高效液相色谱法测定奶粉中三聚氰胺的含量

测定奶粉中三聚氰胺的含量

——高效液相色谱法生物工程1001班目录三鹿毒奶粉事件 1液相色谱法简介2样品检测方案3结论与反思4毒奶粉事件回顾2008年7月，举国上下正在为刚刚过去的汶川大地震默哀纪念的时候，正在为即将到来的北京奥运会而欢庆的时候，一则新闻报道了大量婴儿因喝了某品牌奶粉而患上了肾结石。随后三鹿集团被推上了风口浪尖，一时间包括蒙牛、伊利在内的全国各大品牌奶粉均被查出“毒奶粉”，引起了全国恐慌，三鹿集团因此也破产倒闭。而这一毒奶粉事件的罪魁祸首——三聚氰胺也随之为大众知晓。高效液相色谱法原理

高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9´107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。

高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量的有机物，原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。

三聚氰胺是一种低毒的化工原料，动物实验结果表明，其在动物体内代谢很快且不会存留，主要影响泌尿系统。乳制品中添加三聚氰胺会使得食品的蛋白质测试含量偏高，从而使劣质食品通过食品检验机构的测试，就送检的奶粉样品，采用高效液相色谱法（HPLC）测定其中的三聚氰胺的含量。因此，在该对奶粉样品的检测实验中，由于样品不耐高温，宜采用此法分析。高效液相色谱法的特点

①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。

②高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。③高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。

④应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。⑤分析速度快、载液流速快：较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。样品检测方案高效液相色谱法检测样品的来源和预处理方法确定仪器配置确定初始操作条件定性鉴定与定量分析实验结果及判定样品的来源和预处理方法高效液相色谱法要求试样能制成溶液。这样，我们在接到一个未知样品时，就必须了解的来源，从而估计样品可能含有的组分，以及样品的溶解度范围。如果样品体系简单，试样组分可溶解则可直接分析。如果样品中有不能用HPLC直接分析的组分，或样品浓度太低，就必须进行必要的预处理，如采用吸附、解析、萃取、浓缩、稀释、提纯、衍生化等方法处理样品。原理：以三聚氰胺为原料制作的成型品经4%乙酸浸泡，浸泡液中三聚氰胺用高效液相色谱分离、测定，以保留时间定性、峰高或峰面积定量。确定仪器配置

1、主要仪器与设备a高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器b分析天平：感量为0.0001g和0.01gc离心机：转速不低于4000r/mind超声波水浴e固相萃取装置f氨气吹干仪涡旋混合器2、材料与方法：以三聚氰胺为原料制作的成型品经4%乙酸浸泡，浸泡液中三聚氰胺用高效液相色谱分离、测定，以保留时间定性、峰高或峰面积定量。确定初始操作条件1、色谱条件

色谱柱：C184.6×150mm，5μm流动相：己烷磺酸钠（5mmol/L）-磷酸（0.1%）溶液+甲醇（90+10）；流速1.0mL/min。柱温：35℃紫外检测器：波长为235nm。进样体积：10μL2、测定将仪器调至最佳状态后，分别将浓度为0.05μg/mL，0.1μg/mL，0.5μg/mL，1μg/mL，2μg/mL的标