免疫学应用-本科

免疫学应用免疫教研室赵俊杰

2012.5掌握：抗原或抗体检测的基本原理；凝集反应、沉淀反应的概念及方法。人工主动免疫和人工被动免疫的概念和特点。

熟悉：熟悉免疫标记技术的常见方法；免疫预防和免疫治疗的基本概念和种类。了解：细胞因子的检测。免疫重建的概念；常用免疫增强剂、免疫抑制剂及新型疫苗的发展。

目的要求免疫学检测免疫预防免疫治疗免疫学检测利用免疫学原理建立的免疫学检测技术主要应用于对多种免疫性疾病（感染性疾病、免疫缺陷病、超敏反应、自身免疫病、移植排斥反应和肿瘤等）的诊断、疗效评估、发病机制探讨、以及对抗原性物质或免疫细胞的定性、定量，对细胞因子、粘附分子及细胞受体的检测等。

抗原或抗体检测免疫细胞的检测免疫分子的检测一抗原或抗体的检测抗原-抗体反应：指抗原与相应抗体在体内外高度特异性结合。在合适体外条件下可呈现凝集、沉淀等现象。抗原或抗体的检测即用肉眼观察或借助仪器对样品中的抗原或抗体进行定性、定量或定位检测。抗原-抗体检测技术应用1.已知的抗原检测未知的抗体2.已知的抗体检测未知的抗原3.体内各种大分子物质4.已知抗体检测半抗原抗原抗体反应的特点

特异性：抗原表位和抗体可变区之间的空间构象互补可见性：抗原抗体比例可逆性：非共价可逆性结合

抗原抗体比例对反应现象的影响

1电解质：抗原-抗体反应通常应用0.85%的氯化钠作为稀释液，以供给适应浓度的电解质。2温度：一般常使用反应在37度水浴或孵育箱中进行。3酸碱度：抗原-抗体反应适应的酸碱度一般为PH6～8。4.抗原和抗体的性质抗原-抗体反应的影响因素抗原-抗体反应检测方法凝集反应沉淀反应补体参与的反应免疫标记技术凝集反应（agglutination）细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集现象，称为凝集反应。

直接凝集：将细菌或红细胞与相应的抗体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。又分为玻片法和试管法。

间接凝集：将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶颗粒表面，与相应抗体反应出现颗粒凝集现象。沉淀反应（precipitation

）

可溶性抗原（血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等）与相应抗体结合后，在一定条件下，出现肉眼可见的沉淀。补体参与的反应

补体结合试验是一种有补体参与，并以绵羊红细胞和溶血素（红细胞的特异抗体）是否发生溶血反应作指示的一种高灵敏度的抗原与抗体结合反应。免疫标记技术

用荧光素、酶或放射性核素等标记抗体或抗原，进行抗原抗体反应，提高了抗原抗体反应的敏感性。免疫荧光法：常用FITC、PE等酶免疫测定：常用HRP、AP等放射免疫测定：常用125I和131I化学发光免疫分析免疫印迹(WesternBlot)二免疫细胞的检测

检测各群体淋巴细胞的数量与功能是观察机体免疫状态的重要手段。外周血是病人主要的检测标本，但仅代表再循环的淋巴细胞。实验动物还可取胸腺、脾、淋巴结等作为标本进行检查。PBMC多形核白细胞红细胞血浆分离液玻璃平皿单核细胞吸附,未吸附的为淋巴细胞.根据比重的不同将血液离心分层取PBMC（1）免疫细胞亚类及计数

1.外周血单个核细胞的分离常用密度梯度离心法

2.亚群的分离尼龙棉柱分离----B细胞

E花环分离---------T细胞流式细胞术免疫磁珠TE花环

3.淋巴细胞亚群的计数根据表面标志不同，分类计数免疫荧光

CDC

（2）免疫细胞功能测定

1、T细胞功能试验：T细胞增殖试验3H-TdR掺入法

MTT法细胞毒试验2、B细胞功能测定：溶血空斑试验3、皮肤实验：检测细胞免疫功能三免疫分子的检测1.Ig检测已知抗原检测已知抗体定性、定量检测：免疫比浊等2.C检测免疫比浊、ELISA、RIA等。3.CK检测

增殖法、集落形成法、胞毒活性测定PCR、原位杂交技术等。4.CD分子等检测

相应抗体鉴定5.HLA分型

免疫预防应用生物制品接种，使机体产生对相应疾病免疫力的方法。

中国古代种人痘Boywithsmallpox

1979年WHO宣布在全球范围内消灭了天花病毒。人工免疫概念及种类

人工免疫：指有计划、有目的地给机体输入抗原、特异性抗体或免疫细胞等制品，使机体获得对某种疾病的特异性抵抗力，从而达到预防或治疗某些疾病的方法。人工主动免疫人工被动免疫

人工主动免疫：是给机体输入疫苗或类毒素等抗原物质，剌激机体产生特异性免疫力。

1、灭活疫苗：用物理或化学的方法将病原微生物杀死制备而成的制剂。又称死疫苗。

2、减毒活疫苗：用人工变异或从自然界筛选获得的减毒或无毒的活的病原微生物制成的制剂。又称活疫苗。

3、类毒素：用0.3-0.4%甲醛处理外毒素，使其失去毒性，保留抗原性的物质。

4、新型疫苗：亚单位疫苗、合成疫苗、基因工程疫苗人工被动免疫：指应用人工的方法直接给机体输入免疫效应分子，使其获得特异性免疫力，到达紧急预防和治疗的目的。

1、抗毒素：是抗细菌外毒素的抗体。多为马血清制剂，具有抗体性和免疫原性。

2、人丙种球蛋白：从正常人血浆或健康产妇胎盘中提取制成。

3、人特异性免疫球蛋白：来源于恢复期病人及含高价特异性抗体供血者血浆，或接受类毒素和疫苗免疫者的血浆。项目人工主动免疫人工被动免疫输入物质抗原抗体产生免疫力时间慢（2-3周）快（输注