五鹤续断洗脱液抗衰老作用及其机制

五鹤续断洗脱液抗衰老作用及其机制

五鹤延续是四川可持续科学的延续根，因为它起源于湖北省五峰县和鹤峰县。其性苦、微温,临床上主要用于治疗跌打损伤、骨折、腰椎骨质增生、先兆性和习惯性流产等症。其化学成分含皂苷、挥发油类、生物碱类和维生素E等。湖北的五鹤续断资源极为丰富,在民间已有广泛应用,有广阔的药用开发价值。研究发现五鹤续断根的水提液中存在着抗体、补体多糖、免疫调节活性的高分子活性成分及维生素E,其所含维生素E具有抗衰老以延长寿命、改善学习记忆力、降低胆固醇、抗肿瘤等作用。目前有关五鹤续断抗衰老作用机制的研究尚缺乏较完整的实验报道,为此,我们采集本地区五鹤续断进行抗衰老作用的实验研究,旨在为进一步研制开发该药提供实验数据。1材料和方法1.1实验材料1.1.1实验动物2月龄昆明种小鼠30只,体质量(20.0±2.1)g,雌雄各半,由华中科技大学同济医学院提供。1.1.2洗脱溶液的制备五鹤续断由恩施自治州中药材生产GAP示范基地提供,取五鹤续断干燥1kg打粉、过筛,用95%乙醇提取3次,再经大孔树脂吸附65%的乙醇洗脱,得洗脱液瓶装密封备用。D-半乳糖由上海恒信化学试剂有限公司生产,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)测定试剂盒为南京建成生物工程研究所产品。1.1.3主要设备电子分析天平,GL-20GII型高速低温离心机,UV-2450分光光度仪。1.2方法1.2.1颈背皮下注射5%d-半乳糖盐水组30只小鼠随机分为五鹤续断组、模型组、对照组,每组10只,雌雄各半。除对照组外,另两组均每天颈背部皮下注射5%D-半乳糖生理盐水溶液0.025ml/g,对照组每天颈背部皮下注射等量的生理盐水,连续注射42d。造模同时开始灌胃给药,五鹤续断组按20g/kg体重给药,对照组与模型组每天灌服等量生理盐水,连续用药42d。1.2.2小鼠器官指数测定将各组小鼠称重,摘眼球取血后,脱颈椎处死取出脾脏、胸腺、双侧睾丸或双侧卵巢并分别称重,计算小鼠器官指数,即器官指数=器官质量(mg)/鼠体质量(g)。1.2.3血清离心率摘取小鼠眼球取血约1ml,用高速低温离心机以3200r/min离心4min,取血清置于4℃冰箱储存待测。SOD、GSH-Px和MDA含量测定按试剂盒说明书进行。1.3统计学处理所有数据用SPSS统计软件进行统计学处理,计量资料用均数±标准差(x¯±s)(x¯±s)表示,组间比较采用t检验。P<0.05为差异有显著性。2结果2.1丸指数和卵巢指数与对照组比较,模型组小鼠的胸腺指数、脾脏指数、睾丸指数和卵巢指数明显降低(P<0.05);与模型组比较,五鹤续断组小鼠的胸腺指数、脾脏指数、睾丸指数和卵巢指数明显升高(P<0.05)。见表1。2.2gsh-px和mda含量的比较SOD、GSH-Px及MDA含量的影响与对照组比较,模型组小鼠血清中SOD、GSH-Px的含量明显较低(P<0.05),MDA含量明显高于对照组(P<0.05);与模型组比,五鹤续断组小鼠血清中SOD、GSH-Px的含量明显升高(P<0.05),MDA含量明显低于模型组(P<0.05)。见表2。3皇病人与免疫增强作用机制研究表明,免疫系统从根本上参与正常脊椎动物的老化,是老化过程中的调节装置,生物体依赖于免疫系统防御疾病,衰老与免疫功能的降低程度平行,病死率与免疫功能成负相关。据此Walford提出衰老的免疫学说,认为衰老是一种流行性免疫病。本实验结果显示,模型组小鼠的胸腺指数或脾脏指数明显低于对照组和五鹤续断组,提示胸腺和脾脏重量的降低、萎缩,功能衰退,五鹤续断组明显提高了衰老模型小鼠的胸腺指数或脾脏指数。而胸腺为中枢淋巴器官,具有重要的免疫调节作用,能够分泌多种细胞因子,促进T细胞成熟,在建立自身免疫耐受和维持免疫自稳方面发挥重要作用。脾脏属于外周免疫器官,也具有重要的免疫功能。有学者认为胸腺和脾脏重量指数的改变能够反映机体免疫功能的状态。本实验结果表明五鹤续断在一定程度上可增加免疫器官的质量,预防胸腺、脾脏萎缩,具有免疫增强作用。因此五鹤续断抗衰老作用机制可能与预防免疫器官萎缩、提高免疫功能有关。1985年Finch等人提出,衰老可以被认为是神经指导下的内分泌激素随龄衰减而引起的身体各部的功能逐渐丧失,即所谓神经内分泌衰老学说。其中主要是:下丘脑-腺垂体-中心控制荷尔蒙的分泌变化,继而影响身体各个系统的正常功能。本实验中模型组小鼠的睾丸指数和卵巢指数明显低于对照组和五鹤续断组,提示睾丸和卵巢指数的降低、萎缩,功能衰退,五鹤续断组明显提高了衰老模型小鼠的睾丸指数或卵巢指数,说明五鹤续断在一定程度上可延迟性腺的萎缩,维持生殖功能,其作用机制可能与下丘脑-腺垂体-性腺轴有关。1956年DenhamHarman提出衰老的自由基学说,认为衰老过程中的退行性变化是由于细胞线粒体呼吸氧化代谢过程中产生的氧自由基损伤DNA、蛋白质和脂质造成的机体各组织器官的老化。生物正常代谢过程所产生的氧自由基,如能及时被机体防御系统所清除,就不会造成危害,反之,若不被完全清除,蓄积的自由基就会攻击生物大分子,使之遭到损伤,导致人体衰老。生化研究还发现SOD和GSH-Px广泛存在于生物体各组织细胞中,是生物活性氧的重要清除剂酶类之一,SOD能促使过氧化物游离基转化成过氧化氢,GSH-Px为生物体中清除过氧化氢和其他有机过氧化物的脱毒酶。MAD为自由基作用于脂质发生过氧化反应的终产物,会引起蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合,且具有细胞毒性。因此提高SOD和GSH-Px的活性,降低MAD的生成,是延缓衰老的重要途径之一,本实验发现五鹤续断洗脱液能提高衰老模型小鼠血清SOD和GSH-Px的活性,降低MDA含量,说明五鹤续断洗脱液可提高机体防御系统清除氧自由基的能力,避免脂质过氧化物对细胞结构和功能的破坏,从而发挥其抗氧化、抗