隐球菌临床推广课件

隐球菌病感染诊断现状一

产品介绍二

适用科室及临床意义三

相关标准四隐球菌病感染诊断现状一产品介绍二适用科室及临床意义三隐球菌为圆形菌体，外周有荚膜，内有反光孢子，但无菌丝。隐球菌属已知有37个不同的种，但具致病性的多为新型隐球菌，其特点是菌体由一层很厚的多糖荚膜所包被。

新型隐球菌主要包括新生变种、格特变种等简介隐球菌为圆形菌体，外周有荚膜，内有反光孢子，但无菌丝。简流行病学38个ICUsof27个意大利医院384例真菌感染(318例侵袭性念珠菌感染；63例霉菌感染；3例隐球菌感染)TortoranoAMetal.Mycoses.2011,55:73–79.流行病学38个ICUsof27个意大利医院TortorHIV感染者器官移植患者接受大剂量皮质类固醇或单克隆抗体（如阿仑单抗、英夫利昔单抗）和/或其他免疫抑制剂治疗的患者其他无基础疾病的患者JohnR.Perfect,etc.ClinicalInfectiousDiseases2010;50:291–322

美国感染病学会的“隐球菌病治疗临床实践指南（2010年更新）”中指出，隐球菌病的易感人群主要包括：宿主因素HIV感染者JohnR.Perfect,etc.Cl流行病学随着AIDS患者的增多，各种机会性感染的发病率也随之上升，新型隐球菌成为继白色念珠菌之后最常见的机会性感染真菌，其在HIV中的感染率已达8.5%。隐球菌性脑膜炎发生率和死亡率在发达国家达到10-30%，

在发展中国家可达到50-100%。早期隐球菌感染临床表现缺乏特异性，脑脊液变化不典型，但是当发展为隐球菌性脑膜炎时，死亡率可达到20%。早期、快速、准确地诊断很有必要流行病学随着AIDS患者的增多，各种机会性感染的发病率也随之现有检测手段墨汁染色（菌体）真菌培养（活菌）ELISA（荚膜多糖抗原）乳胶凝集法（荚膜多糖抗原）胶体金法（荚膜多糖抗原）现有检测手段墨汁染色（菌体）1.印度墨汁染色：

敏感性差，阳性检出率很低2.脑脊液或血液培养（金标准）：

阳性检出率低，培养（2-10天）及鉴定时间长，易误诊3.抗原检测试验：

脑脊液和血清样本抗原检测的敏感性可达到97%和87%*，能实现早期快速诊断*TylerWarkentien,MD.IntJSTDAIDS.2010October;21(10):679–684.现有检测手段1.印度墨汁染色：*TylerWarkentien,隐球菌荚膜多糖抗原

由3种不同的单糖聚合而成是引起病理变化的主要毒性因子在菌体生长和繁殖过程中，GXM不断分泌到胞外通过发挥免疫抑制作用和免疫调理作用影响宿主免疫系统OscarZaragoza,etc..AdvApplMicrobiol.2009,68:133–216隐球菌荚膜多糖抗原GXM(Glucuronoxylomannan,GXM)：荚膜多糖抗原是隐球菌特有的分泌物，可以作为隐球菌感染的诊断依据隐球菌荚膜多糖抗原由3种不同的单糖聚合而成OscarZ

隐球菌病感染诊断现状一

产品介绍二

临床意义及适用科室三

相关标准四隐球菌病感染诊断现状一产品介绍二临床意义及适用科室三隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）原理隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）原理隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金免疫层析法）试剂盒组成隐球菌抗原检测试纸条50条样本稀释液滴定液阳性对照稳定性/储存方法2年有效期室温储存隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金免疫层析法）试剂盒组成特点无需样本预处理10分钟得到结果定性或半定量测定结果客观血清，脑脊液，血浆特点无需样本预处理样本收集及制备按照无菌操作收集脑脊液、血浆和血清样本。样本最多可以在2-8℃放置72小时。不反复冻融的情况下，样本可以在-20℃以下保存更长时间。样本在运输过程中应保持在2-8℃或者-20℃以下。样本收集及制备按照无菌操作收集脑脊液、血浆和血清样本。定性检测操作步骤简单5步，10分钟得到结果定性检测操作步骤简单5步，10分钟得到结果ELISA（荚膜多糖抗原）不能检测到的真菌：隐球菌和接合菌（包括毛霉菌、 根霉菌等）2、向1号试管中加入4滴样本稀释液。是引起病理变化的主要毒性因子吞噬细胞将菌吞噬消化后释放1,3-β-D-葡聚糖到血液中枢神经系统隐球菌病-神经内科IntJSTDAIDS.血清型灵敏度(ng隐球菌抗原/ml)样本在运输过程中应保持在2-8℃或者-20℃以下。1、以1:5作为初始稀释浓度，依次1:2稀释至1:2560。是引起病理变化的主要毒性因子AdaptedfromKozelandBauman,ExpertOpin.隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金免疫层析法）ELISA（荚膜多糖抗原）Perfect,etc.

注意：若对照条带未出现，则说明该检测无效，应重新检测。定性检测结果ELISA（荚膜多糖抗原）注意：若对照条带未出现，则半定量检测操作步骤1、以1:5作为初始稀释浓度，依次1:2稀释至1:2560。分别放置于10个微离心管中并编号1-10。2、向1号试管中加入4滴样本稀释液。3、分别向标号2-10的试管中加入2滴滴定液。4、将40μL样本加入1号试管并混匀。5、从1号试管中吸取80μL样本混合液转移至2号试管并混匀，依次进行稀释直至10号试管。6、10号试管中吸取80μL样本混合液并丢弃以保证试管内最终体积为80μL。7、将试纸条的白端分别没入试管中。8、等待10分钟，读取并记录实验结果。半定量检测操作步骤1、以1:5作为初始稀释浓度，依次1半定量检测操作步骤半定量检测操作步骤半定量检测操作步骤-2半定量检测操作步骤-2半定量检测(滴度)结果对于半定量滴定检测，患者的滴度应报告为产生阳性结果的最高稀释度。半定量检测(滴度)结果对于半定量滴定检测，患者的滴度质量控制阳性对照：将1滴样本稀释液加入试管中，再加入1滴隐球菌抗原阳性对照。阴性对照为：将2滴样本稀释液加入试管中。分别插入试纸条，10分钟后读取结果。依据本地、国家的法规及认证机构的指导方针或要求，可能需要做额外的质控检测。质量控制阳性对照：将1滴样本稀释液加入试管中，再加入1胶体金法和培养/墨汁染色对比CrAgLFApackageinsert(IMMY)灵敏度特异性胶体金法试剂盒95.83%99.84%墨汁染色86.39%100.00%真菌培养60.72%100.00%胶体金法和培养/墨汁染色对比CrAgLFApackage胶体金法和ELISA/乳胶凝集法对比血清型灵敏度(ng隐球菌抗原/ml)A

(新型隐球菌)B

(哥特隐球菌)C(哥特隐球菌)D(新型隐球菌)IMMY胶体金法1198IMMY乳胶凝集法284738062ELISA2823>2,000770其他厂家乳胶凝集法193794054TRKozel,Clin.VaccineImmunol.(2011)18:1292TRKozel,8thInternationalConferenceonCryptococcusandCryptococcosis(2011)灵敏度远远高于其他方法胶体金法和ELISA/乳胶凝集法对比血清型灵敏度(ng隐球隐球菌抗原分布时间感染血液脑脊液肺部脑膜炎肺以外无症状症状胶体金法隐球菌抗原检测的其他方法AdaptedfromKozelandBauman,ExpertOpin.Med.Diagn.(2012)6:245隐球菌抗原分布时间感染血液脑脊液肺部脑膜炎肺以外无症状症状胶胶体金法和乳胶凝集法对比

胶体金法乳胶凝集法检测时间10分钟长达60分钟样品预处理无需需要(蛋白酶处理血清)样品类型血清,脑脊液,血浆血清和脑脊液储存室温冷藏胶体金法和乳胶凝集法对比

胶体金法乳胶凝集法检测时间10分ELISA（荚膜多糖抗原）隐球菌病感染诊断现状儿童由于免疫系统不健全，也容易被隐球菌感染，一般儿童的脑脊液样本都会做隐球菌筛查隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金免疫层析法）隐球菌病感染诊断现状CrAgLFApackageinsert(IMMY)Perfect,etc.*TylerWarkentien,MD.VaccineImmunol.阳性检出率低，培养（2-10天）及鉴定时间长，易误诊隐球菌荚膜多糖抗原GXM(Glucuronoxylomannan,GXM)：3、分别向标号2-10的试管中加入2滴滴定液。乳胶凝集法（荚膜多糖抗原）对于半定量滴定检测，患者的滴度应报告为产生阳性结果的最高稀释度。隐球菌荚膜多糖抗原GXM(Glucuronoxylomannan,GXM)：

隐球菌病感染诊断现状一

产品介绍二

适用科室及临床意义三

相关标准四ELISA（荚膜多糖抗原）隐球菌病感染诊断现状一产品介绍适用科室及临床意义新型隐球菌感染可发生于全身多个部位，最常见的感染主要发生在中枢神经系统、肺部、皮肤等。适用科室及临床意义新型隐球菌感染可发生于全身多个部位，最常见中枢神经系统隐球菌病-神经内科隐球菌侵犯中枢神经系统最常见，包括脑膜炎或亚急性脑膜炎、散播型脑膜炎等。

临床症状：首发症状间歇性头痛、恶心及呕吐，伴低热、周身不适、精神不振等非特异性症状。随病情发展，头痛渐加重转为持续性、精神异常、躁动不安，严重者出现不同程度意识障碍。肺隐球菌病-呼吸科肺部是隐球菌侵入的门户适用科室及临床意义中枢神经系统隐球菌病-神经内科适用科室及临床意义皮肤黏膜隐球菌病-皮肤科

10%～15%的隐球菌病患者出现皮肤损害，比如出现丘疹、水疱、脓疱、传染性软疣样丘疹、痤疮样脓疱等症状。

儿童脑膜炎-儿科

儿童由于免疫系统不健全，也容易被隐球菌感染，一般儿童的脑脊液样本都会做隐球菌筛查免疫缺陷人群-感染科、器官移植科、ICU等新型隐球菌作为一种机会性感染真菌，主要侵犯免疫缺陷人群，如器官移植患者以及AIDS患者及使用免疫抑制剂人群等。

适用科室及临床意义适用科室及临床意义临床意义在撒哈拉以南的非洲地区，隐球菌脑膜炎是造成艾滋患者死亡的一种重要疾病，隐球菌抗原可以在病症发生的几周前被检测到。隐球菌抗原的检测对于隐球菌脑膜炎的预防有非常积极的作用。临床意义在撒哈拉以南的非洲地区，隐球菌脑膜炎是造成艾滋患者死血清型灵敏度(ng隐球菌抗原/ml)敏感性差，阳性检出率很低儿童由于免疫系统不健全，也容易被隐球菌感染，一般儿童的脑脊液样本都会做隐球菌筛查中枢神经系统隐球菌病-神经内科儿童由于免疫系统不健全，也容易被隐球菌感染，一般儿童的脑脊液样本都会做隐球菌筛查儿童由于免疫系统不健全，也容易被隐球菌感染，一般儿童的脑脊液样本都会做隐球菌筛查10%～15%的隐球菌病患者出现皮肤损害，比如出现丘疹、水疱、脓疱、传染性软疣样丘疹、痤疮样脓疱等症状。新型隐球菌感染可发生于全身多个部位，最常见的感染主要发生在中枢神经系统、肺部、皮肤等。隐球菌抗原的检测对于隐球菌脑膜炎的预防有非常积极的作用。胶体金法和培养/墨汁染色对比隐球菌荚膜多糖抗原GXM(Glucuronoxylomannan,GXM)：AdaptedfromKozelandBauman,ExpertOpin.隐球菌抗原的检测对于隐球菌脑膜炎的预防有非常积极的作用。10%～15%的隐球菌病患者出现皮肤损害，比如出现丘疹、水疱、脓疱、传染性软疣样丘疹、痤疮样脓疱等症状。样本在运输过程中应保持在2-8℃或者-20℃以下。临床意义

筛查了HIV感染病人进行隐球菌抗原预防的成本效益，使用隐球菌抗原可以显著降低成本血清型灵敏度(ng隐球菌抗原/ml)临床意义筛查了H临床意义荚膜多糖抗原是隐球菌特有的分泌物，是隐球菌感染确诊的依据。在感染的初期，荚膜多糖抗原就被检测到，因此是隐球菌病早期诊断的标志物。随着病情的发展，荚膜多糖抗原的含量会随之发生变化，还可作为病情监测的指标。临床意义荚膜多糖抗原是隐球菌特有的分泌物，是隐球菌感染确诊的G实验：检测真菌细胞壁特有成分1,3-β-D-葡聚糖吞噬细胞将菌吞噬消化后释放1,3-β-D-葡聚糖到血液不能检测到的真菌：隐球菌和接合菌（包括毛霉菌、 根霉菌等）G实验检测隐球菌为阴性结果的原因：隐球菌含1,3-β-D-葡聚糖的量少荚膜很厚，不易被吞噬细胞消化联合检测的意义G实验：联合检测的意义联合检测的意义联合检测的意义

隐球菌病感染诊断现状一

产品介绍二

适用科室及临床意义三

相关标准四隐球菌病感染诊断现状一产品介绍二适用科室及临床意义三阴性对照为：将2滴样本稀释液加入试管中。按照无菌操作收集脑脊液、血浆和血清样本。半定量检测操作步骤-2新型隐球菌作为一种机会性感染真菌，主要侵犯免疫缺陷人群，如器官移植患者以及AIDS患者及使用免疫抑制剂人群等。ELISA（荚膜多糖抗原）10%～15%的隐球菌病患者出现皮肤损害，比如出现丘疹、水疱、脓疱、传染性软疣样丘疹、痤疮样脓疱等症状。接受大剂量皮质类固醇或单克隆抗体（如阿仑单抗、英夫利昔单抗）和/或其他免疫抑制剂治疗的患者TortoranoAMetal.Perfect,etc.样本在运输过程中应保持在2-8℃或者-20℃以下。隐球菌侵犯中枢神经系统最常见，包括脑膜炎或亚急性脑膜炎、散播型脑膜炎等。384例真菌感染(318例侵袭性念珠菌感染；10%～15%的隐球菌病患者出现皮肤损害，比如出现丘疹、水疱、脓疱、传染性软疣样丘疹、痤疮样脓疱等症状。胶体金法和培养/墨汁染色对比血清型灵敏度(ng隐球菌抗原/ml)收录指南共识中声明，隐球菌荚膜多糖抗原的存在是肺侵袭性隐球菌病的的确诊证据之一阴性对照为：将2滴样本稀释液加入试管中。收录指南共识中资质认证资质认证物价标准（2014年版）物价标准（2014年版）物价标准（2014年版）物价标准（2014年版）谢谢大家谢谢大家HIV感染者器官移植患者接受大剂量皮质类固醇或单克隆抗体（如阿仑单抗、英夫利昔单抗）和/或其他免疫抑制剂治疗的患者其他无基础疾病的患者JohnR.Perfect,etc.ClinicalInfectiousDiseases2010;50:291–322

美国感染病学会的“隐球菌病治疗临床实践指南（2010年更新）”中指出，隐球菌病的易感人群主要包括：宿主因素HIV感染者JohnR.Perfect,etc.Cl半定量检测操作步骤-2半定量检测操作步骤-2联合检测的意义联合检测的意义10%～15%的隐球菌病患者出现皮肤损害，比如出现丘疹、水疱、脓疱、传染性软疣样丘疹、痤疮样脓疱等症状。接受大剂量皮质类固醇或单克隆抗体（如阿仑单抗、英夫利昔单抗）和/或其他免疫抑制剂治疗的患者吞噬细胞将菌吞噬消化后释放1,3-β-D-葡聚糖到血液血清型灵敏度(ng隐球菌抗原/ml)荚膜多糖抗原是隐球菌特有的分泌物，可以作为隐球菌感染的诊断依据对于半定量滴定检测，患者的滴度应报告为产生阳性结果的最高稀释度。隐球菌抗原的检测对于隐球菌脑膜炎的预防有非常积极的作用。2011,