方法与结果2.1、质量标准参考卡培他滨片美国药典标准(USP39)的内容，制定了本品的质量标准。表3质量标准、方法和限度检査

项H方法放行标准限度货架期标准限度性状鉴别有关

检査

项H方法放行标准限度货架期标准限度性状鉴别有关

物质冃视观察本品为薄膜衣片，除去包衣本品为薄膜衣片，除去包衣送后显白色片显白色TTJit木品的红外记吸收图谱应与本品的红外光吸收图谱应耳对曜品的图谱一致对照品的图谱一致LJPT厂1沖供试品主峰的保剧时间应与供试品主峰的保留珂间应与Hr谀对照品主峰的谍留时间-致对照品主峰的保留时间一致杂质A(%)<0.8杂质A(%)<1.0iwr广蛀杂质R(%〉<0.8杂质B(%)<1.0朵质C(%)<0.3杂质C(%)<0,5单个未知杂质(%)<0.0&单个未知杂质(%)<0-1溶出度片重差

异

微生物

限度

含量溶出度测定第二法总杂质(怀)<L530min不得低丁80%药典法应符合药典规定葯典法应符合药典规定HPLC法标示量的95.0%-105.0%总杂质(％〕<2.030min不得牴于80%应符合药典规定应符合药典规定标示量的93.0%-105.0%2.2分析方法【性状】本品为薄膜衣片，除去包衣后显白色。【鉴别］(1)在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应照品溶液主峰的保留时间一致。(2)本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致。【含量】稀释液:甲醇一乙睛一水(7:1:12)溶液A:0.1%冰醋酸水溶液溶液B:甲醇一乙睛一溶液A(7:1:12)溶液C:甲醇一乙腊一溶液A(16:1:3)时间程序时冋<min>OJOOotoo020495130495131ioq04-0iOC0

系统适用性溶液:用稀释液制成含0.6}g/ml的USP卡培他滨标准品,SP相关杂质A,USP相关杂质B和USP相关杂质C溶液。标准溶液:用稀释液制成含0.6mg/ml的USP卡培他滨标准品溶液。样品溶液:取20片样品，碾细，称取适量粉末，用稀释液制成含卡培他滨0.6mg/ml的样品溶液,过滤,取续滤液作为样品溶液。色谱系统:高效液相色谱色谱法检测波长:250nm柱鳳自劫进样器棍度’5°C流速tI.Oml/niint进样:10^1遇用性要求：分离度：卡培他滨相英杂威A和目之何的分离度应不水丁1.0%;拖尾因子，NMT15(标准落液1相对标准備捋：NKrra.o%{标淮溶液》根据下列公式计算的百为含量：结果=:rUM；X(CS/CU)«10QrU=样品溶灌的蜂面枳；rS=标推湃液的峰面枳CS=USP卡培他滨时曉品溶液的浓度；CU匸卡培他滨样品陷液的浓麽町接受限度；9S,0%-10S,0%【有关物质】稀释液、溶液乩溶液G系统适用性溶液，标准溶液，样品溶液和色谱系统:【含量】项下；样品：标准溶液和样品溶液根据下列公式汁算杂质的iS分含量：结果二IKJ/rS)沁(CS/CU)>:OG/FrU=样品溶液中各杂质的峰面积；rS=标准溶液中卡培他滨的饉面积CS=USP卡培他滨对照品溶液的浓度：CI>卡培他滨样品溶液的然度F=杂质的相对相应因子(见卜表)组分名称—相对保留时同相对相应因子限度〔莎杂淇知AB他杂淇知AB他C未质质培质-杂杂杂卡杂单总■110581510ua£【溶出度】检查方法:涪出度测定法E中国药典》即15年版四韶通则0931第一法试验条叫:溶出介质：水900ml脱气处理转速：SOrpm：取样时阿；30min;温度；3严C±0,5吃具休试验撫作：取本码照洛汕度测定法浆法，以水900巾1为溶巴介质，转速为毎分钟50转’依法操作，经30分钟时，収溶蔽"ini滤过，精密吊取续滤液1E置1伪口1的盘駅中，用水稀释至熬虞，揺匀，作为拱试品溶液亍另取亡埒他滨对痕品适量・精密称定’加水溶弊并定量稀释成Im】中釣含咒昭的洛液，作为对照用諮液"取丄述两种溶独照紫外-可见分光光度注峪中国药典》20W年版洌蘭通则0401,在325nm的波长处分别测定吸光度.按外标法以吸光度蓿计算供试品中的溶宀量，毎片的诰出量以CidhatTSjOU-应K得少-j^80%,应符合规宦b计算公式=溶出度（％）=100/（A^LQ/1000Au:对照品的吸光度：As:供试品的吸光度:；G：对照品的浓度；LC：卡培他滨片開标斥臥I重鼠差异】参照《中阖药典》20J5年版四部通plljOlOl的相关规瓦.应符合规定.【微生物限度J参照盜中国药典no15年版仙部通刚hoc非士菌产品微生物限度检査的相关规焉应符合规定级2.3分析方法的验证2.3.1、性状本品为薄膜衣片，除去包衣后应显白色。取卡培他滨片三批样品，依法检查，结果见下表。表4卡培他滨片外观性状检查试验结果批号1507040115070501J5070601匚为薄膜衣片.除去衽—【丽—7匚除注衣斤显白色农片晁白佝衣口配白随试验结果表明:3批样品检查结果均为薄膜包衣片，除去包衣后显白色，订入质量标准。2.3.2鉴别2.3.2.1红外吸收光谱法将一片卡培他滨片研细，加约1-2mg药粉到300mg的溴化钾中，依法检查，供试样品的吸收带应和对照品一致。表5卡培他滨片IR法鉴别检查结果批号对照品150704011507050115070百01结果/一致一致一致结论:3批样品的红外色谱吸收带均与对照品一致，将本鉴别方法列入质量标准2.3.2.2高效液相色谱法在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。表6卡培他滨片HPLC法鉴别检查结果批号对購品150704011507050115070601「傑费母f向5血）19^26219263""19.257「9,256结果/燉-致…致结论:3批样品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰的保留时间一致，将本鉴别方法列入质量标准。2.3.3检查2.3.3.1重量差异检查取供试品20片，依法检查《中国药典》2015年版四部通则0101，检查结果见下表:表7重量差异检查结果13650.090.86648.670.7964L39-0.6914642Ja-037642.85-0h11647,850.311563921-0.8S644.720.18640.09-0.8916641*48-0.4S643,870.05637.88-1.2417643.94-0.09643.02-0.09650330.69IS645.850.20642.17-0.22645.€8-0.0319644.69M2641.32-035640.12-0+8920642.S4650.47L076S1090,S]平均片重644.55—643,58—645.87结论:经检测，本品样品均符合规定(士5.0%)。15070401批15070501批15070401批15070501批疗号片歎咖誓嘗片重鬧吧普15070601批重量差那

(%)1639.26-0,82643.950.06647.090.192644.1S■0.0664L28-036645.17O】1;647.910.52640.24-0.52644.25W4651.661,10638.71-0.76649.080.505641.26-0.51632.19-1.77638.74-1.106650.410.9164239-0J8639.11-1.057649.560,78647.410.60646,410.0S8648510.65648,29053651.090.819638.29-0,97643.17屯06650550.7310636.17-1.30650,05101650.010,641164L0S-0.5464148-0.33649,470.56]2652.171.1B645.290.2765L930.94片重fmg)2.3.3.2溶出度检查参考卡培他滨片美国药典(USP39)标准中溶出度检查的条件，采用紫外分光光度法《中国药典》2015年版四部通则0401进行定量测定。2.3.3.2.1、溶出度测定方法的验证滤膜对溶出液吸附的考察试验供试品溶液的配制:取卡培他滨片1片批号(20150301)，按照溶出度测定法，在30分钟时取溶出液适量，此溶液分别用0.45|im、0.8|im尼龙滤膜过滤，并分别弃去不同的体积，同时将此溶液用高速离心机离心取上层澄清溶液，精密量取上述溶液各1ml，分别置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。分取上述经不同滤膜过滤并弃去不同体积的样品溶液和离心液，按照紫外分光光度法在325nm处测定吸光度值，考察滤膜对溶出液的吸附。结果见表8表8滤膜吸附影响考察结果

样品处理弃去体积(ml)溶出液吸收值禽心未过滤-0.5090+45(屮n)20.5120,5080.80(冲)20.5140.516RSPM)-(X650结论:以上试验结果表明，0.45}m的水系滤膜和0.80}m的水系滤膜对本品样品液基本无吸附，滤膜对溶出度测定的结果无干扰。线性关系与范围精密称取卡培他滨对照品约14mg，置25ml量瓶中，加水适量，使完全溶解后用水稀释至刻度，摇匀，分别精密量取1ml分别置50mI,25m1,lOml容量瓶中，再分别精密量取2m1.3m1置10ml量瓶中，稀释得5份供试液，在325nm测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标作图。结果见表3-36，图3-15。由试验结果可知，在325nm波长处卡培他滨在11.3-169.0g/ml浓度范围内，浓度与吸收度呈良好的线性关系。表9溶出度测定线性考察结果图9溶出度测定的线性关系图准确度精密称取卡培他滨原料约14mg,22mg,28mg各三份，分别置50ml量瓶中，分别加入空白辅料混合物约8mg，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液;另精密称取卡培他滨原料，水稀释制成每1ml约含卡培他滨56|ig的溶液，作为对照品溶液。取上述各溶液于325nm波长处测定吸光度，并计一算回收率，结果见表10表10溶出度测定回收率力口入胡;

IE若〉平陶冋收宰C力口入胡;

IE若〉平陶冋收宰C灯＞RSO

(%〉14.7714.891OO-R150^14.33SIX13211S.I499.5422.5222.781O1-152375^3.7499.56234823.4^0^.83LOO%28.6799.5S().8328,62282627,72.27,91価即试验结果表明，回收率在98%以上，RSD(%)小于2%,本测定方法准确度高。仪器精密度取溶出度测定用对照品溶液，照紫外一可见分光光度法《中国药典》2015年版四部通则0401在325nm测定吸光度，重复测定6次，结果见表11。表11溶出度测定仪器精密度试验结果-鼻吸收度10,552120.552130.553040.553250.553160,5530平均值05530KSD(%)0.09结果表明，RSD(%)均小于2%，仪器精密度良好。重复性取本品各6片，分别同时测定溶出度，结果见表12。结果表明，本测定法的重复性良好。表12溶出度测定的重复性试验结果片数123156改值RSD(%)溶出度(%)90.3591.518S.7989.7092.6194.4291J32.26结果表明，测定结果的RSD(%)小于5%。溶液稳定性取本品溶出度测定的供试液，室温放置，波长处测定吸光度，结果见表13。表13溶液稳定性考察结果时间(h)00.5I245平均RSD(鳴｝吸洸度0.47810.47720.47840.4793Q47900.48010,47870.21结果表明，数据的RSD(%)小于2%,说明本品溶出度测定的供试液5小时内基本稳定。2.3.3.2.2溶出度测定吸收波长的选择及专属性考察选择325mn作为溶出度测定波长。取处方比例的空白辅料适量，用水定量稀释，滤过，取续滤液作为空白辅料溶液，依法测定，由试验结果可知，空白辅料的吸收值均小于0.02基本不干扰测定，确定溶出度测定的波长为325nm。_表14卡培他滨及辅料紫外测定结果TOC\o"1-5"\h\z吸光度325nm卡培他滨0.553空白辅料0.0052.3.3.2.3、溶出介质选择取本品，分别以水、（0.1mol/1）盐酸溶液、pH4.5缓冲液和pH6.8缓冲液900m1为溶出介质，按（（中国药典））2015年版四部通则0931第二法，转速50转/分，进行试验，分别于5,10,20,30,45分钟取样丨0ml，过滤，精密量取续滤液1ml至10ml量瓶中，用溶出介质稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，并同时向溶出测定仪中补加等温等体积的溶出介质10ml;另精密称取卡培他滨对照品适量，精密称定，加溶出介质溶解并定量稀释成1ml中约含卡培他滨56|ig的溶液，作为对照品溶液，照紫外分光光度法《中国药典》2015年版四部通则0401，在325nm的波长处分别测定吸光度，按外标法以吸光度值计算不同溶出介质中不同时间点的溶出量。并按下式校正:Qi=90Q^Ci+^]OChi其中*Qi为i次取样时的药物累计释放罡。G沖i次取样时的介质洛液続度＜■⑺为口次取样时的介质溶液浓必考察不同溶出介质中的药物释放情况，结果见表15，图10表15溶剂选择结果（溶出度%）洛出介质时间5min1Omin20min3Omin45min水自制品11,0235..1268.7592.0199.87RSD%13.27231.931.62OJmol/L自制品16.5334.6255.4763J871.06盐酸RSD%10.892J52.460681.44pH4.5缓冲自制品13.563S.9565.(3191.03100,01液RSD%7.251,502.55J.22076

pH靛缓冲自制品S-S917.6835.957L0292.03液RSD%19321L542.660.300.31話殊冲港ll17JS&話殊冲港ll17JS&图10不同介质中的溶出曲线比对由溶出结果发现，本品在(0.1mol/1)盐酸溶液中的溶解度太小，未达到平台区，样品不能达到全溶出，而在水、pH4.5缓冲液和pH6.8缓冲液中均能达到全溶出，相比之下水中的释放度最高，参考USP39标准，故选择水作溶剂。2.3.3.2.4转篮法与桨法及转速的选择取本品供试品，以900ml的水为溶出介质，温度为37°C±0.50C,分别在浆法50r/min,75r/min及篮法100r/min的条件下依上述方法测定溶出曲线。结果见表16，图11。表16溶出装置和转速选择试验结果(溶出度%)转速时间-5fninlOmiti20minSOmin45min11.1235.1668,2491.88100.01桨法50樹分RSD9.577.903」石I13L64自制24.565223S5.1499.24100.1桨法75转/分RSD%7.863.761.870.970.70篮注自制18,5243,25S3.4197489998100转/分RSD%7.613.531.910391.14由表中实验数据可知本品溶出方法宜采用桨法，转速为50转/分。203QR.|(h203QR.|(h(mln)b脛餐途的？0出1H1缁T—乐i去“F升丹钟T-韻■注7创畀炜$申-凉送】00於/疔钟图11不同方法及转速的溶出曲线结论:篮法与浆法溶出曲线基本相似，对于片剂常用浆法，故本品溶出度选用浆法测定，溶出度条件确定为:照溶出度测定法《中国药典》2015年版四部通则0931第二法，采用桨法，以900m水（脱气）为溶出介质，转速为50转/分钟，溶出时间为30分钟。2.3.2.3.5溶出度测定结果取本品，以水为溶出介质，按《中国药典》2015年版四部通则0931第二法，转速50转/分，进行试验，于30分钟取样10ml,过滤，精密量取续滤液1ml至10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液:另精密称取卡培他滨对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释成1ml中约含卡培他滨56|ig的溶液，作为对照品溶液，照紫外分光光度法《中国药典》2015年版四部通则0401，在325nm的波长处分别测定吸光度，按外标法以吸光度值计算供试品中的溶出量，限度为标示量的80%，应符合规定。依据上述溶出度测定法测定三批中试供试品及市售参比品的溶出度，结果如见表17。表17样品溶出度测定结果批号123456平均值（滋）1507040188.6290.9890.2693.7191.53B9.1790.7115070501W.0890.62汨出91.：791.5392.9B9L6215070601R9.7190.2692J0931692.2694.079204参比品SH0404&9.2892.3894.12933594.7095.4&93.22结论:3批中试样品的溶出度与参比品（希罗达.）的溶出度结果一致，均符合规定。2.3.3.3有关物质2.3.3.3.1杂质分析表18杂质情况分析

NHCOOC^Hn杂质c黃丿丸名称质纟已•构是否龍入质量标准杂质來源杂质控制限度原料引入<1.0%原料引入<0.5%定入质量标准宦入质虽标准定入质遛标准杂质A原料引入<1/0%<0.1%<2.0%NHCOOC^Hn杂质c黃丿丸名称质纟已•构是否龍入质量标准杂质來源杂质控制限度原料引入<1.0%原料引入<0.5%定入质量标准宦入质虽标准定入质遛标准杂质A原料引入<1/0%<0.1%<2.0%疔入质疑标推定入质捷标准总杂成杂质B单个未知杂底2.3.3.3.2、方法的确定参照USP39标准，卡培他滨片与原料采用相同的液相条件。2.3.3.3.3、专属性试验辅料干扰试验:取本品研细粉末适量（约相当于卡培他滨15mg），精密称定，置25m1容量瓶中，加稀释液适量，超声使卡培他滨溶解并制成每1ml中含卡培他滨0.6mg的溶液，摇匀，滤过，取续滤液作为未破坏样品溶液;按处方量称取空白辅料，加稀释液适量，超声后摇匀，滤过，取续滤液作为空白辅料溶液。精密量取未破坏样品溶液、空白辅料溶液和空白溶剂各10|11,注入液相色谱仪，记录色谱图，附图见图12-14,结果表明，空白辅料及空白溶剂均不干扰卡培他滨测定。图12专属性试验样品HPLC图

图14专属性试验空白溶剂HPLC图1）强制降解试验（二极管阵列检测器检测）未降解对照:取本品适量，配制成每1ml中含卡培他滨0.6mg的供试溶液，精密量取10闪注入液相色谱仪，记录色谱图，由图谱可见，峰纯度高。酸破坏:取本品研细粉末适量，精密称定，置25m1量瓶中，加1mol/L盐酸溶液1.0m1，室温下放置30min后，加1mol几氢氧化钠溶液1.0m1中和后，加稀释液使溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为酸破坏样品溶液;另按处方比例取本品辅料同法操作，得酸破坏辅料溶液;取相同比例的酸碱中和，加稀释液稀释至刻度，作为酸破坏空白溶剂。碱破坏:取本品研细粉末适量，精密称定，置25m1量瓶中，加1mol几的氢氧化钠溶液1.0m1，于600C放置30min后，加1mol几的盐酸溶液1.0m1中和后，加稀释液使溶解，放至室温，用稀释液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为碱破坏样品溶液;另按处方比例取本品辅料同法操作，得碱破坏辅料溶液。高温破坏:取本品研细粉末适量，精密称定，置25m1量瓶中，在1100C条件下放置20min后，取出并放冷，加稀释液使溶解，放至室温，用稀释液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为高温破坏样品溶液:另按处方比例取本品辅料同法操作，得高温破坏辅料溶液。氧化破坏:取本品研细粉末适量，精密称定，置25m1量瓶中，加入30%的过氧化氢溶液5.0ml,于60°C温度下放置1h后，加稀释液使溶解，放至室温，用稀释液稀释至