连钱草醇提工艺研究

连钱草醇提工艺研究

连金草，又称江苏金草，是属于嘴唇科的血毒症性激活丹（nakai）kuber。2005年版药典一部收载该品种,全国各地均有分布。具有利湿通淋,清热解毒,散瘀消肿的功效,临床上用于治疗热淋、石淋,湿热黄疸等疾病。文献报道连钱草含有黄酮、熊果酸、挥发油、无机盐等化学成分。结合文献,以总黄酮、熊果酸及出膏率为指标,采用正交试验优选最佳提取条件,确定连钱草的醇提生产工艺。1材料和方法1.1naka草甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯。连钱草由江苏南京同仁堂药厂提供,为唇形科植物活血丹Glechomalongituba(NaKai)Kupr.的干燥地上部分。1.2蒸发光散射法贝克曼DU-640紫外分光光度计,Waters-2695型液相色谱仪,Alltech-2000型蒸发光散射检测器,Empower色谱工作站,梅特勒百万分之一及万分之一电子天平。1.3标准物质芦丁(批号0080-9705)、熊果酸(批号110742-200314)对照品均由中国药品生物制品检定所提供。1.4方法1.4.1正交实验的设计根据文献报道及预试验结果,选择乙醇提取,影响乙醇提取的主要因素有乙醇浓度、加入乙醇量、提取时间、提取次数,选用以上4个因素,各取3个水平进行L9(34)正交实验,见表1。1.4.2样品溶液的制备取连钱草50g,根据已选定提取工艺条件提取,每次提取后用纱布过滤,滤液合并浓缩至500ml。1.4.3指标组成的测量1.4.3.检测曲线及方法(1)标准溶液的配制:精密称取120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品约20mg,置100ml量瓶中,加50%乙醇适量,溶解并稀释至刻度,摇匀,制成浓度约为0.2mg/ml的对照品溶液。(2)标准曲线的制备:精密吸取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml,分别置25ml量瓶中,加水至6ml,加5%亚硝酸钠溶液1ml,混匀,放置6min,加10%硝酸铝溶液1ml,摇匀,放置6min,加氢氧化钠试液10ml,再加水至刻度,摇匀,放置15min,以相应的溶液为空白,照分光光度法,在510nm波长处测定吸收度。(3)样品测定:精密量取样品液5ml,稀释定容至50ml,精密量取2ml,平行两份,按上法依法测定。(4)出膏率的测定:精密量取样品液10ml,水浴蒸干,于105℃干燥3h,移置干燥器中,冷却30min,迅速称定重量。计算,即得。1.4.3.熊乳酸对照品溶液(1)色谱条件:色谱柱:汉邦Lichrospher5-C18柱(4.6mm×250mm,5μm),柱温:30℃,流动相:甲醇∶水∶冰醋酸(83∶17∶0.1),流速:1.0ml/min,ELSD检测器漂移管温度:72℃,气体流速1.9L/min。理论塔板数按熊果酸峰计算应不低于20000。(2)对照品溶液配制:精密称取减压干燥至恒重的熊果酸对照品适量,制成浓度约为1mg/ml的对照品溶液。(3)样品制备:取正交提取液50ml,回收至无醇味,加乙酸乙酯萃取2次,每次30ml,提取液回收溶剂,用甲醇溶解并稀释定容至10ml。1.4.4熊乳酸含量与总黄酮与出膏率的权重系数选用总黄酮、熊果酸、出膏率为指标进行试验,筛选最佳提取工艺。对正交实验3个评分指标,采用综合评分法进行数据分析,结合功效,将熊果酸含量权重系数定为0.4,总黄酮与出膏率的权重系数定为0.3。熊果酸含量评分=熊果酸含量/最大熊果酸含量×0.4×100总黄酮含量评分=总黄酮含量/最大总黄酮含量×0.3×100出膏率评分=出膏率/最大出膏率×0.3×100综合评分=熊果酸含量评分+总黄酮含量评分+出膏率评分1.4.5检查实验取连钱草粗粉50g,平行3份,根据已选择的工艺提取制备。2结果2.1正交试验结果及离散度分析结果见表2、3。2.2试验结果见表4。验证实验结果表明,所筛选的提取工艺基本稳定。3正交试验结果3.1实验结果表明,影响熊果酸含量的因素依次为:A>D>B>C,最佳组合为A2B2C2D3;影响总黄酮含量的因素依次为D>A>C>B,最佳组合为A1B3C3D3;影响出膏率的因素依次为:A>D>C>B,最佳组合为A1B3C2D3。3.2根据综合评分的极差及方差分析结果:乙醇浓度与提取次数各水平间差异有统计学意义,其余因素差异均无统计学意义。提取的最优工艺为:A2B2C2D3,根据实际生产,确