分子生物组pcr检测程序性能验证标准操作程序

分子生物组pcr)检测程序性能验证标准操作程序1.目的：制定分子生物组检测程序性能验证标准操作规程，以规范检测程序性能验证操作。2.适用范围：所有采用基因扩增检验方法检测的项目。3.职责和责任人：3.1组长负责组织工作人员具体实施，并审核报告；3.2工作人员负责对适用范围内的检测程序进行验证操作，并撰写报告；3.3技术主管负责监督规程的实施；3.4质量主管参与对检验程序有效性的评价及指导；3.5检验科主任负责批准检测程序的实施。4.内容：4.1正确度：检测程序测定结果与真实值或参考值接近的程度。4.1.1验证方法：采用对照试验，将质控品或已获认可实验室的标本作为样品，进行定量分析，与质控品靶值或比对实验室检测值比较，误差在可接受范围即可接受。4.1.2样品数量：至少5份，包括正常和异常水平或不同常见基因突变型。4.1.3频率：至少每年2次。4.1.4判定标准：对于定性试验，阴阳性应一致；对于定量试验，应有≥80%的结果符合要求。4.2特异性：在可能存在其他成分的条件下，采用的方法能正确测定待测物的特性。4.2.1验证方法：取一份阴性标本，加入其他常见病原体高浓度核酸样本，进行10次独立的检测。4.2.2判断标准：观察并记录检测结果为阴阳性的差异。4.3精密度：同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。4.3.1验证方法：4.3.1.1重复精密度（批内精密度）：选择具有医学决定水平的高低值标本，在较短得时间内及稳定的条件下各作20次独立测定。计算其均值、标准差与变异系数。标本可用患者血清或选用质控品进行，所检测所有数据超出2SD的数据不能超过2个，否则应分析。重测时，不需要重新测试全部样本。如果发现多个离群值或数据点过于分散，需要检查可能导致这种误差的原因，并进行纠正后重新测试全部样本。计算出三次测定结果的平均值和每一稀释度的预期值。使用Excel软件进行二元一次的回归分析，以实测均值为X，以预期值为Y。在初步判断无离群值后，数据拟合为直线，所有数据几乎均落在一条直线上，相关系数≥0.95为符合要求。否则，应重新进行线性验证。测量范围指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。验证方法与线性验证相同，其线性范围即为测量范围。当肝炎系列核酸检测线性范围足够宽时，其范围即可成为其临床可报告范围。因为当上述验证的荧光定量PCR法核酸检测检测试剂盒说明书中检测程序的线性范围很宽时，高浓度已属临床高载量患者，符合抗病毒治疗指标，不必要对更高的载量进行精确检测；若结果低于检测限，已为临床疗效监测效果较好的指标，大量研究表明，此群患者对抗病毒治疗不敏感，因此对疗效监测意义不大，如果的确需要更低更准确的检测结果，则建议采用更敏感的检测方法。血液样本中的内源产物血红蛋白、胆红素和甘油三酯会对核酸的检测结果产生干扰，导致标本溶血、黄疸及脂血时检测结果不准确。验证方法是采用回收试验，分别在5个已知分析物浓度的样品中加入不同干粉或液体干扰物，达到制造商声明的干扰物浓度后进行检测、分析。判断标准是至少4个样品测量结果与分析物预期浓度偏倚<±7.5%时，说明干扰物对分