中医证研究动物模型的建立与评价

中医证研究动物模型的建立与评价

肾阴虚模型是一种具有代表性的中医动物模型，是中医基本器官的不足和症状的模型。研究者在模型上做了大量病理、治疗机制的研究工作。下面对肾阴虚模型的造模方法和检测指标进行简明概述。1肾阴虚模型的构建方法1.1合成酶动物模型该方法始于1957年,重庆医学院以甲状腺干粉喂饲家兔形成甲状腺功能亢进模型,属病理模型。其理论依据是甲状腺机能亢进患者的临床表现符合临床肾阴虚证病理改变的结果。通过给实验动物大剂量使用甲状腺素,形成外源性甲状腺素水平升高,复制出甲状腺机能亢进的动物模型。可用药物为甲状腺片、T3、T4等。造模周期大多持续21天,模型动物出现饮水量增多、活动频度增加、汗多、毛无光泽、体重下降或增长缓慢、体温升高、尿量减少等现象。1.2金属酶辅助的肾阴虚模型复制法该方法始于1977年,由上海中医学院正常人体教研组建立,属于病理模型。在甲状腺素造成实验动物甲状腺机能亢进的同时,通过利血平神经调节来辅助肾阴虚模型的复制。采用甲状腺素片和利血平药粉混悬液,给实验动物灌胃服用,造模周期10～20天。因为利血平的加入大大缩短了造模时间,是目前研究最广泛的肾阴虚模型复制方法。1.3条件下连接肾动脉法该方法始于1960年,属于病理模型,造成神经性、肾性高血压,因为此方法对实验动物创伤较大,所以并没有被广泛应用。1.4肾皮质质激素水平检测该方法始于1960年,属于病理模型。其理论依据主要是肾上腺皮质机能亢进患者,临床多表现为中医肾阴虚证类型。其造模方法有二:1)促肾上腺皮质激素造模法,给实验动物过量地使用促肾上腺皮质激素,通过促进肾上腺皮质激素的合成和释放,复制出肾上腺皮质机能亢进模型,一般4天即可成模。2)肾上腺皮质激素造模法,给实验动物过量使用糖皮质激素,形成外源性糖皮质激素水平升高,复制出类似肾上腺皮质机能亢进模型。常用药物有氢化可的松、醋酸可的松、醋酸氢化可的松、地塞米松磷酸钠、地塞米松等药物。造模周期为4～14天。1.5中药成模技术该方法始于1979年,由北京中医研究所创立,也是唯一符合传统中医病因的造模方法,属于病因模型。其理论依据是过量服用热性中药,可以造成体内的阴液耗伤,形成阴虚内热的病理改变。主要用药性温热的中药如附子、肉桂、仙茅等,煎成汤剂灌服实验动物,一般7天即可成模。但是在实际应用中该方法所占比例很小。1.6肾阴虚证模型该方法始于1961年,由上海医学院附属广慈医院创造,属于病因模型。此法利用给实验动物造成高位小肠侧瘘而建造肾阴虚证模型。由于手术过程及后果复杂,同时模型伴有一定程度的阳虚,故一般很少应用。1.7小鼠s180瘤种的制备该方法始于1979年,由解放军一八四医院创立的一种证病结合模型。此法采用雄性小鼠,将S180瘤种制成1g/4ml生理盐水细胞悬液,每只0.2ml接种于右前肢腋部皮下,次日起用T4加利血平灌喂。用T4120mg,利血平0.8mg/kg用药5天。由于本模型主要用于癌瘤虚证的功能实质研究,故没有得到广泛应用。1.8等动物脑弓状核arc特征该方法始于1998年,由蔡定芳等创立。左旋谷氨酸单钠(MSG)是一种神经毒素,能特异性导致大鼠等动物下丘脑弓状核(ARC)毁坏。ARC是下丘脑重要核团,广泛参与神经内分泌免疫网络的调节。MGS大鼠下丘脑一垂体一肾上腺(HPA)轴功能亢进,下丘脑单胺类递质多巴胺、去甲肾上腺素含量显著降低,同时还有神疲乏力,爪甲枯燥,雄性大鼠架丸萎缩,雌性大鼠阴道迟开等肾虚症状,辨证符合肾阴虚。1.9肾阴虚热模型该模型始于1960年,属于最早建立的一种证病结合模型。其理论依据主要是高血压病一般常表现有肾阴虚内热的证型,此模型用滋肾阴方药有效,用温肾阳方药反而加重其病情。方法是将造模动物的一侧肾动脉结扎或用银夹狭窄,另一肾切除。造模成功后,模型动物血压升高,肾功能显著降低,心脏重量指数增大。本模型主要用于高血压研究,并且模型夹杂血瘀证,较少用于肾阴虚证的研究。2不同成功与否的模型分析模型复制后,需要一定的手段对其进行评价来辨别其成功与否。大多数研究者都采用指标评价的方法,现选取临床上常用的生化指标进行简要阐述。2.1皮质醇cort糖皮质激素(皮质醇、皮质酮)是在肾上腺皮质合成的激素,对于糖代谢具有很大的调节作用。皮质醇(Cort)由肾上腺皮质产生和分泌,属甾体糖皮质激素类,其分泌依赖于下丘脑-垂体-肾上腺轴的分泌规律,受垂体前叶促肾上腺皮质激素的控制,故血清中的皮质醇是反映肾上腺皮质功能的重要指标。肾阴虚患者大多表现为肾上腺皮质功能亢进,因此血清皮质醇升高是诊断肾上腺皮质功能亢进的直接证据。2.2外周血组织的变化甲状腺激素主要包括有生物活性的甲状腺素T4、三碘甲状腺原氨酸T3和无生物活性的反T3(rT3)。T4全部由甲状腺生成;T3小部分由甲状腺生成,大部分在甲状腺以外的组织由T4转变而成;rT3小部分由甲状腺生成,大部分在外周组织由T4转变而成。甲状腺素片是一种能量消耗增强剂,大鼠灌服后导致机体的能量代谢的增强,甲状腺轴一定程度的功能紊乱。据临床观察,甲状腺机能亢进患者的表现多偏阴虚,故血清甲状腺素T3、T4含量可以反映甲状腺轴的功能状态。2.3孕酮的代谢作用雄激素能够促进雄性器官发育,增强基础代谢,促进蛋白质合成及性欲亢进等;雌激素则促进雌性器官发育,促进促肾上腺皮质激素-肾上腺皮质激素的分泌,刺激甲状腺发育,促使性欲亢进等;孕酮具有妊娠准备及维持中枢调节、升高基础体温的作用。临床与实验研究表明,雌激素(E2)和睾酮(T)水平的高低与肾阴阳的平衡有关系,肾阴虚者雌激素水平偏高,雄激素水平偏低,因此E2、T以及E2/T的测量可以评价肾阴虚模型的成功与否。2.4核心产物的合成cAMP是核苷酸的衍生物,为蛋白激酶致活剂,是有机体中广泛存在的一种具有生理活性的重要物质。cGMP在鸟苷酸环化酶(GC)催化下由GTP合成;在cGMP磷酸二酯酶(PDE)催化下水解。cAMP和cGMP是一对相互拮抗而又相互制约的物质,它们对细胞功能处于稳定状态具有双向控制调节作用,与中医学的阴阳学说有相似之处,多数研究结论认为血浆环磷酸腺苷升高,说明机体处于一种阴虚状态,可以对模型进行评价。2.5肾功能不全肌酐是肌肉在人体内代谢的产物,主要由肾小球滤过排出体外。血肌酐与体内肌肉总量关系密切,基本上不受饮食、高分解代谢等肾外因素影响,在外源性肌酐摄入量稳定,血肌酐浓度主要取决于肾小球滤过功能。肌酐分为血清肌酐和尿肌酐,其清除率并不完全一致,尿肌酐清除率较血肌酐更为敏感。在肾功能减退早期(代偿期),尿肌酐清除率下降而血肌酐却正常。当肾小球滤过率下降到正常的50%以上时,血肌酐才开始迅速上升,因此当血肌酐明显高于正常时,常表示肾功能已严重损害。由于肌酐清除率还受到肾小球浓缩功能的影响,在肾浓缩功能受损的情况下,血肌酐就是反映肾小球功能的最可靠指标。因此,血肌酐的测定可以反映肾脏器官的实质损害,尿肌酐的测定可以反映甲状腺轴的功能状态,从而对肾阴虚模型进行评价。2.6免疫球蛋白igm和igg免疫功能低下是肾虚证的共性,血清IgM、IgA、IgG和补体C3、C4作为肾阴虚证的客观评价指标在临床上亦有报道。2.7过氧化脂质产物脂质过氧化损伤是肾阴虚证形成的病理生理基础,超氧化物歧化酶SOD对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用,其活力的高低与衰老有着密切的联系。过氧化脂化产物LPO是体内细胞膜性结构中的多介不饱和脂肪酸受到氧自由基的作用生成的脂质过氧化,膜脂质的过氧化,使膜结构和细胞功能受损而引起多种疾病。因此SOD、LPO的测定可以从衰老层面评价肾阴虚模型。2.8物质代谢主物质甲状腺素的应用可以导致大鼠物质、能量代谢增强;功能和能量代谢的失衡,可以致使物质代谢紊乱。临床研究表明肾阴虚患者存在脂质代谢紊乱和自由基反映增强,因此血清甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)含量测定可以反映脂质代谢状况。3初步总结期1979管理综上所述,实验性动物肾阴虚模型的建立经历了1960～1