冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处之欧阳与创编

欧阳与创编 欧阳与创编 2021.03.08欧阳与创编 欧阳与创编 2021.03.08冰冻切片和;H蜡勿片各自的忧劣M处是什么时间:2021.03.08创作：欧阳与2v 从—抗的逹撵方面来看。有的〜筑既能做；5蜡切片只能黴冰冻切片，而有的〜抗只能做冰冻切岸，耒键取决于所要检测的抗原稳定牲，有的抗原不稳定，经过组织固定，脫水、透明"浚蜡、包埋.脫蜡等〜菜列的戲方蜡切岸的步骤，所检测的筑原彥狱陂坏，达时只能用冰冻切片来做，检测这类玩原的—抗只能做冰冻切岸，而那密稳定的扰原，能经受住；E蜡切岸的的考验，〜般来讲也可叹用冰冻切片采做，惑得来讲，对于既可叹用冰冻切片也可叹用；5蜡切片检测的筑原，用；5蜡切岸检测的染更效慕要兀冰冻切岸好〜些。从研究目的采看。方蜡切片对组织细腮的定辰很准确，而兴期冻存组织的冰冻切片可能因冰晶的形庆陂杯组织细慰形态的结构，养造庆抗原的弥散，从而定辰不准确。3、 从筑原的保真牲来看。冰冻切片对筑原的保奠很好，而；5蜡切片在组织阖定，脫水.透咏漫蜡、包埋、脫蜡等辽程中可能会对筑原的牲质造庆影 响 。从操年步辣的繁琐程度看。染鱼过程冰冻切岸筒单，而；5蜡切片要来脫蜡入水.抗原修夏茅辺程， 比 较 繁 琐。5、 惑宅，方蜡切片对标卒的長期保存较合适，且组织细慰形愆结构保药好；而冰冻切片适合对新鲜组织的制片，然后云即固定、染匡效果较好，且免疫荧死中可叹相对避免；5蜡目发荧充的干扰。冰冻切岸ffrozensection；是〜种在低温条T牛下T更组织快速冷卸對—定硬度，然后迸行切片的方法。因其制年邀程较帀蜡切片快捷、简便，而多应用于手木中的焼連病理诊断。冰冻切片的种类较多，有低温帳冷箱冰冻切岸法，二氧化碳冰冻切岸法，甲醇擔环制冷冰冻切岸法等。达些方法，陵着时代的变迁，科技的发展，许多年前披认为是非常重要的技木，现在也逐步皴淘沐了。肖然有些技木，如低温惶冷箱冰冻切片法，正在受對青睞。褊辑卒反冰凍切片的应用(\)在手木进行中，突然发现病人的病变与原诊断，原定手术方秦不相符合，灰者坏融时，需要病理确定。了解淋巴结內是否有铃移的肿瘤细鬼，蛍者转移的程度，叹利于确定是否需要彻底扫除淋巴结奏者其它的治疗措施。对于吕确定为恶惟肿瘤的患者，则霜要了解具手术范围是否足毎，上下切缘是否有残存的肿瘤组织。C4丿在傲刮腹探重时所发现的肿块茨者舁样的组织。显示组织中的脂肪和脂类移质，这常兄于某些病例如脂肪瘤及肉瘤，某些科研组织尋。某些酶的显示如ATP酶,琥珀酸脫氮酶<0神经病理学技术中的某些染更法如：Eager氏法,Marchi氏法,Cajal氏法,Hortega氏法和Holzer氏法尊。(S)对某些移质所迸行的免疫荧死的研宪。褊辑卒股冰凍切片的制乍方法仮?K惶冷荫冷凍切片制乍法叹ShandonAs620E生惶温箱冷冻切岸机为例，该机的箱面上有电子控制板，装有即时冷冻键和除霜键，启动即时冷冻键，机器专上迸行工年狀愆，养刁持续lOmins。启动即时除霜键，可将工年间顶部后面的制冷柵上的霜除掉，弄可持续15mins。有照明键〜个，启动该键刁照明工年间，有利工年及观察组织的冰冻狀况。配有消零键〜个，当进行〜周的工年茨者八天的工年后，启动该键，巧对工佑间迸行消尋。当每天工乍完竽时，可启动密锁键，琐住工年间。除此M外，箱面的左迄有四个按键，两个为快速目动迸謳键，两个为微小进追键，还有〜个手动症钮,调节修组织块时的迸返。冷冻箱內左迄的冷冻合，温度可迄・60°C左右，冷冻箱的中间为〜合切片机，工年间的温度在0・30°C间可任竜调节，弄在箱面上的荧屏显示岀来。捧Tfe方法及步探取材，未能固定的组织取材，不能太大太厚，厚者冰冻赛时，大者难叹切完整，最好为24x24x2mm0取凹组织支承器，放平摆好组织，周迄滴上包埋剂，速放于冷冻合上，冰冻。小组织的应先取〜支承器，滴上包埋剂让基冷冻，形廉〜个小合后，再放上细小组织，滴上包埋剂。将冷冻好的组织块，夬紧于切岸机持萃器上，启动粗迸返键，转动徙钮,将组织修平。调好欲切的厚度，根据不同的组织而定，原则上是细腮赛集的薄切，纤维多细慰稀的刁稍为厚切，~般.在5~10um间。调好彷卷板。制年冰冻切片，耒键在于防卷板的调节上，达就要来操年者要细心,准确也将其调较好，调校至适当的伝置。切岸时，切岀的切片能在弟〜时间顺利如通过刀防卷板间的通道，平整地躺在荷刀器的铁板上。达时便可揪超防卷板，取〜载玻岸，将宴附贴上即刁。应税不同的组织逹撵不同的冷冻度。冷冻箱中冷冻度的高低，至要根据不同的组织而定，不能〜概而丫仑。如：切耒经固定的脑组织，肝组织和淋巴结时，冷冻箱中的温度不能调太低，在-10--15°C左右，切甲狀腺-脾"肾、肌肉等组织时，可调在・15〜20°C左右，切带脂肪的组织时，应调至-25°C左右，勿含大量的膳肪时，应鴉至・30°C。冰凍切岸时的注瘪享顾彷卷板及切片刀和持刀架上的板块应保荷干净,需经常用毛笔挑除切炖残余和用柔软的纸张擦。有时需要参切完—張切炖后就用纸擦—次。因为这个也方是切岸通过和附贴的地方，如慕有残余的包埋剂粘于刀茨板上，将会帔杯甚至撕裂切片，便切岸不能完整切岀。多例多块组织同时需做冰冻切岸时，可各自放于不同的支承器上，于冷冻合上冻超来，然后依据不同的编号，依序切片，达样做既不费时迩不会乱。放置组织冰冻前，应稅组织的形状及走势来放置，所谓“欣柴看柴势"，切片也是如此，如果胡孔放置，就不能收到很好的玫棗。组织块不须经各种固定液固定，尤其是含水的固定液，在耒迄到阖定前，更不能废用。焙床快速冰冻切片，不须要预先固定，〜是为T争取时间，二是阖定了的组织，反而增加t切岸的难度。如耒废用耒完全固定的组织做冰冻切片，就会岀现冰晶。达是因为舍水的固定液在组织耒经園定前，其中的水份也可滲入到组织中去，肖冰冻发生时，达些水份就存留于组织中，形廉了冰晶。当切岸时，如棗发现冰冻过度时，可将冰冻的组织连同支承器取曲来，在室温停留片刻，再行切片，茨者用口中哈乞，茨看用大期指按压组织块，叹此来钦T匕组织，再行切片。另奢,凋高冰冻点。用于附贴切片的载玻岸，不能存教于冷冻处,于室温存放即巧。因为为附贴切岸时，从室温中取凹的载玻岸与冷冻箱中的切炖有〜种温度差，为温度较高的载玻岸附贴上温度较低的切片时，由于两种畅质间温度的差刃，当它芮碰撞在〜超时，分子彼此间发生韩移而产圭了—种吸附力，便切片与载玻片牢阖如附贴在—起。如棗废用冷藏的载玻片来附贴切岸，田于温度相同，坎有发生上连的现象。冰冻刼样的快速雜匡法冰冻切片附贴于载玻岸后，云即放入幔冷箱中的阖定液固定1分钟后即可染匡。叹注，为T防止切岸脫落，为切片附贴于载玻片后，即用电吹风吹干后再阖定。根据实验对坨现为达种做法欠妥禾经阖定的切片，强热乍用后，蚕白发主变惟，核内舍有的扬质田于热的年用融合在一超，染匡后鏡下分辨不曲核內的各种牛多质。冰冻切片附贴于载玻岸后，云即放入怛冷箱中的阖定液固定，达样可叹便切片中细聰內各种扬质都在坎有任阿变比的情况下拔固定起来，核染更质清晰，核仁明显，其他移质都完好保存。方法：切岸固定30秒-1分钟。水洗。染荻不素3-5分字中。分丫匕。于獗水中返蓝20秒。伊红染更10-20秒。脫水，透明，中性树胶封固。冰冻组织1-2分钟，切岸1分字中，阖定1分钟，染匡兴五分钟。愆兴在10分钟内完庆恢速制片过程，结棗与方蜡切片不相上下。冰冻切岸的方法还有很多种，如甲醇擔环的半导体冰冻切岸法，二氧Y匕碳冰冻切岸法，半导体冰冻切片法和氟乙烷冰冻切片法等，达些方法在目前采说己很少佼用，因此在达里不年阐述。編辑本股忧缺术(―)w＜：筒便，巧叹不需要对组织阖定、脫水、透明、包埋茅手续即可进行切岸，滅少了•〜些中间环To快速，用时短。组织变比不大。能很好保存脂昉，类脂等庆分。能毎坨较完好也保存各种抗原话性及曙类，持列是对于那些对有机溶剂茨热的温度耐受能力较差的细腿膜表面筑原和水解酶保存较好。不容易做连续切岸。切取的组织不能过大，组织过大不容易冻结奏者组织冻结不均，影响切岸及染更玫果。不容易制淮较薄的切片。组织块在冻结辽程中容莎产主水的结晶而影响细慰的形愆结构及抗原牛多质的定任，养且组织结构迩不如75蜡切岸清晰。編辑杂股冰冻切片擇淮:中萌注意事顼祈鲜曲組织紀备组织尽刁能新鲜、骤冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的骤冷剂有：①CO2乞f-78°CJ②丙酮干冰冷卯的轻方油醸.乙垸和康烷C-80°C丿③液氮f-190°CJ④液氮冷却Bm丙烷C-19°C)o液氮适用于组织丫匕学，较安全。缺点：组织块易发主龟裂。冏定组织的制备为彷止水解競和其他牛乡质的移伝、弥散，常用4°C、24小时的甲醛阖定能很好地保存酶类。但对许多脫氮酶和转移酶能灭话。枚不宜废用，低温，冷甲醛短时间阖定C10分钟左右丿固定，可显无琥珀酸脫氮酶。电镜凹现后，霜要保存细腮的逑微结构，叹4%缓冲戌二醛C25%氐二醛16ml；0.1M二甲月申酸CpH7.)84ml；蔗糖8g丿固定较好。达些固定液至要用于水解酶，而不适于许多氧比还原酶和转移酶。C3J忸冷箱渥凌〜股在冷冻后10分钟，到接近冷室温度时再切，〜般组织在-15 20°C切岸最易庆功。蚕种组织有其合适的切片温度、刀的温度和冷室温度，Pearse及Bancroft的经验如下：组织刀温度组织温度帳冷箱温度肝-18-10-5肾-15-8-5皮肤-35-10-5脑-18-5-5固定组纟只一股高3-5度C4J切片机的1R用筑卷板的前缘与刀面须有足绑的距离，T更切片平