HIV抗体初筛试验

HIV抗体筛查试验山西医科大学第二医院检验科郭先锋

HIV抗体检测的目的和要点目的诊断血液筛查监测要点根据目的选择检测方法及检测策略!严格遵守实验室SOP筛查试验阳性—需做确证试验筛查试验阴性—不应做确认试验筛查及确证试验均应做好咨询工作HIV抗体筛查试验试剂储存温度效期样品血清血浆全血方法

酶联免疫吸附试验（ELISA化学发光或免疫荧光实验快速检测(RT)及其它检测试验

明胶颗粒凝集试验（PA）免疫渗滤试验免疫层析试验免疫胶体金法（硒）免疫胶体金法阴性质控区（C）出现红色反应线阳性质控区（C）出现红色反应线检测区（T）出现红色反应线无效质控区（C）未出现红色反应线HIV抗体筛查试验HIV抗体筛查试验

酶联免疫吸附试验（ELISA）方法类型

双抗原夹心法测抗体双抗体夹心法测抗原捕获法测抗体间接法测抗体竞争法测抗原\抗体用于检测HIV抗体的ELISA法第一代：使用HIV全病毒裂解物为抗原，应用间接法原理检测HIV抗体。如日本富士公司生产的HIV-PA试剂。第二代：使用在细菌或真菌中表达的人工重组或化学合成多肽HIV抗原，应用间接法原理检测HIV抗体。基因重组通常易于在培养基中生产大量同源性抗原，产品为单一目的基因而非多样性抗原混合，特异性高于第一代试剂。用于检测HIV抗体的ELISA法第三代：使用合成多肽HIV抗原（少数用重组抗原），应用双抗原夹心法原理检测HIV抗体。由于标记HIV抗原可同时检测血清中HIV-1IgG、IgM、IgA抗体，此类试剂的敏感性和特异性均优于标记抗人免疫球蛋白的间接法。高纯度的HIV-1/-2型抗原待检抗体酶标记的HIV-1/-2型抗原用于检测HIV抗体的ELISA法第四代此类试剂在第三代试剂盒基础上，将针对P24抗原的抗体与HIV-1抗原一起包被固相载体，可同时检测HIV-1IgG、IgM、IgA抗体和P24抗原。增加了敏感性和特异性检测HIV抗体的ELISA试剂试剂种类必须使用经国家食品药品监督管理局注册批准，批批检合格的HIV抗体检测试剂使用在有效期内且保存条件符合要求的试剂存放试剂的冰箱温度2-8℃，使用前要放置室温平衡检测HIV抗体的ELISA试剂完整的ELISA试剂盒包含以下各组分

已包被抗原或抗体的固相载体酶标记的抗原或抗体

酶的底物

阴性对照品和阳性对照品定性测定

标本（和结合物）的稀释液

洗涤液

酶反应终止液ELISA检测试剂固相载体

固相载体材质

聚苯乙烯

固相载体形状

微量滴定板

检测HIV抗体的ELISA试剂结合物（酶标记的抗体或抗原）辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)底物

四甲基联苯胺(TMB)反应后显蓝色，终止后呈黄色，最适吸收波长为450nm

检测HIV抗体的ELISA试剂洗涤液常用含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水终止液HRP常用强酸，最常见2mol/L硫酸

ELISA试验

标本的采取和保存加样孵育洗涤显色与终止酶标仪测定标本的采取和保存

避免溶血红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色

避免污染血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应保存一周内2～8℃一周以上-20℃标本送检信息姓名外螺旋盖（带胶垫）血清管

√×接收样本时，必须填写样本接收记录单建立样本的唯一性编码

登记有关信息受检者姓名、性别、年龄、职业、送检单位、人群类别、检验结果、送检日期、报告日期

样本的接收样本的接收认真核对样本与送检单提供的信息是否相符、样本有无破损和渗漏。如发现渗漏的，立即将尚存的样本移出，对样本管及包装进行消毒，同时报告主管领导和有关专家检查样本的物理性状。并做好记录。如果样本不符