黑素瘤细胞中两个活性多肽成分的分离及结构鉴定

黑素瘤细胞中两个活性多肽成分的分离及结构鉴定

多孔药物的研究一直是药物研究的一个活跃领域。如何从天然动物、植物和微生物中发现活性物质，并将其用作药物研究的筛选元素，一直是糊精剂研究的方向。近几年虽然分子生物学的发展、基因工程技术、多肽合成技术的兴起,使人们根据自己的意志合成或表达出各种蛋白、多肽物质,但其中真正成药的还是那些首先在天然产物中发现的活性成分,经上述技术重新合成或表达的产物。因此,这更加促进人们不断从大自然的天然宝库中去寻找新的活性多肽来丰富我们的药物宝库。1小肽结构的筛选人体内的生物活性物质,因其来自人体而毒性一般较低,一直是新药研究的主要来源。Hackler等人利用分子排阻色谱法与RP-HPLC,并利用放射性免疫亲和(AIR)技术监测分离组分,从人脑皮层组织中提取到了一个结构相关性小肽,经序列分析、电雾离子化质谱分析以及与全合成肽结果进行比较确定了其结构为:Tyr-Pro-Lys-Gly-NH2(Tyr-K-MIF-1)与以往提取的Tyr-MIF-1(Tyr-Pro-Leu-Gly-NH2)、Tyr-W-MIF-1(Tyr-Pro-Trp-Gly-NH2)和MIF-1(Pro-Leu-Gly-NH2)具有相似的结构。这一小肽具有类阿片样作用。Gembitsky等利用SephadexG-25和MG2000凝胶柱分离以及DEAE-纤维素和Dowex50离子交换柱结合RP-HPLC纯化方法,从人工培养的黑素细胞与恶化的黑素瘤细胞中分离提取到两个小肽成分,经氨基酸序列分析仪以及质谱分析并结合全合成确定其结构为:pyroGlu-Phe-Gly-NH2(Ⅰ)和pyroGlu-Cys-Gly-NH2(Ⅱ)。试验证明,小肽Ⅰ具有抑制黑素瘤细胞生长的作用,最小抑制活性量为10-15M,此抑制活性为负反馈抑制机制,此肽是N末端取代的生长调节寡肽家族的一个新成员,在大肠、表皮及肝脏中均得到了与其类似的小肽。从人血浆中利用层析法分离到一些分子量在1000~5000D的小肽组分,并观察了其对血浆或红细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。发现一些小肽可通过增加血液中硝酸钠的含量降低SOD的活性,减短实验动物的寿命;同时,另一部分小肽又可提高SOD的活性。作者分析,这些多肽可能为与SOD活性结构相近或相似的肽,这些肽的确切结构还在进一步研究之中。Turner等利用放射扩散分析方法研究神经纤维网中的三种具抗菌活性的多肽β-折叠的防御素(NHP-1到NHP-4)和α-螺旋的IL-37,以及猪来源的蛋白整合素(PG-1)。他们在结构上具有某些相同氨基酸组成,IL-37是一由93个氨基酸残基组成的α-螺旋肽其具抗菌活性的结构区域含40个氨基酸残基左右,尽管它的活性比PG-1低,但是却对大多数革兰氏阳性菌、阴性菌均有抑制活性(MIC<10μg/ml),甚至对一些耐药菌群均有很强的抑制活性,这与其α-螺旋结构有关。圆二色谱(CD)研究表明,IL-37在细菌表面磷脂酶A和脂多糖(LPS)上以α-螺旋与之结合,破坏了细菌结构的完整性,实质溶解死亡。此类抗菌肽在神经组织、皮肤、支气管组织中分布较多,起到保护细胞、防止细菌入侵以及LPS引起的细胞毒性。在研究非洲爪蛙素(Xenopsin)时在人体胃粘膜组织中发现了其类似物,并利用6步HPLC提纯到一个25肽,确定结构如下:Met-Leu-Thr-Lys-Phe-Gly-Thr-Lys-Ser-Ala-Arg-Val-Lys-Gly-Leu-Ser-Phe-His-Pro-Lys-Arg-Pro-Trp-Ile-Leu-OH。其可调节胃肠其它激素如胃泌素、肠泌素、肠血管活性肽(VIP)、胰岛素等释放,使之适于机体需要。从人乳蛋白及牛乳蛋白中也分离提取出一种三肽成分GLF(Gly-Leu-Phe-NH2)。试验证明,GLF及其类似化学合成肽Leu-Leu-Phe-NH2、Leu-Leu-Tyr-NH2及Leu-Gly-Tyr-NH2等小肽均具有刺激吞噬细胞增长、提高免疫力和抗球菌等细菌侵袭的功能。2从动物身体中发现的新化合物物质2.1fpsi常用的d-fgrp-9基因相关肽从肺蛇Helix.pomatia的心、肺组织中提取到了63种生物活性肽,一些肽具有刺激心脏活性作用,可提高心肌细胞中cAMP的水平。人工合成的心脏活性小肽(SmallCardioactiviePeptides,SCPs)证实了这一点,此种肽在肺蛇Helix.Aspera的心室、心房中均存在,具有促进心脏跳动、增加心输出量等作用。从非洲巨蛇Achatinafulica的毒腺中提取出一种神经肽Fulicin其结构为:Phe-D-Asn-Glu-Val-NH2,含有D-型氨基酸。Yasuda-Kamatani等人利用这一结构克隆了其cDNA并得到了完全表达,同时应用固相合成技术合成了一系列的Fulicin类似物。从Fulicin表达基因中推测其前体蛋白含有375个氨基酸残基,并可能各有9种α氨基肽(与Fulicin类似),称之为Fulicin基因相关肽(FGRP)1~9,分别从毒腺中提取到它们,氨基酸序列如下FGRP-1:Gln-Tyr-Glu-Phe-Val-NH2;FGPR-2:Ser-Tyr-Asp-Phe-Val-NH2;FGPR-3:Thr-Tyr-Asp-Phe-Lue-NH2;FGPR-4:Ser-Pro-Tyr-Phe-Leu-NH2;FGPR-5:Tyr-Asp-Phe-Leu-NH2;FGPR-6:Ser-Pro-Tyr-Asp-Phe-Ile-NH2;FGPR-7:Asn-Tyr-Asp-Phe-Val-NH2;FGPR-8:Ser-Pro-Tyr-Asp-Phe-Val-NH2;FGPR-9:Tyr-D-Ala-Glu-Phe-Leu-NH2。其中FGRP-9与Fulicin均具有D-型氨基酸。通过天然与合成肽对蛇阴茎收缩肌细胞的作用实验证明,FGPR-9与Fulicin具有相同的生理功能,均具刺激收缩肌的功能。锥蛇毒液中含有丰富的多肽成分,可对脊椎动物与无脊椎动物神经系统内的受体或离子通道有拮抗作用,为了进一步确证这些肽的结构特性,从锥蛇C.textile属的毒液中利用层析、凝胶电泳、毛细管电泳等方法分离提取到十几种20~35个氨基酸组成的肽类物质,其结构中富含胱氨酸,并进一步证明了不同结构的毒液肽具有不同的作用机制。2.2gly-pro-阴汉酯的类似物,包括其它多肽从欧洲普蛙Rana.Temporaria的皮肤组织中分离到一系列缓激肽相关性多肽,利用序列分析仪确定其结构分别为具有相同的N末端N-Gly-Val-Ile-Pro-Leu-Leu-的三种多肽:-Ile-Ala-N;-Ile-Ala-Pro-Ala-Ser-Thr-Leu和-Ile-Ala-Pro-Ala-Ser-Ile-Ile。并证明其产生机制可能是由细胞内切蛋白酶作用产生的,而不是象缓激肽那样由激肽释放酶-激肽系统产生的。Mignogna等人研究热带南美蛙Agalychniscalligryas的皮肤中具有活性肽类,发现5类肽家族成员:激动肽(Tackykinins)、缓激肽(Bradykinins)、阿片肽(apiods)、Caeruleines、Sauagines等。其中激动肽家族成员较多如Gly-Pro-Pro-Asp-Pro-Asn-Lys-Phe-Ile-Gly-Leu-Met-NH2;Gly-Pro-Pro-Asp-Pro-Asp-Arg(Lys)-Phe-Tyr-Pro-Gly-Met-NH2;Glu-Pro-Asp-Pro-Asp-Arg-Phe-Tyr-Pro-Gly-Met-NH2和Gly-Pro-Pro-Asp-Pro-Asn-Lys-Phe-Tyr-Pro-Val-Met-NH2等,后三种肽具有不同于其它缓激肽家族肽N末端(Gly-Leu-Met-NH2)结构,其为Pro-Gly(Val)-Met-NH2末端。同时还提取到Kassinins类似肽如Gly-Pro-Pro-Asp-Pro-Asn-Lys-PheIle-Gly-Met-NH2,其具有比Kassinins更强的与自然杀伤细胞(NK)受体结合的能力,[Kassinin的结构为;Asp-Val-Pro-Lys-Ser-Asp-Gln-Phe-Val-Gly-Leu-Met-NH2]。还有一些其它多肽首次被发现,如Caerulein[pGlu-Asp-Tyr(HSO3)-Lys-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH2]和Phyllokin[Arg-Pro-Hyp-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-Ile-Tyr-NH2]以及阿片肽类似物均具有相当的生物活性。从Litoriarabella属的绿树蛙和红树蛙中共提取到30多种肽类。其中pGlu-Gln-Asp-Tyr(SO3H)-Thr-Trp-Met-Asp-Phe-NH2(Ⅰ);Gly-Leu-Leu-Ser-Val-Leu-Gly-Ser-Val-Ala-Lys-His-Val-Leu-Pro-His-Val-Val-Pro-Val-Ile-Ala-Glu-His-Leu-NH2(Ⅱ)等具有广谱抗菌、抗病毒活性。Phe-Pro-Trp-Leu-NH2;pGlu-Phe-Pr-Trp-Leu-NH2;Val-Asp-Phe-Phe-Ala-OH等具有一定的神经调节和神经递质功能。从澳大利亚树蛙Litoriachloris和Litoriaxanthomera等属中分离到Caerins1系列活性多肽1.1~1.9,分离纯化方法同上。抗菌实验表明,Caerins1.1具有广谱抗菌性,而其它几种对单一菌群有较强作用。新提取的1.8结构为:Gly-Leu-Phe-Lys-Val-Leu-Gly-Ser-Val-Ala-Lys-His-Leu-Leu-Pro-His-Val-Val-Pro-Val-Ile-Ala-Glu-Lys-Lue-NH2;1.9结构为:Gly-Leu-Phe-Gly-Val-Leu-Gly-Ser-Ile-Ala-Lys-His-Val-Leu-Pro-His-Val-Val-Pro-Val-Ile-Ala-Glu-Lys-Leu-NH2。利用HPLC色谱从非洲爪蛙Xenopuslaevis的皮肤中也提取到两个23个氨基酸制成的活性肽—Maganinins,其组成分别为:Maganinins1:Gly-Ile-Gly-Lys-Phe-Leu-His-Ser-Ala-Gly-Lys-Phe-Gly-Lys-Ala-Phe-Val-Gly-Glu-Ile-Met-Lys-Ser。Maganinins2:10位Gly→Lys;21为Lys→Asn。生物学研究表明,二者均具有广谱抗菌活性,对细菌、真菌、原生物等均有杀伤活性。2.3对胰腺激素的活性成分YY肽(PeptideYY,PYY)是1982年由Tatenoto等人从猪小肠、胰腺组织中提取出来的多肽。免疫组织化学研究表明,PYY分布于各种动物与人体小肠、大肠等一些内分泌细胞中。Hosotani等通过对清醒狗的动物实验研究表明,PYY具有对内、外源刺激引起的胰腺分泌的抑制作用,以及对脂肪酸引起的胆囊收缩素释放也有中度抑制作用,说明它是肠道中较为重要的胰腺激素分泌抑制剂。从牛嗜中性粒细胞颗粒中提取到一类高效、阳离子抗菌肽——杀菌肽(Bacternecin)5和7其对革兰氏阴性菌杀菌力较强,而且结构中含Pro和Arg较多,Arg-Pro-Pro-X(X为疏水残基)。人工合成的AC-(Arg-Pro-Pro-Ph)n-NHCH3复合物(n=2,4,6,8,10),实验证明结构对抗菌活力影响较大,较短的链结构作用较弱。2.4活性肽的分类从昆虫中提取有效活性肽,一直是人们研究的一个方向。从蝗虫、蟑螂等昆虫的神经组织、心血管组织中提取到了不少活性多肽,如Predel等人从美洲蟑螂的后脑复合物中提取到了两个肌向活性肽,是利用经三氯乙酸、五氟丁酸修饰的C-18柱HPLC三步纯化得到的,经Edman降解及质谱分析确定其结构序列为:His-Thr-Ala-Gly-Phe-Ile-Pro-Arg-Leu-NH2(Pea-PK-1)和Ser-Pro-Pro-Phe-Ala-Pro-Arg-Leu-NH2(Pea-PK-2)。C端序列Phe-X-Pro-Arg-Leu-NH2特征证明其属于昆虫肽Pyrokinin家族成员。此类化合物作为昆虫神经激素,具有调节超级神经肌肉、后肠肌系统的收缩性的功能。昆虫神经肽Proctolin是1975年Brown和Starratt从美洲蟑螂(Periplanetaamericanna)中提取出来的,具有昆虫肌肉、神经调节剂样活性胚,其结构为H-Arg-Tyr-Leu-Pro-Thr-OH,在其它不同的昆虫以及无脊椎动物体中陆续提取到其类似肽近80余种,如H-Ala-Tyr-Leu-Pro-Thr-OH是从跳蚤脑组织中提到的;H-Ala-Glu-Pro-Tyr-Thr-NH2是从幼龄期蠕虫中提到的;Gly-Thr-Ser-Phe-Thr-Pro-Arg-Leu-NH2是从蟑螂血淋巴系统提取到的。这些小肽分别具有刺激昆虫输卵管平滑肌运动以及肠道肌肉收缩等功能,同时一些昆虫神经肽对心肌也具有明显的激动作用,可提高心跳频率。也可作为脑神经系统递质起到调节神经活动的作用。蝗虫中的活性肽研究自从第一个心脏——体循环腺体分泌的脂肪运动激素(AdiokineticHormones,Lom-AKH-1)被分离出来后,目前对从蝗虫Locustamigratoria和Schistoctrcagregaria两属中分离出的活性肽已有近百种之多。通过生物分析已确定其分属不同的生物活性肽家族,这些肽大多是从蝗虫的心脏、血液、内分泌腺体等细胞组织中分离得到的。现分类介绍一下:肌向素(Myotropins):包括肌向兴奋肽,如激动肽家族肽(Locustatackykinins);蝗虫肌向素家族肽;蝗虫硫化素(Locustasulfakinin);异向素家族肽(Allatotropin)等;肌向抑制肽:如Lom-MIP:Ala-Trp-Gln-Asp-Leu-Asn-Ala-Gly-Trp-NH2;Schistostatins1~10系等。这些肽大多具有调节心肌、输卵管扩约肌等肌肉、组织收缩的功能,调节中枢神经系统、腺体分泌和其它激素活性的作用。利尿激素(DiureticHormones):利尿肽Lom-DP属于皮质激素释放因子CRF家族成员,共有46个氨基酸残基组成,具有调节蝗虫体内水盐代谢的功能,控制昆虫体内液体的吸收、分布与排泄,使之正常生活。部分素(Parsins):是从脑组织与血液系统中提取到的多肽激素,包括神经部分素A(NeuroparsinA)、神经部分素B(NeuroparsinB)、Lon-OMIP、Lom-IRP等系列多肽,此类肽具有刺激体液重吸收、诱导血脂升高和神经调节作用。从部分体循环和腺体中分离的多肽:脂肪运动激素Lom-AKH系,这类肽具有脂肪运输调节功能,促进脂肪在体内的重新分配。蛋白酶抑制剂:从蝗虫L.Migratoria属血淋巴系统分离出来的三种多肽,LMCI系列具有抑制体内a-胰乳糜蛋白酶、弹性蛋白酶的活性。同时它们都具有蛋白水解酶的活性。2.5氨基酸类及活性肽从软体动物贝类Mytilusedulis的血液中提取到了两种富含阳离子与胱氨酸的抗菌小肽,其中一个含有34个氨基酸残基,命名为Mytilin,结构如下Gly-Cys-Ala-Ser-Arg-Cys-Lys-Ala-Lys-Cys-Ala-Gly-Arg-Arg-Cys-Lys-Gly-Try-Ala-Ser-Ala-Ser-Phe-Arg-Gly-Arg-Cys-Tyr-Cys-Lys-Cys-Phe-Arg-Cys。另一种为含35~43个氨基酸多肽,属于昆虫防御素家族肽,在其他动物如蝎子的组织中也提取到过,与上述的Buthin的结构相似。这种富含8个胱氨酸的新肽具有广谱抗细菌、真菌的活性。利用HPLC、电泳等手段从海鞘的血细胞中提取到了一个23氨基酸组成的系列肽ClavaninsA、B、C、D,他们的结构中都含有一定的α螺旋。以ClavaninsA为例,其结构为Val-Phe-Gln-Phe-Lys-Gly-Lys-Ile-Glu-His-HIs-Val-Gly-Asn-Phe-Val-His-Gly-Phe-Ser-His-Val-Phe-NH2。经抗菌实验证明,天然来源与合成的ClavaninsA均具有广谱抗菌活性。利用HPLC方法从海葵Anthopleuraelegantissima属中提取到了两种神经肽,Leu-Pro-Pro-Gly-Pro-Leu-Pro-Arg-Pro-NH2此肽具有提高海葵触角收缩频率与持续时间的作用;另一种肽为Glu-Asn-Phe-His-Leu-Arg-Pro-NH2,此肽具有抑制触角自主节律性收缩作用,并证明这两种肽为神经调节肽。从成熟雌性墨鱼Sepiaofficinalis视叶(四迭体)组织中提取到一种活性二肽,其结构为Gly-Trp-NH2(Gwa)。其具有通过降低输卵管收缩肌的紧张性、收缩频率、幅度来抑制其活动的作用,与其它四种相关肽Ala-Pro-GWa,Lys-Pro-GWa,Arg-Pro-GWa和Thr-Pro-GWa属于同一类活性肽,均参与墨鱼输卵管运动的调节。Fusetani从海绵Theonellasp.属中分离到的3个线性四肽,其中NazumamideA的结构通过2DNMR和化学降解法确定为2,5-二羟基苯基-L-Arg-L-Pro-Ile-α-氨基丁酸,实验证明其具有凝血酶抑制活性。另外,Coleman等人也从海绵Cymbastelasp.属中发现了具细胞毒活性的多肽物质,其结构中含有各种甲基、苯基、叔丁基修饰的氨基酸,如-Try-ValN-Boc-Methyl-Val等。利用酸醇提取、离子交换、HPLC等方法从俄罗斯鲟鱼Acipensergulderstaedti的胰腺中提取纯化到胰岛素称成分,其结构与哺乳动物来源的胰岛素相近,而与其它鱼类来源的胰岛素相差较大,其活性也比猪来源的胰岛素要低。2.6种抗菌肽的分离和提取从鸵鸟胰腺提取到了一种胰腺胰蛋白酶抑制剂(PSTI)。利用了酸提、盐分级、SP-SephadexC-50和QAE-SephadexA-25柱以及RP-HPLC分离纯化得到的69个氨基酸组成的单链多肽,其具有抑制鸵鸟及牛胰蛋白酶活性作用,同时作者还探讨了其在肿瘤细胞生长过程中的作用。Ebret-Sabatier等人利用RP-HPLC、酶解、CZE等手段从蝎血淋巴组织中提取分离了三种不同的抗菌肽,通过Edman降解、电雾离子化质谱分析确定氨基酸序列分别为:(Ⅰ)Androctonin一个25肽,具有两个二硫桥(RSVCRQIKICRRRGGCYYKCTNRPY),实验证明其具有广谱抗菌性,对革兰氏阴性、阳性菌以及部分真菌都有杀伤作用,(Ⅱ)Buthinin一个34肽,有三个二硫桥结构(SIPIRCRSNRDCRRFFCGFRGGRCTYARQCLCGY),其对革兰氏阴性菌、阳性菌均有杀伤作用。(Ⅲ)为一个由37个氨基酸组成的肽,仅对革兰氏阳性菌有效。获得多肽的办法除了直接从组织细胞中提取外,还可利用一些氨基酸特异性的蛋白水解酶水解某些蛋白获得具有生物活性的多肽物质。V8蛋白酶、SP蛋白酶是从葡萄球菌中提取到的蛋白酶,SF蛋白酶是从链球菌中得到的,他们均对谷氨酸残基特异性切割。日本学者研究从枯草杆菌(Bacillussubtillis,BS)ATCC6051中提取一种谷氨酸特异性肽链内切酶—BS内切酶,利用其特异切割作用,获得了具有干扰素活性的多肽-BNP。2.7抗心肌缺血肽的合成在从天然产物中提取多肽成分研究中,除了上述文献报道外,还有一些专利文献也报道了不少新型多肽的研究。Suetsuna从蠕虫体内提取了一种活性四肽,利用了蛋白酶水解法、Dowex50WX4(H+)柱、SephadexG-25和HPLC等方法。其氨基酸序列为:H-Pro-Gly-Val-Ala-OH,其具有抑制血管紧张素转化酶(ACE)的活性,体外IC50为9.6×10-2M,制成片剂后,体内实验口服此肽给药10mg/kg,可明显降低高血压大鼠的血压。Tsutsui等人利用RP-HPLC、离子交换法从Cturnix的输卵管组织中提取到了能调节器官收缩功能的肽,并测定了其生物活性。Suetsuria从沙丁鱼的肌肉组织中,利用酶解法获得了五个6肽:H-Leu-Val-His-Pro-Glu-Glu-OH(Ⅰ);H-Leu-Val-Leu-His-Pro-Lys-OH(Ⅱ);H-Leu-Val-Lys-His-Pro-Gly-OH(Ⅲ);H-Leu-Val-Tyr-Pro-Ile-Glu-OH(Ⅳ);H-Leu-Lys-Tyr-Pro-Ile-Glu-OH(Ⅴ)。同时也利用430A多肽合成仪合成了上述五个小肽。实验证明,上述6肽具有抑制血管紧张素转化酶(ACE)的活性,Ⅰ~Ⅴ的IC50在1.3×10-6~4.3×10-6M之间,50mg/kg静脉注射可显著降低自发性高血压大鼠的血压。Shinso等人用胰蛋白酶水解酪蛋白,得到一些含疏水基较多的多肽,动物实验表明,对喂养高脂饲料的高血脂大鼠,它们可明显降低大鼠的血脂,可作为食品、保健品添加剂应用。Yasushi等从地衣形杆菌UTK的培养液中提取到一类抗真菌活性肽,X-Asn-Ser-Pro-Asn-Tyr-GluX为α氨基脂肪酸残基。其中肽HUT57A及HUT57B的抗菌活性最强。Yamaoto等也利用酶解法从乳清蛋白中分离到一些分子量小于1000的活性多肽成分。实验证明,它们可降低高血脂SD大鼠和ICR小鼠血液中的血脂含量,具有一定降血脂作用。3从植物体内发现的新清澈物质3.1氨基酸的提取从希腊栽培葱Alliumporum的根茎中用30%乙醇提取,并用HPLC纯化得到1052kD的小肽,氨基酸序列分析结构为:Phe-Asp-Ser-Thr-Arg-Pro。生物学分析表明,其在胶原与二磷酸腺苷作用下,体外具有抑制血小板凝聚作用。Saito等研究食物中存在的活性肽,发现从大米谷皮提取的小肽可显著降低自发性高血压小鼠的收缩压,这些小肽包括:Val-Tyr;His-Tyr;Arg-Phe;Val-Trp和Tyr-Trp等。这些小肽口服给高血压小鼠后观察,Val-Tyr和His-Tyr对幼龄小鼠效果较好,随着年龄增大而逐步失效,其它三肽则无此现象。人参Panavginseng广泛被应用于传统中医药治疗癌症、糖尿病、肝炎和心血管疾病等以及滋养补品中。现代药理学与临床研究表明,其还具有抗焦虑、抗休克、调节心血管系统、提高学习记忆能力、调节细胞代谢、调节免疫功能、防辐射和防止肝中毒等作用。Chen等人利用水醇提取法,结合离子交换、凝胶过滤和RP-HPLC从人参中分离到六种含α氨基酸的小肽,并通过氨基酸序列分析已测定其结构为氧化性的谷胱甘肽及其类似物,实验证明,其具有调节动物睡眠的作用。另外一种14肽也从中提取出来,结构为:Glu-Thr-Val-Glu-Ile-Ile-Asp-Ser-Glu-Gly-Gly-Gly-Asp-Ala,但其活性还未确定。Yagi等人1994年从中提取到一种四肽成分:Val-ue160-D-Glu-D-Arg-Gly。并证明一些非蛋白氨基酸对其调节神经系统活性至关重要。花粉是高等植物的雄性生殖器官,不仅含有丰富的营养成分,而且还含有许多与生命活动有关的信息物质。许家喜等人从罂粟PapaversomniferumL.的花粉中提到四种多肽,他是将花粉水提液经H+型阳离子交换柱、SephadexG-25、Dowex阴离子柱、SephadexG-10、G-15和HPLC的系统纯化而得到的。经电泳分析、氨基酸序列分析确定它们的结构分别为:①21肽H2N-Gly-Glu-Ile-Pro-Ans-Gln-Ser-Pro-Thr-Met-Ala-Leu-Gly-Ser-Asn-Val-Thr-Ala-Gly-Gln-Lys-OH;②17肽H2N-Asn-Glu-Glu-Pro-Leu-Glu-Thr-Ser-Gly-Val-Ile-Asn-Met-Lys-Ala-Ala-Gly-OH;③13肽H2N-Asn-Gln-Asn-Gly-Ser-Asn-Pro-Lys-Thr-Val-L