痰涂片标准化操作

痰涂片标准化操作普仁医疗集团无锡市第五人民医院检查科刘君第1页主要内容标本搜集与运输抗酸菌涂片Ziehl-Neelsen染色显微镜读片检查成果登记与玻片保存抗酸菌涂片检查假阳性及假阴性也许原因

第2页标本搜集与运输第3页提纲标本容器标本编号搜集办法与运输注意事项标本质量评价第4页容积20-50ml广口半透明或透明材质一次性使用螺旋盖且能密封防水防渗出侧面容易标识（外壁有部分粗糙面）痰容器规格第5页哪种痰盒合适?第6页哪种痰盒合适?第7页哪一种容器可作为痰盒？第8页标本搜集搜集3份标本，是发觉传染性结核病人最优选择

搜集标本时要同步为患者和试验员提供方便。第9页搜集三份痰优缺陷超出三份痰后，检出也许性不能大幅度提升晨痰检出率比即时痰高搜集三份晨痰对住院患者比较适合前后两次检查在工作量较大时能发挥较大效率假如NTP指南中对搜集痰标本另有要求，能够进行调整第10页标本搜集即时痰-夜痰-晨痰

即时痰 就诊时夜痰

夜间留取痰晨痰 次日清晨留取痰

*假如规划指南有所调整，请根据指南调整第11页用于疗效监测随访标本随访标本(在治疗期间和结束时候搜集)晨痰另外一份标本根据NTP指南进行搜集第12页标本搜集安全意识:患者比标本有危险!假如有试验员指导监督病人留痰，那么他面临危险要远高于其他试验员第13页痰标本搜集生物安全

就诊者不要在试验室内留痰。在室外留痰，最佳在阳光直射地方。假如不能室外留痰，那么应在通风良好室内且远离他人。就诊者留痰时，监督病人留痰人员应站在留痰者身后或身边，而不是站在留痰者正面。第14页搜集标本操作指南

就诊者注意事项：如何减少对他人传染危险第15页在空气流动地点搜集标本流动空气能稀释气溶胶

UV光线能将结核菌灭活雾化消毒第16页标本搜集向患者解释清楚下列几点:为何需要痰标本；需要几份痰，检查三次痰必要性晨痰主要性，第二次送痰必要性第17页向患者宣传教育:如何留痰唾液或鼻腔分泌物不是合格痰标本合格痰标本来自肺深部什么是合格痰标本，如何咳痰，如何使用痰盒；运输痰盒注意事项第18页有关标本信息

留痰或开化验单日期病人姓名，性别，年纪，住址痰盒上必须有病人有关信息，不能标在痰盒盖子上诊断机构名称（假如标本是外单位送检话）第19页第20页专业机构痰标本运输耐药监测乡镇集痰点结防因此外机构送检标本第21页标本接收查对化验单检查标本质量体积(3-5ml)描述标本性状(干酪,血痰，粘液，唾液）登记标本性状和进行试验室编号第22页

只有取得高质量痰标本才能得到精确可信抗酸菌镜检成果第23页检查单参照样式第24页检查单内容病人一般信息：姓名、年纪、性别初诊病人还是随访病人痰标本送检日期镜检报告成果检测者及审核者报告日期

第25页抗酸菌涂片

第26页重点涂片过程涂抹一张符合要求涂片进行示范列出符合要求涂片关键点评价已经染色涂片第27页内容涂片制备涂片关键评价涂片第28页涂片制备

每一张玻片都要编号

涂抹痰标本

自然干燥

加热固定第29页使用铅笔在磨砂面上编号第30页使用竹木签进行涂抹第31页第32页不得使用火焰加热办法加速痰膜干燥×第33页

太厚合适太薄痰膜厚薄第34页合适痰膜厚度第35页好

脱落好

不均匀第36页

合适太厚太薄涂片厚度第37页涂片质量评价不均匀太厚形状不规则，太薄第38页形状不规范，太薄涂片质量评价第39页好涂片:

挑取了痰标本脓性部分做螺旋状轨迹涂抹均匀大小约为2cmX1cm

不要太厚：透过染色前痰膜能够隐约看到报纸上字第40页哪个涂片比较好？第41页Ziehl-Neelsen染色第42页染色步骤初染(碱性复红)脱色(盐酸酒精)复染

(亚甲兰)

第43页抗酸染色原理初染时碱性复红与细胞壁分枝菌酸结合脱色时脱色液不能将碱性复红从抗酸菌细胞壁上洗脱抗酸菌染色保持初染颜色复染提供背景对比第44页抗酸菌非抗酸菌Z－N染色原理

细胞壁脂质复合物第45页抗酸菌非抗酸菌碱性复红脱色Z－N染色原理复染第46页染色过程将涂片排放在染色架上滴加碱性复红染色液，加热出现蒸汽后，保持5分钟流水轻缓冲洗滴加脱色液，保持1分钟流水轻缓冲洗滴加亚甲兰复染液，保持1分钟流水轻缓冲洗第47页将涂片排放在染色架上，注意间隔第48页火焰固定？？？第49页滴加碱性复红第50页加热第51页滴加染液和加热第52页第53页滴加染液和加热第54页流水冲洗第55页不可大水流迅速冲洗第56页脱色第57页流水轻缓冲洗后，复染第58页流水洗去复染液第59页在玻片架上自然干燥第60页显微镜读片检查第61页显微镜简图第62页操作步骤第63页显微镜检查操作第64页第65页第66页涂片检查视野次序第67页2cm,3cm=150fields3cm2cm2cm=100fields2cm1cm1cm涂片镜检报告标准2verticallines,1cmeach=100fields第68页第69页第70页单一抗酸菌第71页“V”-字形第72页成簇抗酸菌第73页复染太浓造成影响第74页合适复染第75页76显微镜读片练习第76页第77页报告成果分级

阴性

未发觉抗酸菌/300视野

报告实际菌落数 1-8条/300视野 (1+) 3-9条/100视野(2+) 1-9条/l0视野 (3+) 1-9条/每视野 (4+) 达成或超出10条/每视野第78页涂片分级:4+

(每个视野达成或多于10条)

第79页涂片分级:2+(1-9条/10视野最少50个视野)第80页涂片分级:1+

3-9条/100视野第81页涂片分级:实际菌数

(1－8AFBin300fields)第82页将下列成果分级:第83页第84页

1＋第85页第86页

2+第87页第88页3+第89页第90页

6条(实际菌数)第91页第92页

4+第93页第94页

1＋第95页第96页3+第97页第98页

2+第99页第100页

4+第101页登记与玻片保存第102页内容提纲：

试验室化验单填写试验室登记本填写我国NTP推荐抗酸杆菌萋-尼氏法镜检成果报告标准报告假阴性、假阳性成果造成后果

第103页化验单参照样式第104页试验室登记本第105页填写说明：1.试验序号：为试验室流水号，每年从“1”开始，初诊患者3个标本，随访患者2个痰标本，每次均用同一试验序号编号。2.痰标本起源：根据患者做痰检查时情况，选择1栏填写。初诊患者填写门诊序号，随访患者填写患者登记号。3.性状：标本性状按照国家试验室质量控制新标准，分为干酪痰（A）、血痰(B)、粘液痰(C)和唾液(D)，分别按A、B、C、D分类登记。第106页填写说明：4.成果：涂片阳性者使用红笔统计为“数字+”，如“1+、2+、3+”，300个视野内仅见1～8条抗酸杆菌者填写“条数”；阴性成果填为“阴性”，不能统计为“-”或“（-）”。5.报告人：检查人员填写全名。6.备注：填写需要尤其说明事宜。第107页精确登记、报告应当具有完整性、连续性、可靠性、及时行，是结核病控制规划中十分主要一项内容。

第108页用红色笔标注阳性成果阴性成果应填记“阴性”不得以“-”体现。第109页成果填写必须精确，如填写抗酸菌详细条数时应如实填写而不应当简写为阴性或者阳性。随访成果也应当精确填写.第110页登记本统计有何问题？第111页玻片保存假如使用显微镜附带镜油，或者是购买粘度合适镜油（immersionoil）,而不是香柏油（cedaroil）,则不需使用二甲苯，直接使用镜头纸擦拭即可。第112页玻片保存干燥后玻片，按试验室序号及涂片编号放置在玻片盒中，寄存在阴凉干燥环境中。处于潮湿酷热环境中抗酸菌易于褪色（见下列图）第113页第114页乡镇查痰点涂片送区县结防所区县结防所涂片保存3个月第115页抗酸菌涂片检查

假阳性及假阴性也许原因

第116页假阳性原因染料沉渣或结晶等脱色不彻底抗酸性物质或细菌染色液中污染抗酸菌试验室污染第117页第118页脱色不彻底第119页假阳性造成成果就诊者被误诊误治随访病人延长了治疗时间挥霍了医疗资源第120页AFB痰检假阳性成果预防措施使用新载玻片进行对应检查。每个标本均使用新竹签完成涂抹。所有染液均通过滤。染色时玻片彼此保持一定距离。严禁使用染色缸染色。染色时勿使玻片上染液干燥第121页

滴镜油时，镜油容器或吸管不接触痰膜。不要用竹木签蘸镜油避免物镜镜头直接接触玻片痰膜。完整、精确标注痰盒、玻片和登记试验登记本。登记前、后对检查单和标本盒上标注进行认真查对。精确统计和报告成果AFB痰检假阳性成果预防措施第122页假阴性原因1）观测涂片视野数量不足2）镜检技术能力差3）染色操作不规范（抗酸杆菌颜色暗淡、背景太淡或过深）4）显微镜存在问题5）染液质量差

第123页假阴性造成成果结核病人没有得到正确诊断和治疗，向其他人传