hplc测定妇血安片中阿魏酸的含量

hplc测定妇血安片中阿魏酸的含量

妇血安片是广东德鑫制药有限公司的特产，主要由当归、荷花、三七、丹参、鹤草、香附、蒲黄、侧柏、母字、党参、白术等组成。用于月经不调、经期延长的妇科疾病的常见症状。其中当归中阿魏酸具有明显抗血栓的作用,是处方中的主要药效成分。由于阿魏酸稳定性易受温度、放置条件等因素的影响,故本文采用阿魏酸为指标设计实验对妇血安片提取工艺的影响因素进行研究。1测定项目及方法日本岛津LC-20ATvp高效液相色谱仪,阿魏酸对照品购于中国药品生物制品检定所(供含量测定用,批号:110773-200611)。甲醇为色谱纯,水为纯化水,其他试剂均为分析纯。当归、旱莲草、三七、丹参、仙鹤草、香附、蒲黄、侧柏等药材由广东德鑫制药有限公司提供。2方法和结果2.1重量测定2.1.1流动相温度色谱柱为phenomenonlunaC18柱(4.6mm×250mm,5μm)流动相为甲醇-1%冰醋酸(50∶50);流速1.0ml·min-1;检测波长330nm;进样量10μl;理论塔板数按阿魏酸峰计算应不低于2000。2.1.2对照溶液的制备精密称取阿魏酸对照品12.51mg,置25ml棕色量瓶中,加70%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。2.1.3标准曲线及线性回归方程精密量取对照品溶液对照品储备液(0.5004mg·ml-1)0.2,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml,置25ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。分别进样10μl,记录色谱图,计算峰面积。以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标回归,计算得回归方程:Y=2572.79X-31.97,r=0.9998。结果表明阿魏酸进样量在0.040～1.001μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。2.1.4阴性样品的制备精密量取提取液25ml,蒸干,残渣加水20ml使溶解,用醋酸乙酯振摇提取3次,每次30ml,收集醋酸乙酯液,蒸干,残渣用甲醇适量使溶解,并转移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,滤过,即得。阴性样品的制备:按处方制备缺当归的样品,照供试品溶液的处理方法制备阴性供试品溶液。取对照品溶液、供试品溶液、阴性供试品溶液各10μl,按“2.1”项色谱条件,分别进样测定,记录色谱图。结果见图1。2.1.5精密度取供试品溶液,重复进样6次,每次10μl,记录阿魏酸峰面积,结果RSD为1.85%(n=6)。结果见表1。2.1.6溶液稳定性试验取供试品溶液,在0,2,4,6,8,24h分别进样10μl,记录阿魏酸峰面积,结果RSD为2.10%(n=6),表明用本方法处理的溶液在室温放置24h稳定。结果见表2。2.1.7加样回收率和rsd取已知含量同一批样品(阿魏酸含量5.53μg/ml),精密量取10ml,精密加入阿魏酸对照品溶液(50.04μg/ml)1ml,按供试品制备方法制备供试品溶液,平行制备6份,分别进样10μl,结果表明:平均回收率为98.20%,RSD为1.84%(n=6)。结果见表3。2.2提取工艺过程的分析2.2.1提取率的测定按妇血安片处方比例取当归等药材2份,200g、30kg,分别按制备工艺,加水煎煮3次,依次为2、1.5、1h,合并煎液,滤过,即得。分别提取液测定阿魏酸含量,计算提取率。结果见表4。由实验结果可知,相同的工艺参数下小试规模的提取液阿魏酸含量要高,即在已有的工艺参数下放大生产规模不能重现实验室的试验结果,同时实验室模拟工艺结果也较低,由于阿魏酸为热敏性成分,故作者认为温度为提取率低下的主要原因,同时生产放大后药材量增加产生堆积不利于成分的提取以致实际生产不能重现实验室的试验结果。2.2.2温度对阿魏酸提取率的影响按照处方比列称取各药材饮片3份,每份200g,置圆底烧瓶中,采用电热套加热分别控制温度为保持沸腾、95℃、85℃,按工艺提取,合并提取液,测定提取液中阿魏酸的提取率。结果见表5。2.2.3样品的提取工艺取药材饮片,按照处方比列称取3份,总重为2.0kg,装于提取柱中(柱内径0.15m,长度2m,夹套可通蒸气,两端具有过滤片及阀门),工艺参数为:加水煎煮3次(依次为2、1.5、1h),提取温度95℃,提取方式分别采用以下方法:①,静态提取:提取过程提取柱保持静态。②,药材动态提取:提取过程中将阀门关闭,将柱上下翻转180°,以3次·h-1的频率进行翻转。③,药液循环提取:提取过程中,底部阀门稍开,流出提取液从顶部倒回提取罐中。溶剂循环量为3倍总溶液体积。测定提取液中阿魏酸的提取率。实验示意图见图2。结果见表6。2.2.4阿魏酸的提取取药材饮片,按照处方比列称取,分别在实验室规模及中试规模(0.5m3双动态高效节能提取罐,自制,专利号ZL200720058787.2)下按制备工艺进行提取(提取温度95℃,提取过程中实验室规模振摇使成动态提取,中试规模则采用搅拌与药液循环使成动态提取),合并提取液,即得。提取液测定计算阿魏酸的提取率。结果见表7。提取示意图见图3。3影响妇血安片提取工艺的因素妇血安提取液中阿魏酸含量测定方法分别比较了甲醇-水-冰醋酸(28∶72∶1)、甲醇-水-磷酸(28∶72∶0.1)、甲醇-1%冰醋酸(50∶50)为流动相。结果表明,用甲醇-1%冰醋酸(50∶50)为流动相,分离效果理想,峰形较好。妇血安片的提取工艺过程影响因素很多,其中主要的影响因素有提取温度以及提取过程中药材与药液的动态程度。在实际生产中一般采用一定压力的蒸气为加热源,温度较高,由于大生产的规模较大药液传热慢,容易局部温度过高而使成分降解,阿魏酸为热敏性成分,故在实际生产中应对提取温度严格控制,使提取过程保持微沸状态,避免温度过高导致有效成分的损失。药材堆积模拟试验证实,药材的堆积是大生产提取率下降明显的主要原因,提取过程药材的翻动是改善大生产提取率低下的良好方法;药液循环