饵料生物调查识别与生物饵料培养技术-微生态制剂的应用技术

光合细菌的扩培和应用3、光合细菌的培养方法灭菌消毒灭菌1、工具、容器的灭菌高压蒸汽灭菌（121℃、20-30min）干热灭菌（烘箱，150-160℃、2h）2、培养基的灭菌常压蒸汽灭菌（牛奶、明胶）过滤灭菌（赛氏过滤器、微孔过滤器）高压蒸汽灭菌注射器过滤除菌日常管理操作和测试搅拌和充气：保持菌体悬浮，并接受光照，DO小于1mg/L调节光照强度：40μE/M2/S～100μE/M2/S温度调节：23℃～39℃酸度测定和调节：用酸调节pH界于7～8测定光密度：确定培养物的菌细胞浓度，了解光合细菌的生长情况生长情况的检查测定培养液的光密度（分光光度仪）光密度值增加越快，菌体的繁殖也越快观察菌液的颜色及其变化菌液的颜色正常，接种后颜色迅速由浅变深，说明菌体繁殖快反之，培养液出现非正常颜色，菌体附壁或颜色不见变深，则多半是培养过程中出现的问题分光光度仪测定菌体生长密度（OD）光谱范围：599-600波段OD值为1.0时，对应细胞数约为1.0*109采收的光合细菌可直接使用，也可贮存直接采收：浓度低，运输贮存不便浓缩或进一步加工成固体：浓度提高10倍，达5×109细胞/mL～10×109细胞/mL，减少运输和贮存成本

浓缩的方法：黑暗静置沉淀过滤浓缩加絮凝剂连续离心4、光合细菌的检验（一）检验标准：１、微生物指标：菌落形态

光合细菌稀释后在琼脂培养皿上培养，菌落形态为草帽形或园形，表面光滑，少隆起，边缘整齐，棕红色。菌体形态

显微镜下观察，光合细菌菌体形态为短杆状或卵园形，宽0.5-0.9微米，长1.2-2.0微米，无芽孢，无荚膜，单极鞭毛，可运动。革兰氏染色阴性

2、感观指标

光合细菌为红色悬浮液体，带培养基发酵味，长时间静置红色悬浮菌体会逐渐下沉，振荡后可恢复悬浮液状，无臭味。3、光合细菌含量

总菌数不低于30亿个/ml30*109

活菌数不低于20亿个/ml20*1094、理化指标

酸度PH6.5-7.0

电导率6－8ms/cm

5、光谱指标

光吸收植A660＞1.5

A490＞2.5

A805＞1.7

A860＞1.9

6、卫生指标

沙门氏菌无

黄曲霉素B1(mg/Kg)＜0.02

总砷（AS）(mg/Kg)＜0.5

铅(mg/Kg)＜2.0

（3）培养中的菌液一滴做涂片，自然干燥，酒精灯火焰固定，经初染（结晶紫），媒染（路氏碘液），脱色（95％乙醇），复染（番红染液）后，油镜（16×100）观察，菌体呈红色。2、感观检验量取样品500ml，置三角瓶中，用肉眼观察颜色，用嗅觉检察嗅味。长期静置已有沉淀的产品应先振荡或搅拌10－20秒后再取样。

3、含量测定（１）总菌数测定：样品充分振荡后取0.5ml用水稀释到200ml灭菌水中，搅匀后从中取数微升充板入血球计数板的计数池中（每大格0.1mm3，置600倍显微镜下观察，同时用红血球计数法记菌数，将25个小格的每格菌数平均值乘1亿为每毫升总菌数。（２）活菌数测定：将（１）中稀释的菌液再稀释100000倍，取1ml加到10ml培养液中，混合均匀后加入20g/1000ml浓度琼脂溶液10ml，置平皿中凝固，加玻璃盖在25－30℃温度，无菌环境下，60瓦白炽灯照射，距灯泡12cm，1－2天后观察计数菌落数，以下式计算：

每毫升样品中的活菌数＝菌落计数/25×1亿

4、理化指标测定（1）酸度测定

以不低于0.01PH值精度的酸度计，直接于20ml样品中测量。（2）电导率测定

以DOS－IIA型（或同等精度其它型号）电导仪直接于20ml样品中测量。5、光谱指标测定

取0.5ml样品置3ml容积，1cm光径比色杯中，加入2ml蒸馏水，以蒸馏水为对照，在可见分光光度计中读取660nm、490nm、805nm、860nm波长处光吸收值，再乘5得到以上几个波长处的光吸收值。6、卫生指标检验（略）室内小型培养光合细菌简易培养光合细菌简易培养第一步往5L瓶子里面灌水（注意注水量）第二步准备菌种第三步光合细菌培养基1袋（粉剂）第四步准备：100ml的量杯1个，2000ml的量杯1个第五步将摇晃均匀的菌种，倒入2000ml的量杯中，至1000ml的位置第六步将1000ml的菌种，倒入放好水的瓶子中。第七步