浮小麦与小麦止汗作用及相关的主要成分含量比较

浮小麦与小麦止汗作用及相关的主要成分含量比较

漂浮小麦和小麦是水稻科的一种果实。《本草蒙筌》中记载:“浮小麦,先枯未实,敛虚汗功效如神”。《卫生宝鉴》中有记载独圣散即浮小麦的功效:“治疗盗汗及虚汗不止。浮小麦,文武火炒令焦,为细末,每服两钱,米饮汤调下,频服为佳”。另外《本草纲目类编》中记载浮小麦的功效主治为:“益气除热,止自汗盗汗,骨蒸虚热,妇人劳热”。“小麦具有除客热,止烦渴咽燥,利小便,养肝气止漏血唾血。《别录》谓‘养心气,心病易食之’”。从古文献记载来看,浮小麦与小麦功效不同,两者不能混淆使用。但是现在市场上常出现用小麦伪充浮小麦做为药用。目前还未见关于两者药效及化学成分比较方面的文献报道。本实验就止汗的功效对浮小麦及小麦进行研究,并对它们所含化学成分的含量进行初步分析,为以后对两者更深入的研究提供基础依据。1实验材料1.1实验动物健康SD大鼠40只,雄性,体重180~220g,购自山西医科大学实验动物中心。1.2加味草质茎、核桃仁、甘草的制备浮小麦与小麦分别为禾本科植物小麦TriticumaestivumL.的干燥轻浮瘪瘦和成熟的果实,采自山西省临汾市曲沃县南属寺村,为同一麦田同时采集而得。麻黄为麻黄科植物草麻黄EphedrasinicaStapf的干燥草质茎、桂枝为樟科植物肉桂CinnamomumcassiaPresl的干燥嫩枝、杏仁为蔷薇科植物杏PrunusarmeniacaL.的干燥成熟种子、炙甘草为豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.的干燥根及根茎经炮制而得,均购自同仁堂药店。上述药味经我院鉴定教研室裴香萍副教授鉴定均为正品。麻黄汤煎药方法:根据《伤寒论》中麻黄汤的比例(麻黄9:桂枝6:杏仁6:炙甘草3)及煎煮方法,制备其水煎液。具体方法为:加水10倍,将饮片浸泡30min,先煎麻黄20min,去末,再纳余药共煎30min,纱布过滤去渣,浓缩至所需浓度。5-二十一烷基间苯二酚对照品为自制,纯度大于98%,甲醇为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯。1.3超声心理仪器OlympusDP22正置荧光显微镜;Waters2695(美国)高效液相色谱仪;十万分之一天平(梅特勒公司);KQ3200E超声波清洗器(昂山市超声仪器有限公司);EL204万分之一天平(上海精密仪器有限公司)。2止汗效药实验2.1动物组180~220g雄性SD大鼠随机分成4组,分别为正常对照组、麻黄汤组、浮小麦组和小麦组,各10只。2.2浮小麦粉的制备动物适应饲养1周,室温20~25℃。1周后,每天上午九点正常组与麻黄汤组灌胃蒸馏水,浮小麦组灌胃浮小麦水煎液1.5mL/100g,小麦组灌胃小麦水煎液1.5mL/100g,灌胃8d。根据普通高等教育“十五”国家级规划教材《中药学》中浮小麦的用量为15~30g,小麦的用量为30~60g,《中华本草》及《中药大辞典》中小麦的用量也高于浮小麦,所以煎得浮小麦的浓度为每1mL药液含生药0.178g,小麦的浓度为每1mL药液含生药0.267g。末次给药5h后麻黄汤组、浮小麦组、小麦组分别灌胃麻黄汤水煎液(相当于每1mL药液含生药0.64g)1.5mL/100g,称重并禁食禁水3h,3h后再次称量各组大鼠的体重。灌胃麻黄汤30min后,将大鼠固定于大鼠固定器内,右后足固定于固定器外,用棉签蘸取无水乙醇轻轻将足趾部污物擦洗干净,于大鼠足趾部皮肤涂上和田-高垣氏试剂A液,待充分干燥后,再薄涂一层B液,于15min后用20倍放大镜计数深紫色着色点(即汗点)的数目。和田-高垣氏试剂的配制法:取2g碘溶于100mL无水乙醇即成A液;取可溶性淀粉50g与蓖麻油100mL混合均匀即成B液。第9天起,空白组与麻黄汤组灌胃蒸馏水,浮小麦组灌胃浮小麦水煎液,小麦组灌胃小麦水煎液(剂量同上),灌胃3d。末次给药5h后,麻黄汤组,浮小麦组,小麦组分别灌胃麻黄汤水煎液(剂量同上)。50min后处死大鼠,切取大鼠足趾部肉垫皮肤,甲醛固定,乙醇脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,切片,HE染色,装片。在显微镜下观察汗腺细胞,记录细胞总数和空泡细胞数,计算百分率。2.3结果2.3.1浮小麦对大鼠棉粉汗次数的影响结果显示,室温时麻黄汤组大鼠灌胃麻黄汤后,其汗点数较正常对照组显著增多(P<0.01)。浮小麦与麻黄汤组相比,汗点数有差异。(P<0.05),小麦组与麻黄汤组汗点数没有显著差异(P>0.05),见表1。2.3.2不同温室下大鼠体重减少量比较体重减少率按公式(给麻黄汤后体重-3h后体重)/给麻黄汤后体重×100%计算。室温时,麻黄汤组大鼠灌胃麻黄汤后,其体重减少量较正常组比较显著增多(P<0.01)。浮小麦组与麻黄汤组比较,大鼠体重减少量有显著差异(P<0.01),小麦组与麻黄汤组大鼠体重减少量没有显著差异(P>0.05),见表2。2.3.3大鼠足跖腺导管扩张情况与正常组比较,麻黄汤组大鼠足趾汗腺导管扩张,腺体扩张,腺上皮胞浆丰富,分泌旺盛,出现核下空泡,空泡发生率显著增多(P<0.01)。浮小麦组大鼠足趾汗腺导管扩张不明显,与麻黄汤组比较空泡发生率有显著差异(P<0.01),见表3。小麦组与麻黄汤组比较,空泡发生率无差异(P>0.05),见插页Ⅺ图1。3重量测定3.1流动相、测定波长色谱柱DiamonsilC18(4.6mm×250mm,5μm);流动相为甲醇-水(95∶5);检测波长为203nm;柱温为30℃;流速1mL·min-1;进样量10μL。理论塔板数以3号共有峰5-二十一烷基间苯二酚峰计不低于5000。对照品及浮小麦样品色谱图,见图2。3.2供试品溶液的制备对照品溶液的制备:取5-二十一烷基间苯二酚适量,精密称定,加甲醇制成0.259g·L-1的溶液,摇匀,即得。供试品溶液的制备:取同一产地同时采收的浮小麦与小麦,粉碎,过3号筛,称取浮小麦及小麦各5g,分别精密称定。分别精密加入95%乙醇25mL,称定重量,加热回流1h,放冷,再称定重量,用95%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,经0.45μm微孔滤膜滤过,即得。3.3方法的线性关系和稳定性将所制备的对照品溶液,分别稀释不同的浓度,按上述色谱条件注入液相色谱仪进行测定。得到回归方程Y=5056.5x+201.5(r=0.9999),表明5-二十一烷基间苯二酚在129.5ng~2590ng与峰面积呈良好的线性关系。精密吸取对照品溶液(0.0518g·L-1)10μL,连续进样6次,测得其峰面积积分值RSD1.42%(n=6),表明仪器精密度良好。取同一浮小麦供试品溶液,分别于配制后的0,2,4,6,8,10,12h测定5-二十一烷基间苯二酚RSD为1.08%(n=6),表明供试品溶液在12h内具有良好的稳定性。取同一批浮小麦样品,制成供试品溶液,测得样品中5-二十一烷基间苯二酚RSD为1.88%(n=6),表明本含量测定方法重复性较好。精密称取已知含量的样品6份,分别精密加入5-二十一烷基间苯二酚对照品适量,按供试品溶液制备方法,制得供试品溶液,按上述色谱条件测定,计算得平均回收率为101.26%,RSD为1.89%。3.4峰面积积分值的计算浮小麦与小麦按供试品溶液的制备方法平行制备2份,注入液相色谱仪,测定1-4号化合物的峰面积积分值,其色谱图,见插页Ⅺ图3。以5-二十一烷基间苯二酚为指标计算各个化合物的含量,见表4。由上表可知,浮小麦所含5-二十一烷基间苯二酚的含量为小麦的1.54倍,所含1号、2号、4号化合物的含量为小麦的2.22、1.66、0.85倍。4浮小麦的功效本实验就止汗功效,以大鼠足趾部位汗点数、大鼠体重差异、大鼠足趾部位空泡发生率为指标,对浮小麦和小麦进行了止汗功效的研究。实验结果表明浮小麦具有显著的止汗作用,小麦作用不明显。无论从古文献记载,还是现代临床报道,浮小麦与小麦的功效是不同的,但是,现在药材市场上还经常出现小麦伪充浮小麦做为药用,不少医生在临床应用两者时不分其功能主治,误认为小麦即浮小麦,或两者互相替用。本实验为两者的临床应用,提供了一定的理论依据,更充分的说明两者在临床上应区别入药,不能混淆使用。从现有文献看,还未见有关于浮小麦化学成分的报道。本实验首次对浮小麦药材进行提取分离纯化,从中分得5-二十一烷基间苯二酚等单体化合物。本实验仅在上述色谱条件下,对两者共有的化合物以5-二十一烷基间苯二酚为指标性成分进行了比较,发现两者共有化合物的含量有一