复方沙坦酯片含量测定方法的建立

复方沙坦酯片含量测定方法的建立

氨基葡萄糖醇粉末是一种由苯磺酸氨基丙烯酸酯（aml）和氨基丙烯酸（cnc）组成的治疗高血压的复合剂。本产品是由各种血管紧张素受体阻滞剂和钙抗剂组成的药物。已有国内外文献报道,苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯(化学结构见图1)的组合在降血压1sz-33自动双重纯水蒸馏器岛津高效液相色谱仪(配有SIL-20AC进样器、SPD-20AUV检测器、LC-20AB泵及LCSolutions工作站,日本Shimadzu公司),BT25S电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司),SZ-93自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)。苯磺酸氨氯地平对照品(中国食品药品检定研究院,批号:100374-201204,含量质量分数99.9%),坎地沙坦酯对照品(中国食品药品检定研究院,批号:100685-200401,含量质量分数100.0%),复方坎地沙坦酯片(规格:坎地沙坦酯8mg/片,氨氯地平5mg/片,批号:20150501、20150502、20150503,沈阳药科大学研制),乙腈(色谱纯,天津市康科德科技有限公司),甲醇(色谱纯,天津市康科德科技有限公司),磷酸二氢钾(分析纯,天津市大茂化学试剂厂),重蒸水(实验室自制)。2方法和结果2.1溶液制备2.1.1对照品储备液的制备取苯磺酸氨氯地平对照品约14mg(以氨氯地平计约为10mg)、坎地沙坦酯对照品约16mg,精密称定,共同置于100mL量瓶中,用乙腈-水(体积比为3∶2)溶解并稀释至刻度,摇匀,得混合对照品储备液;精密量取混合对照品储备液5mL,置于100mL量瓶中,加乙腈-水(体积比为3∶2)稀释至刻度,摇匀,得质量浓度分别为5.00和8.00mg·L2.1.2供试品溶液的制备取本品10片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于氨氯地平5mg、坎地沙坦酯8mg),置100mL量瓶中,加乙腈-水(体积比为3∶2)90mL,超声(频率:59kHz,功率:250W)处理15min后,冷却至室温,用乙腈-水(体积比为3∶2)稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液1mL,置10mL量瓶中稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。2.1.3白色辅助溶液的制备按处方比例称取除苯磺酸氨氯地平、坎地沙坦酯以外的其余辅料,按“2.1.2”条下的方法操作,制成空白辅料溶液。2.2流动相、对照品、供试品溶液的制备色谱柱:ZirchromKromasilODS-1柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-乙腈-20mmol·L取“2.1”条下空白辅料溶液、混合对照品溶液及供试品溶液,按“2.2”条色谱条件进样测定,记录色谱图,典型色谱图见图2。在上述色谱条件下,苯磺酸氨氯地平与坎地沙坦酯的分离度均大于1.5,辅料对二者的含量测定均无干扰,理论塔板数按坎地沙坦酯计算应不低于3000。2.3苯磺酸氨氯地平以氨氯地平计质量浓度为5.分别精密量取“2.1”条下混合对照品储备液各4.0、4.5、5.0、5.5、6.0mL,分置于100mL棕色量瓶中,加乙腈-水(体积比为3∶2)溶液稀释至刻度,摇匀,配制成苯磺酸氨氯地平(以氨氯地平计)质量浓度分别为4.00、4.50、5.00、5.50、6.00mg·L2.4峰面积lm精密量取“2.1”条下混合对照品溶液,进样20μL,重复进样6次,记录峰面积。6次重复进样苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯峰面积RSD分别为0.4%和0.6%,表明色谱系统精密度良好。2.5重复性评价试验取同一批号样品(20150501),按“2.1.2”条下操作,平行制备供试品溶液6份,以“2.2”条下色谱条件测定,计算苯磺酸氨氯地平及坎地沙坦酯含量,进行重复性评价。6份供试品溶液中苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯含量的RSD分别为0.8%和0.7%,结果表明方法的重复性良好。2.6空白辅料用量试验分别取苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯对照品适量,按处方比例加入空白辅料,配制成供试品处方量中主药成分含量质量分数分别为80%、100%和120%的供试溶液,每个质量浓度配制3份,在“2.2”色谱条件下进样分析。结果均符合测定要求,见表1。2.7进样峰面积测定取“2.1”条下供试品溶液,按“2.2”条下色谱条件,分别于0、2、4、6、8、10h进样,记录各峰面积。苯磺酸氨氯地平及坎地沙坦酯在10h内峰面积RSD分别为0.5%和0.4%。表明供试品溶液在10h内基本稳定。2.8苯磺酸氨氯地平及坎地沙坦酯百分标记量的测定取三批样品,按“2.1.2”条方法操作,制备供试品溶液,另取混合对照品溶液,按“2.2”条下色谱条件分别进样测定,按外标法以峰面积计算苯磺酸氨氯地平及坎地沙坦酯百分标示量,结果见表2。结果表明,复方坎地沙坦酯片中苯磺酸氨氯地平和坎地沙坦酯标示量的百分含量符合要求。3讨论3.1对照品溶液的测定本品为复方制剂,故检测波长的选择需要兼顾二者的吸收情况。采用紫外分光光度仪,以流动相为溶剂对苯磺酸氨氯地平、坎地沙坦酯的对照品溶液分别进行扫描,结果表明苯磺酸氨氯地平在238nm处有最大吸收,坎地沙坦酯在254nm处有最大吸收。根据两主药在各波长下的响应,由于坎地沙坦酯在238nm处吸光强度与在254nm处吸光强度相当且制剂中的辅料在此波长处均无吸收,因此选择238nm作为测定波长。3.2加入醋酸盐对药物保留时间的影响参照已有文献[13-14]与《中华人民共和国药典》标准及欧美药典中的条件,最初尝试了甲醇-水,乙腈-水系统,发现苯磺酸氨氯地平不出峰。继续对乙腈-缓冲盐(醋酸盐,磷酸盐)体系考察,发现加入醋酸盐时苯磺酸氨氯地平的峰形较差,不能满足测定要求,而磷酸盐可以提高药物保留时间稳定性,且峰形好。pH考察发现流动相pH对氨氯地平保留时间影响大,pH升高,保留时间延长,可能由于苯磺酸氨氯地平在不同pH条件下的电离平衡移动所致。坎地沙坦酯为非极性物质,在弱酸条件下峰形好且保