溶瘤病毒在肿瘤诊治中的应用-课件

溶瘤病毒

在肿瘤诊治中的应用1PPT课件溶瘤病毒

在肿瘤诊治中的应用1PPT课件肿瘤vs病毒2/3：RNA病毒 逆转录病毒，可引起爬行类（蛇）、禽类、哺乳类包括灵长类白血病、肉瘤、淋巴瘤和乳腺瘤等1/3：DNA病毒 包括乳头状瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒和疱疹病毒、乙型肝炎样病毒等2PPT课件肿瘤vs病毒2/3：RNA病毒2PPT课件与人类肿瘤发生关系密切的病毒 ①逆转录病毒（如T细胞淋巴瘤病毒，HTLV－I）

②乙型肝炎病毒（HBV）——DNA病毒

③乳头状瘤病毒（HPV）——DNA病毒

④Epstein－Bars病毒（EBV）——DNA病毒

3PPT课件与人类肿瘤发生关系密切的病毒 ①逆转录病毒（如T细胞淋巴瘤相辅相成，互为因果？相生相克，亦敌亦友？肿瘤vs病毒：Friendorfoe？4PPT课件相辅相成，互为因果？肿瘤vs病毒：Friendor感染性疾病研究与防治

广东省高水平大学重点学科建设项目汕头大学5PPT课件感染性疾病研究与防治

广东省高水平大学重点学科建设项目汕头大必要性：发展现状和问题新发传染病频发，缺乏有效的应对防控方法肿瘤发生率有上升趋势，缺乏早期诊治方法学科优势缺乏有效整合，资源利用率较低粤东地区经济低迷，缺乏创新型高科技产业6PPT课件必要性：发展现状和问题新发传染病频发，缺乏有效的应对防控方法基础研究开发应用新病原发现与鉴定项目简介疫苗、化学药物、单抗、诊断/示踪试剂（病毒与肿瘤）新发传染病未知新病原致瘤病毒病原进化跨物种传播致病机制免疫防御协同创新人才培养学科建设平台与基地建设7PPT课件基础研究开发应用新病原项目简介疫苗、化学药物、单抗、诊断/示8PPT课件8PPT课件针对传统病原学方法难以在短时间内实现对新型病原体进行准确鉴定的问题，通过完善病原体高通量快速诊断平台及流行病学调查平台，提高感染性疾病尤其是新发传染性疾病的病原学鉴定、诊治以及应对突发公共卫生事件的能力，研制开发相关的诊断试剂；针对病毒性传染病普遍缺乏特异性治疗手段的问题，通过深入研究病原跨种属传播以及与宿主互作的分子机制，开发新型抗病毒药物和疫苗；针对目前肿瘤早期诊断困难、治疗特异性低下的问题，开发病毒靶向载体，用于肿瘤的示踪诊断及治疗。

研究内容9PPT课件针对传统病原学方法难以在短时间内实现对新型病原体进行准确鉴定项目运行总体思路：研究方向新发感染性疾病的病原学诊断、生态、进化、感染机制与致病机理研究感染性疾病、炎症相关基因与肿瘤关系的研究及病毒载体在肿瘤示踪和治疗上的应用打造三个学科联合体：感染性疾病与免疫感染与肿瘤肿瘤与溶瘤病毒载体

10PPT课件项目运行总体思路：研究方向10PPT课件1）学科平台建设2）人才引进和培养3）基础研究4）应用开发研究5）对外交流与合作项目建设学科平台人才应用研究基础研究其他11PPT课件1）学科平台建设项目建设学科平台人才应用研究基础研究其11P平台基地建设高通量病原快速诊断与大数据分析平台II+至III+级生物安全实验室及实验动物平台疫苗与人源单抗制备平台高通量肿瘤特异嗜杀性病毒载体筛选平台12PPT课件平台基地建设高通量病原快速诊断与大数据分析平台12PPT课件总体建设目标及社会意义整体提高我国应对新发传染性疾病的防治能力及肿瘤早期诊断与治疗的能力；全面提升我校临床医学以及转化医学水平，为我省的产业转型及升级作出具体贡献；在产、学、研的良性循环中，努力打造国内一流，在局部领域达到国际领先水平的大学。13PPT课件总体建设目标及社会意义整体提高我国应对新发传染性疾病的防治能新城疫病毒与溶瘤病毒治疗2015.09.2914PPT课件新城疫病毒与溶瘤病毒治疗2015.09.2914PPT课件溶瘤病毒(oncolyticvirus)An

oncolyticvirus

isa

virus

thatpreferentiallyinfectsandkills

cancercells.具有复制能力的肿瘤嗜好性杀伤型病毒

15PPT课件溶瘤病毒(oncolyticvirus)An

oncoly溶瘤病毒(oncolyticvirus)利用靶细胞中抑癌基因的失活或缺陷从而选择性地感染肿瘤细胞，在其内大量复制并最终杀伤、裂解肿瘤细胞，而对正常细胞没有杀伤作用。directdestructionofthetumourcells(lysisorapoptosis)

直接感染并杀死癌细胞releasenewinfectiousvirusparticles复制并杀伤更多癌细胞stimulatehostanti-tumourimmuneresponses激发免疫反应，吸引更多免疫细胞来继续杀死残余癌细胞优点：选择性、可自我复制、可改造、可多路径攻击癌症，同时破坏癌细胞的多种进程，并触发“旁观者机制”（安全性、耐药性、持续性？）16PPT课件溶瘤病毒(oncolyticvirus)利用靶细胞中抑癌基溶瘤病毒(oncolyticvirus)天然对于肿瘤细胞具有特异性感染或杀伤能力的病毒（呼肠孤病毒、细小病毒、新城疫病毒）经人为改造（专化，强化和弱化）过，对肿瘤细胞具有特异杀伤能力的病毒（甲型流感病毒，腺病毒，麻疹病毒和单纯疱疹病毒）

1：去掉毒性基因（弱化、安全）

2：加上特异识别癌细胞的特殊蛋白（专化、特异）

3：加入激活针对肿瘤的免疫基因（强化、效果）

1991，第一个转基因溶癌病毒（HSV）报道；2006，中国批准H101上市

17PPT课件溶瘤病毒(oncolyticvirus)天然对于肿瘤细胞具History

-usingwildtypeorattenuatedviruses1904,TheLancet：慢性白血病妇女，流感，病变白细胞减少，病情意外好转1912，Ginecologia,DrDepaceNG(Italy):宫颈癌接种减毒狂犬疫苗，肿瘤自发消退、减小1950s，西尼罗河病毒、腺病毒天然弱毒株治疗1970s，水痘病毒vs急性淋巴性白血病1970s，麻疹vs白血病、Burkitt淋巴瘤、Hodgkin淋巴瘤

-potentialriskforhighpathogenicinfections18PPT课件History

-usingwildtypeoratHistory

-HSV-1GMvirusesHerpessimplexvirus1(HSV-1)起步：1991,Science,MartuzaRLetal：

HSV-1,失活胸苷激酶基因（TK），裸鼠恶性脑胶质瘤U87治疗第一代：1716毒株： 去除ICP34.5（γ

34.5）神经毒基因，正常细胞可凋亡，病毒无法复制；肿瘤细胞IFN缺失，PKR低表达，病毒可复制并溶瘤第二代：F及G207毒株： 进一步去除ICP6（编码核糖核酸还原酶大亚基），病毒无法正常复制；加入hEndo-Angio（人内皮抑素-血管生成抑素）第三代：G47Δ毒株： 进一步去除α47基因，防止已感染肿瘤细胞出现免疫原性低下19PPT课件History

-HSV-1GMvirusesHerpHistory

-Adenovirus-GMviruses腺病毒，smallgenome，AdEasysystem,butrelativelylowreplication

ONYX-015’:

首个临床基因重组株（1987加州Onyx公司）；

* 去除E1B55KDgene，解除对p53的抑制正常细胞：激活p53，病毒受抑制；肿瘤细胞：p53缺失，病毒复制

H101:世界上首个官方批准上市的溶瘤病毒药物（人5型Adenovirus，上海三维公司）

* 去除E1B55KD及非必需的E3基因用于难治性晚期鼻咽癌（配合5-FU，顺铂姑息治疗）

第二代：加肿瘤特异启动子（肿瘤特异抗原，端粒酶，生存素启动子，肝癌特异AFP启动子等）、抑癌基因（IL-24，RNApolIII-dependentU6shRNA，TRAIL）第三代：进一步去除E1B19KD,E1Abp924-947，加载抑癌基因（HCCS1等）改进：添加治疗基因（转基因治疗载体+溶瘤）20PPT课件History

-Adenovirus-GMviruseHistory

-Cowpox-GMviruses1991，CancerGenTher,MastrangeloMJetal:牛痘病毒TK中插入GM-CSF，选择性复制并激活EGFR/ras通路2006，MolTher，KimJMetal&Jennerex公司:使用全球推广的牛痘病毒惠氏株疫苗构建JX-594毒株2011，Nature，BreitbachCJetal:JX-594临床试验：首次证明静脉注射后可持续且选择性抗肿瘤21PPT课件History

-Cowpox-GMviruses199大规模随机临床试验黑色素瘤转移患者III期临床试验：HSV-1(编码粒细胞巨噬细胞集落刺激因子GM-CSF)头颈部肿瘤复发患者III期临床试验：呼肠孤病毒与紫杉醇、卡铂联用针对Sorafenib治疗无效的肝癌患者II期临床试验：JX-594vs支持疗法2002实体癌I期临床试验：NDVPV701（14/62例4~30月未复发）2006恶性神经性肉芽肿I/II期临床试验：NDV2HUJ(无严重不良反应，未恶化，1例三个月内完全缓解)国外其他报导：NDV-HUJ、NDV-73T、MTH68、PV701等作为溶瘤病毒已经分别进入Ⅱ、Ⅲ期临床实验。三期临床：安进（Amgen）T-Vec；CG0070（膀胱癌）；Reolysin（头颈癌）22PPT课件大规模随机临床试验黑色素瘤转移患者III期临床试验：HSV-新城疫病毒-AvianParamyxovirusType-1

（Newcastle

disease

virus,NDVorAPMV-1）Group:V

((-)ssRNA)Order:MononegaviralesFamily:ParamyxoviridaeGenus:AvulavirusSpecies:Avianparamyxovirus15-19kb，12serotype副流感腮腺炎麻疹仙台尼帕亨德拉副流感犬瘟

23PPT课件新城疫病毒-AvianParamyxovirusTypeAPMV-1的系统发育和进化ClassIClassIIClassIIINovel24PPT课件APMV-1的系统发育和进化ClassIClassIIC禽副粘病毒属的基因组结构6个结构蛋白NP：核衣壳蛋白P：磷酸化蛋白M：基质蛋白F：融合蛋白HN：血凝素-神经氨酸酶蛋白L：大聚合酶蛋白SH：小分子疏水性蛋白IGS：非转录基因间隔区

非结构蛋白特别是移码突变产生的W，V蛋白质表达可特异抑制鸡细胞的干扰素信号系统（IFNα/β拮抗剂）25PPT课件禽副粘病毒属的基因组结构6个结构蛋白非结构蛋白特副粘病毒中主要基因及功能NP、P、L可形成三种复合物，NP-NP、NP-P、NP-L、P-L，参与病毒颗粒组建26PPT课件副粘病毒中主要基因及功能NP、P、L可形成三种复合物，NPHistory人类感染NDV后，可能出现结膜炎、淋巴腺炎、轻微流感症状或无症，很快可康复。1970，TheLancet,WebbHE&GordonCE:胃癌农场主感染NDV后胃癌痊愈2002,2006:PV701,HUJ毒株临床试验2009，IntJOncol，Wildenetal：细胞对NDV敏感性与抗病毒基因RIG-I,IRF3,IRF7,IFN-β负相关，而肿瘤细胞低表达以上因子。2011：D90抑制人非小细胞肺癌A549细胞系2012：D90荷瘤裸鼠-诱导顺铂抗性的A549凋亡（可与化疗联用）27PPT课件History人类感染NDV后，可能出现结膜炎、淋巴腺炎、轻Mechanism肿瘤细胞低表达抗病毒因子，正常细胞高表达——选择性感染与复制NDV在人癌细胞中的复制是正常细胞的10000倍以上，无神经嗜性，安全强效诱导NK细胞，CD8+andCD4+效应细胞及TypeIIFN反应促进效应细胞活化与远端肿瘤凋亡，可与immunomodulatoryantibodies等系统性疗法联用灭活NDV可促进人外周血单核细胞分泌IFN-α，提高TRAIL表达，启动caspase级联反应NDV可通过分裂原活化蛋白激酶信号传导途径诱导凋亡（p38参与）致癌蛋白鸟苷三磷酸酶RacI表达帮助NDV复制及溶瘤，与肿瘤的锚定非依赖性生长有关NDV感染后不依赖于p53激发的内源性线粒体途径，而是直接改变线粒体内膜通透性，释放细胞色素-c及其他膜间隙蛋白，激活下游caspase-9形成凋亡小体，进而激活caspase-3介导肿瘤凋亡。28PPT课件Mechanism肿瘤细胞低表达抗病毒因子，正常细胞高表达—Mechanism—HN抗肿瘤的主要分子基础肿瘤细胞高表达富含唾液酸（NDV受体）的粘蛋白Sialocmucin(膜蛋白的0.5%)NDV感染后HN可大量切除唾液酸（负电），解除masking，暴露抗原，防止逃避淋巴细胞免疫监视与攻击，减少转移HN有血凝活性，还可在肿瘤表面表达并作为粘附分子，增强肿瘤细胞表面粘附性HN可提高肿瘤细胞对淋巴细胞的共刺激作用，提高抗原递呈活性，诱导CTL（可提高淋巴细胞活性标记CD69,CD25,抗HN单抗可特异阻断此反应；共刺激分子可使T细胞表面受体活化阈值从8000点降低到1500点，提高对抗原刺激的敏感性，而HN与细胞表面受体结合再破坏的过程，类似于共刺激分子对受体的触发）HN蛋白可通过上调效应细胞的凋亡配基，促进凋亡NDV具有多组织亲和性的免疫刺激性，感染后在细胞膜表面引入病毒的HN和F蛋白（作为非特性组分，可增强肿瘤细胞抗原的免疫原性），进而诱导T细胞的共刺激活性以及细胞因子和局部趋化因子的产生，增强特异性抗肿瘤作用NDV修饰的自体瘤苗29PPT课件Mechanism—HN抗肿瘤的主要分子基础肿瘤细胞高表达富Mechanism“旁观者机制”（bystandermechanism）——间接杀死无法被病毒感染的癌细胞血管萎陷（vascularcollapse）——病毒感染肿瘤血管，将免疫细胞召集至血管部位，将其摧毁，最终阻断输向肿瘤的血流抗病毒感染的旁观者机制——病毒将免疫细胞迅速召集至肿瘤部位，在抗病毒的同时，也攻击癌细胞溶瘤后免疫反应——病毒在感染、杀伤癌细胞的过程中制造的细胞碎片，可诱导机体制造cytokine等免疫刺激小分子，并激活树突状细胞，通过检查机体异物（如肿瘤组分）的存在，向T细胞发出警报，启动其应答机制，使免疫系统意识到病人体内有肿瘤正在生长30PPT课件Mechanism“旁观者机制”（bystandermec发展方向溶瘤疗法与传统疗法的协同结合免疫调节、抗肿瘤免疫反应的转基因溶瘤疗法（IL-2,TNF,IFN,GM-CSF等；需确定NDV容纳外源基因数量及基因大小的有效负载）加入肿瘤特异性启动子或受体，