曹丽丽开题报告

基于PVN-rVLM-交感通路针刺防治脑心综合征作用机制研究09级针推专业硕士曹丽丽1/37针刺防治脑心综合征躯体交感通路机制研究

专业针灸推拿学研究方向经脉脏腑有关研究导师周美启专家研究生

曹丽丽2023年3月2/37目录序言国内外研究概况本项目创新点研究目标研究意义研究内容拟处理关键问题拟采取研究方案技术线路图预期成果可行性分析研究进度及详细安排致谢3/37序言自1937年Dozzy报道发生脑血管病时会引发心脏功能障碍以来，急性脑血管疾病能够引发继发性心脏血管疾病——脑心综合征（Cerebral-cardiacSyndrome，CCS），已被越来越多医学工作者所结识和认可。4/37序言脑心综合征是指因急性脑病主要为主要为脑出血、脑梗死、蛛网膜下腔出血或急性颅脑外伤等，累及下视丘、脑干和植物神经系统等所引发类似急性心肌梗死、心肌缺血、心律失常或心力衰竭统称。5/37序言脑心综合征在临床上有广义和狭义之分，最初将急性脑血管意外引发继发性冠状动脉疾患称之为脑心综合征，是比较狭义脑心综合征概念。广义脑心综合征概念即指多种颅内疾患引发引发继发性心脏损伤。6/37序言脑心综合征发病主要体现为心电图异常和心肌酶谱变化。急性脑血管病急性期时心电图变化可高达65%～75%，而动态心电图检测发觉心电图变化阳性率更高。CK-MB变化最为常见，意义也最大，其升高被以为特异性地反应心肌受损。7/37国内外研究概况①急性脑损伤后出现高颅压或其他损害脑组织构造受损→下丘脑调整功能障碍→引发自主神经功能紊乱→交感-肾上腺髓质活动异常→儿茶酚胺合成增多→心功能变化。②额叶眶回(13区)、边缘系统、丘脑下部及脑干病变均可使额-丘脑下部-胸腰交感神经通路完整性遭受刺激或损害而引发心电图变化。8/37国内外研究概况③急性脑损伤后脑组织中线位移和脑干及网状构造严重损伤均使心血管活动中枢功能失调而造成心电图发生变化。④急性脑损伤后丘脑下部及脑干上部自主神经受到严重破坏，迷走神经兴奋性减少，交感、副交感平衡失调而致心律失常。9/37国内外研究概况⑤急性脑血管意外患者急性期及恢复期血浆内皮素（ET）和心钠素（ANP）变化在脑血管意外及脑心综合征发病过程中起着主要作用。⑥急性脑损伤时，钙离子、自由基、白细胞三烯可加重脑水肿，并可使胰腺释放心肌抑制因子，直接作用于心肌，使冠状动脉缺血，心肌PH下降。10/37国内外研究概况⑦急性脑损伤早期，存在着不一样程度脑水肿，临床上脱水剂大量应用以及病人进食障碍，产生血容量不足及电解质紊乱，也可造成心脏损害。⑧高血压、动脉硬化、高血糖等。11/37国内外研究概况针灸疗法在治疗脑心综合征方面研究概况在临床上，傅立新、侯庆等通过应用醒脑开窍针法治疗脑-心卒中，发觉患者心功能部分异常指标如心肌收缩舒张功能异常、心搏出量及血管顺应性减少、心脏后负荷增高等都有显著改善。赵建国等观测不一样针刺办法治疗急性脑卒中引发心脏损伤临床疗效，成果不一样针刺办法对急性脑卒中引发心脏损伤患者神经功能及心电图都有改善。12/37国内外研究概况在试验研究中，石学敏等采取阻断一侧大脑中动脉造成局部脑缺血模型，观测脑缺血24h后心肌超微构造变化及针刺影响。成果表白，“醒脑开窍”针法对心肌超微构造损伤具有显著改善作用。13/37国内外研究概况交感神经释放神经递质去甲肾上腺素(NE)通过β-肾上腺素能受体(β-AR)对调整心脏功能起主要作用，是调整心脏功能最有力刺激物。心肌β-AR密度与交感神经突触间隙NE浓度呈负有关，心脏交感神经突触前膜上E转运蛋白(NET)是控制心肌间质中NE浓度最主要原因。NETmRNA主要存在于神经细胞体中，NET控制着交感神经释放于突触间隙和β-AR周围NE浓度，NET基因调控异常将造成NE水平长期增高，造成β-AR去敏感。14/37国内外研究概况以上这些研究都是在心脏损伤后来给予治疗，目前针刺在防治脑心综合征研究方面鲜有报道。本课题组前期试验研究中，在成功复制脑-心综合征大鼠模型后，立即给予针刺干预，通过检测有关指标，探讨了针刺在防治脑心综合征中作用。发觉电针能有效干预脑出血大鼠CK-MB水平升高、干预心肌受损程度，可使脑内兴奋性AA水平升高及交感神经系统兴奋性提升，以为这也许是电针防治CCS机制之一。15/37国内外研究概况本次研究意在前期研究基础上，针对脑心综合征发病过程即脑病及心，选择对脑病针对性较强“人中”和“风府”两穴以及对心病针对性较强“内关”和“心俞”两穴进行组方，观测CK-MB、心率变异性（HRV）、交感神经放电、心肌β1-AR及其上游调控原因心脏交感神经节NETmRNA体现水平变化，并深入阐释针刺防治脑心综合征躯体交感通路机制，为针灸临床治疗提供试验根据。16/37本项目创新点学术理念创新思维：创新地提出“脑心同病”、“脑心同治”观点。观测指标创新组合：交感神经放电+心肌β1-AR+NETmRNA体现水平。17/37研究目（1）PVN-rVLM–交感神经通路在脑心综合征发病过程中作用研究。（2）PVN-rVLM–交感神经通路在针刺防治脑心综合征中调控机制研究。18/37研究意义通过对脑心综合征发病机制以及针刺对其干预作用机制阐释，可为针刺防治脑心综合征提供试验根据，同步验证“脑心同病”、“脑心同治”观点，进而对丰富和发展中医针灸学理论、临床采取积极针灸防治措施具有重大意义。19/37研究内容①针刺对脑心综合征大鼠血清磷酸肌酸激酶同工酶（CK-MB）影响。②针刺对脑心综合征大鼠心率变异性（HRV）影响。③针刺对脑心综合征大鼠心交感神经放电活动影响。④针刺对脑心综合征大鼠心脏交感神经节NET及心肌β1-ARmRNA体现影响。20/37拟处理关键问题①脑心综合征动物模型复制及评价体系。②星状神经节复合体摘取和心交感神经分离。③交感神经在脑心综合征发病过程以及针刺对其干预作用中主要性。21/37拟采取研究方案试验动物：1）动物选择与分组：同等条件下饲养健康SD大鼠90只。随机分为3组：伪手术对照组、模型组、针刺组，每组30只。22/37拟采取研究方案（2）模型复制：采取许氏等报道大鼠脑心综合征动物模型（中华老年心脑血管病杂志，2023，3（2）：119-121）。详细制作办法是：大鼠术前8小时禁食不禁水，用0.3%戊巴比妥钠（30mg/kg体重）腹腔注射麻醉，俯卧位固定于脑立体定位仪上。取头皮正中切口，骨膜剥离器剥离骨膜，暴露前囟及冠状缝，选择注射点为右侧尾状核（AP1/RAT3/DV5，按照Paxinos和Watson办法），牙科钻钻孔，注射含胶原酶（1μ/μl）和肝素（7μ/μl）生理盐水1μl。假手术对照组改注射生理盐水1μl。模型成功评分判断：手术动物清醒后，根据Bederson等评定办法分为三级。1级：将大鼠尾巴提起，瘫痪侧前肢回收后屈曲于腹下，正常侧前肢向地面伸展；2级：除1级体征外，向瘫痪侧推大鼠时阻力较对侧显著减少；3级：除以上体征外，大鼠有向瘫痪侧侧旋行为。模型复制前先统计正常时心电图，心电图异常者清除。23/37拟采取研究方案（3）针刺办法：参照一般高等教育“十五”国家规划教材《试验针灸学》有关“常用试验动物针灸穴位”取穴标准。电针组选用“人中”、“风府”、“内关”和“心俞”，假电针组选用大鼠臀部非经非穴点。针刺办法：选用1寸毫针，直刺4～6mm，并连至PCE-A型程控电针治疗仪。电针参数：电流(IP-P)为1.5mA，频率为2Hz，连续电针20min。于手术第1天开始电针，1日1次，连续3天。假手术对照组、模型组均不予电针。24/37拟采取研究方案（4）核团定位：参照《大鼠脑立体定位图谱》（第二军医大学生理教研室，1974），试验结束行组织学判定。25/37拟采取研究方案（5）观测指标：①PVN、rVLM动作电位：采取中枢微电极统计办法。②PVN、rVLM内局部组织氨基酸、单胺类等活性物质含量：采取微电极微透析复合探针进行同步微量采样，采取高效液相泽普/质谱-电化学法检测。③心肌钙蛋白（cTnT）含量：根据双抗体夹心一步法反应原理，严格按照试剂盒说明书进行操作。④心电图：统计肢体Ⅱ导联心电图（10mm/mv,50mm/s）。26/37拟采取研究方案（6）数据分析与处理：①生物电信号采集及数据分析：用Biopac、SKY-A8和Powerlab多导生理统计仪及其配套专业软件统计，进行动作电位频阈和时序分析。③其他数据统计分析：用SPSS12.0统计软件进行F检查、t检查。

27/37大鼠立体定位图谱AP1/RAT3/DV528/37技术线路图技术线路图SD大鼠数据整顿与总结模型组心肌酶学等针刺组PVN、rVLM内氨基酸、单胺类物质等含量PVN、rVLM动作电位伪手术组脑心综合征模型复制

29/37预期成果（1）可预期研究成果①探明PVN-rVLM–交感神经通路在脑心综合征发病过程中脑内机制。②探明PVN-rVLM–交感神经通路在脑心综合征发病过程中脑内机制。③初步探明针刺后PVN、rVLM内与针刺防治脑心综合征关键性生物活性物质30/37预期成果（2）不可预期研究成果：研究过程中，也许出现某些新现象，对此深入研究，也许有新发觉；也也许部分预期成果位能得到，而得到某些其他有价值成果。总之，应细心捕捉试验中新现象，及时做出对应调整，以期得到最佳成果。31/37可行性分析（1）具有前期工作基础。本课题组在前期高质量完成安徽省教育厅自然科学研究计划项目之“电针不一样穴组防治脑心综合征作用及机制研究”（编号：2023KJ341B）和安徽省自然科学基金项目之“针刺防治脑心综合征躯体交感通路机制研究”（编号：070413121）时证明：针刺能够有效防治脑心综合征，交感神经活动参与了针刺防治脑心综合征过程，这将为本课题研究科学假说提出奠定了主要理论基础。32/37可行性分析（2）项目组组员构造合理。项目组是一支由针灸、电生理、组织解剖、生物化学等学科专业人员组成在长期科研过程中逐渐形成研究团体，具有明确而稳定研究方向，在学术、技术、经验等方面能优势互补，取长补短，集体攻关。33/37可行性分析（3）技术办法成熟。通过业已完成上述两个科学基金项目以及有关课题研究，已纯熟掌握本项目标关键技术——脑心综合征试验动物模型复制，中枢神经自发放胞外统计办法，以及微透析技术等，从而在试验技术办法上确保本课题顺利进行。34/37可行性分析（4）试验研究平台保障。本课题责任人所领衔经脉脏腑有关研究始终是安徽省、安徽中医学院重点扶持资助项目，是安徽省A类重点学科（中医学）、B类重点学科（针灸推拿学）、安徽省高等学校针灸基础与技术重点试验室、国家中医药管理局神经生物