生化分离的一般过程

第一章绪论1.1生化分离的一般过程1.2生化产品的类型1.3生化产品的特点1.4生化分离工作的重要性1.5 生化分离工程的分类1.6 方法选择的基本原则1.7 设计前应了解的信息1.8 对环境的考虑1.9 分离效率的评价1.10 生化分离技术的发展趋势1.1生化分离工作的一般过程

动、植物组织、体液等

胞外产物

提取发酵液→预处理→c分离→c破碎→碎片分离→初步纯化→精制→制成品培养液加热沉淀匀化离心沉淀分子筛无菌过滤酶反应调pH离心超声萃取吸附离子超滤絮凝过滤胞溶过滤萃取亲和冻干错流过滤研磨错流过滤超滤吸附喷干憎水结晶电泳基本定义生化分离工程的定义：为提取生物产品时所需的原理、方法、技术及相关硬件设备的总称，指从发酵液、动植物细胞培养液、酶反应液和动植物组织细胞与体液等中提取、分离纯化、富集生物产品的过程(DownstreamProcessing)。单元操作：

完成一道工序所需的一种方法和手段。

1.2生化产品的类型1.2.1按用途分类食品类。保健品类。医用类产品（1998年，719种）。抗生素112种农业用产品（1998年，36种）。生物试剂类（1998年，975种）。1.2.2按分子量大小分类Mass<1000D：抗生素、有机酸、aa、多肽类等Mass>1000D：酶、抗原、抗体、多肽、蛋白质类1.2.3按发酵时目的产物所在的位置分类cell内：胰岛素、白细胞介素、干扰素、重组蛋白质cell外：抗生素（青霉素、红霉素）、胞外酶（α-淀粉酶）等1.3生化产品的特点1)、应用面广。医药卫生、环保、动植物生长调节、食品和试剂等2)、种类繁多。分子量X0–X000000，结构功能复杂，生物活性各异。3)、目的产物在初始物料中的含量低。青霉素（4.2%）、庆大霉素（0.2%）、干扰素（<50ug/ml）。4)、产品价格与产物浓度呈反比:5)、初始物料成分复杂。除少量产物外，还有大量的细胞及碎片、其他代谢物（几百上千种）、培养基成分、无机盐等。6)、生物活性物质的稳定性低。易变质、易失活、易变性，对温度、pH值、重金属离子、有机溶剂、剪切力、表面张力等非常敏感。7)、产品的质量要求高，尤其是药品等。成品青霉素对其强致敏原---青霉噻唑蛋白必须控制RIA值（放射免疫测定）小于100（1.5*10-6），蛋白类药物（杂质<2%）、重组胰岛素（Humulin）中杂蛋白小于0.01%。1.4生化分离工作的重要性1)、生化产品的必经的过程(一夫挡关)。2)、回收率不高。抗生素(80%左右)，蛋白质(60-90%)。意义?3)、分离纯化昂贵。下游研究费用占整个R&D费用的50%以上；产品的成本构成中分离纯化的成本站全部成本的40-80%;精细和药用产品的成本比率更高;大多数酶70%。意义?4)、基因工程的R&D费用，下游占50-80%。基因工程表达产品成本85-90%；劳动力和物力成本占整个劳动力的70-90%。意义?5)、中药现代化的重要技术平台。农学、分离科学、生化分析、药学等6)、提供产品竞争力的关键技术之一。WTO，降低生产成本、提高产品标准。7)、环境污染的治理（慢性铅中毒）1.5 生化分离工程的分类原理技术应用Phasechange1)、蒸馏乙醇沸点和蒸汽压2)、精馏有机溶剂回收0h3)、蒸发制盐、抗生素富集Extraction1)、液-液萃取抗生素分配系数2)、液-固萃取中药分离3)、固相萃取天然产物4h4)、双水相萃取酶5)、反胶束萃取DNA重组蛋白质6)、超临界萃取中药提取Densitydifference1)、常规离心细胞分离比重、密度2)、高速离心细胞、病毒分离2h3)、超速离心病毒,细胞器,DNA1.5 生化分离工程的分类Membrane1）、常规过滤发酵液膜分离2）、微滤细菌、细胞碎片3）、超滤蛋白质、酶4h4）、纳滤有机物回收,污水治理5）、反渗透海水淡化、污水处理Solubility1）、结晶味精溶解度2）、盐析蛋白质、酶4h3）、有机试剂蛋白质4）、等电点法蛋白质、酶1.5 生化分离工程的分类Absorbance1）、非特异性吸附抗生素(吸附)2）、特异性吸附抗体2h3）、亲和吸附抗原抗体4）、离子交换抗生素Chromatography1）、凝胶抗生素、蛋白质(色谱或层析)2）、亲和色谱抗体6h3）、离子交换蛋白质ElectricField1）、磁性免疫微球抗原抗体(场致分离)2）、区带电泳蛋白质6h3）、等速电泳蛋白类4）、等点聚焦电泳蛋白类1.6 方法选择的基本原则1)、尽可能简单、低耗、高效、快速。

反面例子----中药现代化、超临界萃取； 正面例子2)、分离步骤尽可能少。Why? A)、

φn为总回收率，λn为各单元回收率。意义？ 分离步骤越多，回收率越低；如φ10=0.9510=0.63，φ5=0.955=0.77 B)、分