《川产道地药材生产技术规程 黄连（味连）》编制说明

124-《川产道地中药材生产技术规程黄连》（征求意见稿）编制说明目录TOC\o"1-1"\h\u一、 工作简况 -2-二、 标准编制原则和主要内容 -5-三、 主要试验(或验证)的分析、综述报告 -7-四、 采用国际标准和国外先进标准的程度 -33-五、 与有关的现行法律、法规和强制性国家标准的关系； -34-六、 重大分歧意见的处理经过和依据 -34-七、 作为强制性国家标准或推荐性标准的建议 -34-八、 实施标准的要求和措施建议 -34-九、 废止现行有关标准的建议 -34-十、 其他应予说明的事项 -34-工作简况（一）任务来源根据四川省市场监督管理局2022年6月7日发出的《关于下达2022年度地方标准制修订项目立项计划的通知》（川市监函〔2022〕295号），批准由西南交通大学牵头起草地方标准《川产道地中药材生产技术规程-黄连》。（二）目的意义黄连是四川著名的道地药材之一，具有历史悠久，质量及产量佳，目前，黄连优质高产种植技术方法不尽相同，没有统一的标准，在种植技术缺乏可操作性标准。并且由于缺乏规范化生产技术，目前通过人工种植(养殖)的药材品种不到药材总量的2%。由于栽培品种较少，栽培历史不长，中药材生产技术落后、栽培管理粗放，种植技术还停留在只求成活、不讲产量与质量的低水平上，与一般的粮食作物和经济作物相比，中药材生产技术至少落后10-20年。另一方面，现有生产技术科技含量较低，不完善配套，规范化程度低，一些技术难点长期没有突破。根据《中华人民共和国中医药法》和《四川省中医药条例》中指出，国家鼓励发展中药材规范化种植，鼓励建立道地中药材评价体系，扶持道地中药材生产基地建设，保护道地中药材，省人民政府有关部门应当建立川产道地药材保护和质量体系，制定并发布川产道地药材省级中药材标准。同时，《四川省中药材产业发展规划（2018-2025年）》指出以中药材产业标准体系为抓手，以道地、大宗药材产业发展为重点，推进我省中药材产业高质量发展。故本标准从黄连高产关键问题入手，采取自主创新和积极引进并重的原则，结合黄连生产特点，针对企业人力资源、前提方案、关键过程控制、产品检测等，根据中药材安全、有效、高产的要求，旨在提高中药材质量稳定性和安全性，保障人民身体健康。工作过程成立起草小组2021年12月，标准起草工作小组向四川省质量技术监督局递交了《川产道地中药材生产技术规程-黄连》的申报书，2022年06月获批准立项。2021年12月成立了标准起草小组，标准起草工作组就标准的基本框架及内容进行了充分讨论，研究了标准的编写工作并对工作组成员分工、工作进度及时限要求作了具体安排。起草阶段2022年01月-2022年02月，标准起草小组展开调研，对黄连高产栽培技术相关文献进行研究并进行野外调查取样。2022年03月-2022年05月，标准起草小组对各地道地与非道地药材栽培技术进行比较。2022年06月-2022年07月，拟定标准编制提纲，起草标准。标准起草小组收集国内外有关标准文献资料，进行分析比较，同时根据各地合作种植基地的试验结果，确定标准的范围及主要技术内容，提出标准编制提纲。根据GB/T1.1-2020《标准化工作导则第一部分：标准化文件的结构和起草规则》编制原则，编制标准初稿。征求意见阶段2022年07月-2022年08月，形成征求意见稿。经过标准主要起草成员的充分讨论及多次修改和完善，在主产区瓦屋山、峨眉山、乐山等地黄连生产合作社及种植户、相关合作药业单位以及重庆市中药研究院等中广泛征求意见，并获得标准征求意见反馈建议，经过修改和完善，最终形成了《川产道地中药材生产技术规程-黄连》（征求意见稿）。主要起草单位及人员分工主要起草单位单位名称牵头/协作单位主要工作任务西南交通大学牵头单位总负责和组织，标准起草与完善重庆市中药研究院协作单位标准起草及完善瓦屋山药业协作单位标准起草、黄连生产与试验沙湾合作社协作单位标准起草、黄连生产与试验眉山市彭山区卫生局协作单位标准起草、黄连生产与试验乐山市犍为县卫生计生局协作单位标准起草、黄连生产与试验乐山市犍为县中医院协作单位标准起草、黄连生产与试验主要起草人员姓名工作单位任务分工备注谭睿西南交通大学统筹协调、制定标准制订方案瞿显友重庆市中药研究院资源参与标准起草、检索、编制及资料复核任瑶瑶西南交通大学参与标准起草刘洋西南交通大学参与标准起草冷沁洁西南交通大学参与标准起草吴晓青西南交通大学参与标准起草顾健西南民族大学参与标准起草严光玉洪雅县瓦屋山药业参与标准起草杨钰乐山市沙湾区沙湾镇农场村经济合作社参与标准起草标准编制原则和主要内容（一）编制原则本标准的编制遵循以下原则：科学性原则本标准的制定应充分考虑特色栽培及加工技术与道地药材生物学特性、产地环境与的内在关系，注意揭示所提炼特色技术的科学内涵。实用性原则本标准的制定应根据道地药材产区实际生产情况确定标准中相关技术及技术方法，防止脱离实际，标准的制定应具有用于指导道地药材生产加工的针对性、实用性和应用价值。先进性原则本标准的制定应在突出传统特色技术同时，积极推荐具有道地产区已经在应用的现代技术。（二）主要内容标准主要内容如下：1.标准规定了川黄连道地药材高产栽培技术的术语和定义、产地环境、栽培、采收加工、标识、包装、贮存、病虫害防治等技术要求。2.通过在本标准中引用而构成为本标准中的条款。凡注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本文件。3.标准中黄连为毛茛科植物黄连CoptischinensisFranch.、三角叶黄连CoptisdeltoideaC.Y.ChengetHsiao或云连CoptisteetaWall.的干燥根茎。以上三种分别习称“味连”、“雅连"、“云连”。本标准中涉及的为味连。黄连（味连）具有喜湿润忌干旱，怕强光喜弱光忌高温，在霜雪下叶片能保持常绿不枯，在零下18℃的低温条件下，可正常越冬的生物遗传学特性。4.标准规定栽培黄连（味连）的产地环境，如生态环境，包括海拔、无霜期、平均气温、光照、水分、土壤、地形地势，产地环境质量等技术参数。5.标准的选地原则是在栽培黄连（味连）的生态环境基础上，结合现代栽培技术对种植地的具体要求，是川黄连道地药材的主要成因之一。6.整地：包括熏土、翻土、开沟作厢等。7.大田搭棚与移栽定植其中搭棚是黄连（味连）栽培生产中避免阳光直射植株，保证生长旺盛，发育均一的关键技术之一，也是栽培黄连（味连）维系道地药材质量的成因之一，标准规定了搭棚技术参数、移栽定植时间、行株距等技术参数。8.田间管理：培土与施肥是黄连（味连）栽培生产中关键技术之一，培土促进植株侧芽和根茎的发育，施肥保障植株生长旺盛，是增加产量和保证质量的，本标准规定了补苗、除草、培土与施肥、荫棚管理等技术参数。9.病虫害防治:规定了黄连（味连）主要病虫害的农业防治与化学防治方法。主要试验(或验证)的分析、综述报告（一）不同产地的黄连的生态分析1.1黄连样点空间分布格局分析根据数据库、文献及本课题组的实际调查发现，黄连生长最适宜区主要分布在四川洪雅、重庆石柱、武隆、巫溪、湖北利川、恩施等地。海拔、9月降水量以及2月降水量等7个生态因子是影响黄连生长的主要生态因子，相关分析结果显示，在一定范围内，降水量与海拔的升高有利于黄连中总生物碱含量的积累。本研究采用高效液相色谱法同时对三种黄连药材中7种生物碱成分进行了含量测定研究;以各生物碱及总生物碱的含量为指标按省份分组进行统计分析,初步确定了最优黄连产区为四川洪雅、湖北恩施、利川以及重庆等地。同时在生态位模型理论的指导下,利用最大信息熵模型对黄连进行适生性的研究,结合统计学理论知识对采样点的生境适宜度值进行分等,并以ArcGIS软件输出黄连生长适宜性等级图,结果表明,生境适宜度范围为[0-1],值大于0.7798的区域为黄连的最适宜生长区域,从数据以及图形中可以看出,这些区域包括四川洪雅、湖北恩施、利川等。生态因子常常影响着药材有效成分的积累,本研究在利用最大信息熵模型进行适生区域研究的同时,将获取的影响黄连生长的主要生态因子与黄连的质量信息进行了相关性分析,明确了黄连总生物碱与生态因子之间的关系,并从中选取了海拔、2月降水量、9月降水量、等温性4个关键因子做品质等级划分,并利用软件进行品质影响分析,得到每个因子的品质等级图和因子等级叠加图以及最终三种黄连品质区划等级图。1.2生态因子分析雅连分布的生态因子范围：年有效积温3419.6℃，最冷季均温为-3.3-15.6℃，最热季均温为22.5-38.7℃，年均温为8-10℃，年均降水量为1000-1800mm，年均日照为1161h，土壤类型主要为富含腐殖质的黄棕壤、红壤，土壤质地宜为轻壤土或壤土等。结合分布点的生态因子及气候划分来说，主要分布于亚热带湿润气候，气候温和，雨量充沛，四季分明，雨热同季，夏无酷热，冬无严寒。味连分布的生态因子范围：年有效积温3419.6℃，最冷季均温为-3.6-16.6℃，最热季均温为21.5-37.7℃，年均温为14.4℃，年均降水量为2000mm，年均日照为1140h左右，土壤类型主要为富含腐殖质的黄棕壤、红壤，土壤质地宜为轻壤土或壤土等。结合分布点的生态因子及气候划分来说，主要分布于亚热带湿润气候，气候温和，雨量充沛，四季分明，雨热同季，夏无酷热，冬无严寒。从各项生态因子来看，味连、雅连各生态因子差异不显著，水平分布上无明显的分界。从生态因子变异系数来看，味连和雅连中的生物碱成分与气候及土壤等生态因子之间存在较好的相关性。与各生物碱相关的主要气候因子是日照时数、极端最高温、极端最低温；主要土壤因子是水解性氮、有机质、速效磷及海拔高度。1.3全球最大生态相似度区域分析黄连为著名的四川道地药材，目前黄连的主产区为四川省的峨眉山市、洪雅县、彭州市、崇州市、重庆石柱及湖北利川等地，并且其周围县市也有种植。1.4与生物碱相关的生态因子分析黄连中的化学成分与其生长的环境的日照时数、海拔高度、气温、年降雨量及土壤的有机质、水解性氮、速效磷、速效钾、pH等生态因子之间存在较好的相关性，他们不同程度的影响着黄连中化学成分的积累，其中，与药根碱相关的生态因子主要是日照时数、极端最高最低温、水解性氮及海拔高度与速效磷;与非洲防己碱相关的主要是日照时数、最高温、有机质及海拔高度。与表小聚碱相关的主要是日照时数、有机质、极端最低最高温及海拔高度。与黄连碱相关的主要是日照时数、年均温、最高温、及海拔高度。与巴马汀相关的主要是日照时数、最高温、有机质。与小璧碱相关的主要是日照时数、极端最高最低温、海拔高度。与六种生物碱总和相关的主要是日照时数、有机质、极端最高最低温及海拔高度与水解性氮。（二）黄连种苗分等标准研究表2.1黄连种苗各指标测量编号株高(cm)叶数叶柄长(cm)叶长(cm)叶宽(cm)叶重(g)总重(g)根茎及须根重(g)1141.082.40.76217.8710.57.061.082.290.5831496.75.450.972.280.93412.5118.25.363.436.512.12510.567.833.21.594.512.36612.3137.1450.561.290.4771397.6651.263.161.15812.588.6540.772.040.8914.2691.480.471013.101023.072.13119.7065.13.440.411.381.3129.00144.33.330.681.291.211310.100.461.241.141412.2076.844.80.631.461.18159.201062.982.091697544.20.351.130.91711.67654.20.731.871.64187.8125.843.80.782.191.91911.542.071.92均值11.7898.6846.8424.5264.4470.9572.3491.318方差2.3982.4511.5901.0130.7930.6711.3220.613从表2.1可以看出种苗以株高及叶数的方差较大，说明这二者指标变异范围大。表2.2黄连种苗根茎及须根与其它指标相关性相关系数株高叶数叶柄长叶长叶宽叶重总重根茎及须根p值株高1-0.28140.81830.78570.71840.23470.1386-0.45690.0493叶数1-0.3329-0.1330-0.10050.15010.08730.06250.7994叶柄长10.67230.61820.39880.3475-0.22710.3499叶长10.71280.30110.2218-0.34000.1543叶宽10.45180.2994-0.24790.3062叶重10.95000.43790.0608总重10.61070.0055从表2.2可以看出，黄连须根及根茎与总重和叶重呈正相关，与株高、叶柄长负相关，说明种苗不是越高越好。种苗与总重的相关性显著，与株高呈显著性的负相关。而叶重与叶宽、叶柄长、叶长、株高、叶数成正相关。表2.3黄连种苗的基本统计数据指标样本数最小值最大值均值标准差株高8191.120.512.649452.332021叶数8193256.9462762.38004叶柄8054821.275526叶长8705741.056671叶宽81926.83.5371180.755673由表2.3可以看出，种苗株高均在12cm以上，叶数为6片以上。表2.4种苗动态聚类结果分组样本数株高叶数叶柄长叶长叶宽所占比例第1组169个14.30595.71017.42785.85443.72642.2%第2组157个10.68415.92365.79554.53183.204539.3%第3组74个13.41359.71626.5775.21083.797318.5%由表2.4可以看出，总体上种苗聚类成三类，第三组可定为Ⅰ级苗，第三组为Ⅱ级苗，第三组为Ⅲ级苗，所占的比例也较为合适。表2.5黄连种苗分级标准分项Ⅰ级Ⅱ级Ⅲ级指标叶数株高叶数株高叶数株高均值9.71621613.413515.92356710.684085.71005914.30592方差1.689921.3346241.0539391.0485211.0838151.212224临界值8.04.613.1调整8126946由以上数据可得出种苗分级的初步标准，Ⅰ级种苗：叶数≥8片，株高≥12cm；Ⅱ级种苗：叶数≥5片，株高≥9cm；Ⅲ级种苗与Ⅱ级苗的叶数相近，在生产中难以区分，因而把Ⅱ级种苗的叶数调整为6，Ⅲ级叶数降为4，株高降为6，Ⅲ级种苗：叶数≥4，株高≥6cm。等外级以下种苗需留床培育。后续研究发现，种苗分级不能单从叶片数目及株高两方面进行划分，后续还需对更多的因素进行考察，以完善种苗分级标准。（三）黄连种植生产研究3.1种植资源研究3.1.1研究方法黄连为著名的四川道地药材，目前黄连的主产区为四川省的洪雅县、大邑、彭州市、汶川县、安县等地，并且其周围县市也有种植。洪雅县地处四川盆地西南边缘，地理坐标为东经102°49'-103°32'，北纬29°24'-30°00'，位于成都、乐山、雅安三角地带，东接夹江县、峨眉山市，南靠汉源县、金口河区，西临雅安雨城区、荥经县，北界名山县、丹棱县，距成都147公里、乐山55公里、眉山50公里、雅安62公里。幅员面积1896.49平方公里。洪雅县属中亚热带湿润气候，年降雨量1435.5毫米，日照1006.1小时，年无霜期307天，年平均气温16.6℃，属中亚热带湿润气候。洪雅县地形由西南向东北高低梯次变化形成高山、深丘、浅丘、台地、河谷、坝，地貌以山地丘陵为主，河谷平坝分布在青衣江、花溪河两岸，素有"七山二水一分田"之称。全县呈南北两端宽，中间狭窄，形状如哑铃。南北长64km，北部宽46km，中间仅15km，境内有瓦屋山、玉屏山、金舟山、八面山、九龙山、隐蒙山等。洪雅县有大小河流330条。青衣江洪雅段总长58.3公里。汉王湖属青衣江水系一支流--香樟河。汉王湖集雨面积达28平方公里，水域面2067700平方米，湖长15公里，水均深17.1米，主湖湾有10条，长约7公里。湖中有170余座青山环抱，有九湾18坳之称。洪雅县有桫椤、珙桐、银杏、箭竹、红豆木、桢楠等植物近4000种，其中一类植物有桫椤、珙桐;有大熊猫、扭角羚、小熊猫、麝鹿、金钱豹、红腹角雉等野生动物400余种，其中一类保护动物有大熊猫、扭角羚、金钱豹。中草药种类达2000余种，常用的有280余种，其中杜仲、黄连、厚朴、红豆杉、薯蓣等规模较大。该县气候温和湿润,环境无污染,发展无公害农业特别是药材种植具有得天独厚的条件，同时当地居民具有近50年的黄连种植经验。2018年，总人口35.2万，其中：农村人口25.3万、城镇人口9.9万。是典型的山区农业县,农民收入主要来源于种、养殖业和务工收入。乐山市沙湾区范店乡四川省乐山市沙湾区一个典型的山区乡。面积54.377平方公里。辖10个村委会，60个村民小组和1个社区。总户数1473户4745人。东临龚嘴沙湾两镇，南面与峨边县五渡镇隔河相望，西靠峨嵋山市龙门乡，北连峨嵋山市和沙湾镇。2006年已通过省级中药材基地验收。是远近闻名的中药材之乡。耕地面积4780.62亩。地理坐标介于东经103°25′13″至103°30′15″和北纬29°17′25″至29°23′20″之间。境域轮廓呈锅边形，周边相邻3个县(市、区)，平均海拔1094米，最高点为畜丰村3组笋子山，海拔1740米。乡人民政府驻地海拔530米左右，距沙湾城区18.38公里。范店乡属中亚热带湿润季风气候，为低山温和中高山秋冬季雾照区。年日照为1010小时左右，日照百分率为20%--30%。最高气温为35℃，最低气温-3.5℃，全年无霜期天数为300--315天，常年降雨量1500--1700毫米。最高海拔1740米，最低海拔528米。范店乡党委政府以黄连、白术、林竹、干果、茶叶为支柱产业，走出了一条有范店特色的农业产业化道路，全乡黄连、白术等中药材种植面积已达到一万亩，林竹发展已初具规模，现拥有林竹面积5.5万亩，木材蓄积量达15万立方米。综合环境因素调查分析表明,洪雅县和乐山市沙湾区范店乡中高山地带生态环境特别有利于川黄连生长。中药材种植业的发展有利于合理利用时间、空间和土地资源,有效保护洪雅道地药材的种质资源,对巩固退耕还林成果,增加农民收入,致富一方农民具有极为重要的作用。近年来,县委、县政府立足资源优势,切实加强对中药材种植业的经费支持,县农业技术部门制定了切实可行的发展规划、实施方案和具体措施,并不断加强中药材种植技术的培训推广,各中药材发展的主要乡镇,也纷纷提出了切合各乡镇实际的发展措施,最终确认洪雅县和乐山市沙湾区范店乡为黄连种植示范区。3.1.2研究过程黄连种植主要是采取林间套作、零散种植、规模化承包三种模式，保留优良种植模式不变，提升合理密植。在雅安洪雅地区，由于雅连为无性繁殖，且生长海拔将高，栽培极为困难，课题组联合企业，克服重重困难，将雅连种植面积由50亩增加至200亩。在乐山市沙湾区范店乡，味连种植面积达到一万亩以上。建立黄连GAP药源基地及制订生产SOP从源头上保障临床有关于黄连基本药物品种的质量与产量制定生产SOP，加强黄连药材的生产建设，提高产量，从而实现资源的可持续性发展由于世界对中医药的逐渐接受和任可的原因，我国过去那种以不规范的药材种植老路已经行不通了，为了规范黄连种植加工，使黄连生产达到优质高产无公害的标准，与国际接轨，使中药走向世界。通过对黄连产区的种植历史、生态环境、种质资源、良种选育、黄连指标性成分及活性成分的检测。最终改善产区传统生产中存在的不足，形成黄连规范化种植规程种子采收及育苗——栽培管理——田间管理——病虫害防治——采收加工——运输储存，完善的黄连现代农业下SOP制定。通过规范化种植生产出来的黄连具有优良的品质，保证从源头做到标准化、现代化。为中药黄连品质从源头把关。3.1.3实地考察图3.1洪雅县黄连种植项目组成员多次到洪雅进行实地考察，考察不同季节，不同生长年限的黄连生长情况，加工采收情况。图3.2味连种植基地图3.3雅连种植基地项目组成员多次到乐山市沙湾区范店乡进行实地考察，考察不同季节，不同生长年限的黄连生长情况，加工采收情况。图3.4范店乡味连种植基地项目组成员多次到大邑进行实地考察，考察不同季节，不同生长年限的黄连生长情况，加工采收情况。图3.5大邑黄连春夏图3.6大邑黄连秋冬项目组成员多次到安县高川乡黄连进行实地考察，考察不同季节，不同生长年限的黄连生长情况，加工采收情况。图3.7安县高川乡黄连（四）黄连生物碱成分含量测定色谱条件研究中国黄连C.chinensis根茎中含小檗碱(berberine)、黄连碱(coptisine)、表小檗碱(epiberberine)、甲基黄连碱(worenine)、掌叶防己碱（巴马汀）(palmatine)、药根碱(jatrorrhizine)、非洲防己碱(columbamine)、小檗红碱(berberrubine)、木兰花碱(magnoflorine)、groenlandicine等。三角叶黄连C.deltoidea的根茎中也含小檗碱、黄连碱、掌叶防己碱（巴马汀）、表小檗碱、甲基黄连碱、药根碱、groenlandicine、木兰花碱等。李佳川等通过建立胰岛素抵抗细胞模型，观察黄连“药材－部位－生物碱”成分对胰岛素抵抗模型细胞培养液中葡萄糖消耗的影响。结果发现黄连生物碱能明显改善胰岛素抵抗，这对防治与胰岛素抵抗相关的代谢综合症或并发症具有一定临床意义。同时也说明了黄连生物碱部位为黄连发挥降糖作用的主要部位，因此本研究建立了黄连中7种小檗型生物碱的含量测定方法，通过主要的7种异喹啉类主要生物碱含量的差异来评价不同种川黄连的品质，为研究其降糖药效差异奠定基础。4.1仪器与材料Angilent1260-II型高效液相色谱仪；BS-110S电子分析天平（北京赛多利斯电子天平有限公司）；超声波清洁器（昆山市超声仪器有限公司）。groenlandicine、表小檗碱、药根碱、黄连碱、巴马汀购于成都普思生物生物科技有限公司（批号分别为PS161130-03、PS161130-01、PS161124-01、PS161201-01、PS161130-02，含量≥98%）非洲防己碱购于成都曼斯特生物科技有限公司（批号为MUST-14072213，含量≥98%）、盐酸小檗碱购于中检院（批号为110713-200911，含量≥98%）。甲醇、乙腈（色谱纯，sigma）；三乙胺、磷酸、十二烷基苯磺酸钠、磷酸二氢钾均为分析纯。4.2药材来源本研究收集黄连药材15批，包括味连6批，雅连6批，凤尾连3批，均由西南交通大学生命科学与工程学院宋良科教授鉴定。详细产地及编号见表4-1。表4.1黄连产地及编号编号品种产地1味连四川省洪雅县瓦屋山药业2味连四川省洪雅县瓦屋山药业3味连四川省洪雅县瓦屋山黄连种植基地4味连四川省荷花池药材市场5味连四川省乐山市麻子坝6味连四川省乐山市麻子坝7雅连四川省洪雅县瓦屋山药业8雅连四川省洪雅县瓦屋山药业9雅连四川省洪雅县瓦屋山药业10雅连四川省洪雅县瓦屋山黄连种植基地11雅连四川省洪雅县瓦屋山黄连种植基地12雅连四川省峨眉山黄湾乡13凤尾连四川省洪雅县瓦屋山14凤尾连四川省洪雅县瓦屋山15凤尾连四川省洪雅县瓦屋山4.3色谱条件4.3.1波长选择groenlandicine、表小檗碱、非洲防己碱、药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱紫外吸收图谱如图4.1所示。7种黄连生物碱的紫外吸收在270、345nm附近出较为接近，因此根据文献选择345nm作为检测波长。图4.17种生物碱紫外吸收图4.3.2流动相pH的选择以乙腈-0.4%的磷酸二氢钾（含0.4%SDS，分别用磷酸、三乙胺调节pH2.03.0、4.0、6.0、9.0）34：66为流动相，流速：1ml/min，柱温：35℃，检测波长：345nm，分别进样，测得的色谱图如图4.2所示。pH2.0pH4.0pH2.0pH4.0pH6.0pH9.0pH6.0pH9.0图4.2不同pH选择的色谱图从结果可以看出，在pH2.0时，表小檗碱和药根碱峰完全重合；在pH4.0时，表小檗碱和药根碱略有分开；在pH6.0时，表小檗碱和药根碱的分离度分别为0.94和1.34。在pH9.0时，表小檗碱和药根碱的分离度分别为11.59、4.63。所以选择磷酸二氢钾调节pH9.0。4.3.3缓冲盐的选择分别以乙腈-0.05mmol/L磷酸二氢钾（含有0.4%SDS，pH9.0）（34:66）、乙腈-0.05mmol/L醋酸铵（含有0.4%SDS，pH9.0）（34:66）、乙腈-0.05mmol/L碳酸氢铵（含有0.4%SDS，pH9.0）（34:66）为流动相，流速：1.0ml/min，柱温：35℃，检测波长：345nm，分别进样，测得的色谱图如图4.3所示。图4.3不同缓冲盐选择的色谱图从结果可以看出，以醋酸铵和碳酸氢铵为流动相，groenlandicine、表小檗碱、非洲防己碱、药根碱等峰均出现特别严重的拖尾和变形，峰形不佳。而以磷酸二氢钾为流动相，groenlandicine、表小檗碱、非洲防己碱各峰稍有拖尾，峰形较佳，因此选择磷酸盐缓冲液为流动相。4.3.4流动相比例的选择分别以乙腈-0.05mmol/L磷酸二氢钾（含有0.4%SDS，pH9.0）（34:66）、（32:68）、（30:70）为流动相，流速：1.0ml/min，柱温：35℃，检测波长：345nm，分别进样，测得的色谱图如图4.4所示。图4.4不同流动相比例色谱图从结果可以看出，流动相比例30:70，整个分析周期时间为75min；流动相比例32:68，整个分析周期时间为55min；流动相比例（34:66），整个分析周期时间为45min。因此选择流动相比例为34:66。4.3.5色谱条件色谱柱AngilentEclipseXDB-C18(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈-0.4%磷酸二氢钾（含有0.4%SDS，0.6%三乙胺，磷酸调节PH9.0）（34:66），流速1.0mL·min-1，柱温35℃，检测波长345nm，进样量10μL。4.3.6对照品溶液的制备分别精密称定7种对照品适量，盐酸甲醇（1:100）溶解制得每1mL含有1mg的对照品储备液。精密吸取各对照品储备液适量，配制成每1mL分别含groenlandicine、表小檗碱、非洲防己碱、药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱、为0.026、0.043、0.030、0.031、0.019、0.029、0.067mg/mL的混合对照品溶液。4.3.7供试品溶液的制备取黄连粉末约0.1g(过三号筛），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25mL盐酸甲醇（1：100），密塞，称定重量，超声提取45min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，放置，取上清液，过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液。（五）不同地区的味连、雅连、凤尾连生物碱成分的含量我们研究测定了6批味连、6批雅连、3批凤尾连的生物碱含量。结果显示，总生物碱含量：味连>凤尾连>雅连，小檗碱含量：味连>凤尾连>雅连，巴马汀含量：味连>雅连>凤尾连，黄连碱：味连>凤尾连>雅连，表小檗碱含量：味连>雅连>凤尾连，非洲防己碱含量：味连>凤尾连>雅连，药根碱含量：雅连>凤尾连>味连；groenlandicine含量：雅连>凤尾连>味连。雅连、味连和凤尾连中含量最高的都是小檗碱，其7种生物碱分别的含量大小具有一定的规律性。味连：小檗碱>黄连碱>巴马汀>表小檗碱>药根碱>非洲防己碱>groenlandicine，不同批次间之间差异较小；雅连：小檗碱>黄连碱>巴马汀>药根碱>groenlandicine>表小檗碱>非洲防己碱，不同批次之间差别较小；凤尾连：小檗碱>黄连碱>药根碱>巴马汀>groenlandicine>非洲防己碱>表小檗碱，批次之间药根碱和巴马汀含量差别较大不稳定，其他差别较小。因此，推测3种黄连7种生物碱的大小顺序具有一定稳定性和规律性，且3种黄连7种生物碱的大小顺序不同，可以运用7种生物碱含量大小顺序来鉴定不同种的黄连。为黄连质量标准的修订提供依据。精密称取过二号筛的黄连粉末0.1g，按2.5项方法制备供试品溶液，将供试品溶液和对照品溶液各10μL进样分析，分别测定3批不同品种黄连的生物碱含量，6批味连（S1-S6，S0为黄连生物碱混合对照品）的含量测定色谱图如图5.1所示，6批雅连（S7-S12，S0为黄连生物碱混合对照品）的含量测定色谱图如图5.2所示，3批凤尾连（S13-S15，S0为黄连生物碱混合对照品）的含量测定色谱图如图5.3所示。1.groenlandicine2.jatrorrhizine3.columbamine4.epberberine5.coptisine6.palmatine7.berberine图5.16批味药材生物碱含量测定色谱叠加图1.groenlandicine2.jatrorrhizine3.columbamine4.epberberine5.coptisine6.palmatine7.berberine图5.26批雅连药材生物碱含量测定色谱叠加图1.groenlandicine2.jatrorrhizine3.columbamine4.epberberine5.coptisine6.palmatine7.berberine图5.33批凤尾连药材生物碱含量测定色谱叠加图（五）黄连的采收与加工研究5.1黄连的采收研究结果黄连通常在移栽后第五年收获。据试验，黄连栽后生长满5年收获的，较4年收获的单产增加54.61%；第六年收获的，一般比第五年收获可增产10%～15%。因此不宜提前收获，但也不宜超过6年，因过分延长生长期则黄连生长势减弱，根茎易腐烂，品质差，产量下降。黄连收获一般于10-11月进行，收获过早，根茎水分多，不充实，折干率低，但又不宜过迟，如迟至翌年春季雪化后收获，植株已抽薹开花，养分被消耗，根茎中空，产量降低，品质差。黄连宜选晴天先拆除荫棚，然后用二齿耙挖出全株，敲落根部附土，齐根基部剪去须根，齐芽苞剪去叶片，即得鲜黄连。分别收集根茎、须根及叶片，运回加工。5.2黄连的加工研究结果5.2.1产地加工研究结果性状味连多集聚成簇，常弯曲，形如鸡爪，单枝根茎长3～6cm，直径0.3～0.8cm。表面灰黄色或黄褐色，粗糙，有不规则结节状隆起、须根及须根残基，有的节间表面平滑如茎秆，习称“过桥”。上部多残留褐色鳞叶，顶端常留有残余的茎或叶柄。质硬，断面不整齐，皮部橙红色或暗棕色，木部鲜黄色或橙黄色，呈放射状排列，髓部有的中空。气微，味极苦。雅连多为单枝，略呈圆柱形，微弯曲，长4～8cm，直径0.5～lcm。“过桥”较长。顶端有少许残茎。黄连分级标准一等品：根条粗壮肥实，以根条无“过桥”，外表无糊黑焦烂、折断、须根，根茎头部无“青桩”（即叶柄残基），断面内心金黄色。二等品：根条稍细小，两端或一端有“过江枝”，肉身较枯瘦，有少数青桩，须根未完全去净，干燥。三等品：根茎细小，枯瘦和短小，并有“青桩”存在，有须根及“过江枝”掺杂。5.2.2炮制加工研究结果味连(1)净制：取原药材，除去杂质，抢水洗净，润透，切薄片，晾干。或用时捣碎。(2)酒黄连：取黄连片，用黄酒拌匀，闷润至酒被吸尽，置炒药锅内，用文火加热，炒干，取出放凉。黄连片每100千克用黄酒12.5千克(3)姜黄连：取黄连片，用姜汁拌匀，闷润至姜汁被吸尽，置炒药锅内，用文火加热，炒干，取出放凉。黄连片每100千克，用生姜12.5千克捣汁或干姜4千克煎汁。(4)萸黄连：取净吴茱萸，加水适量，煎煮半小时，去渣取汁拌入黄连片中，闷润至吴茱萸汁被吸尽，置炒药锅内，用文火加热，炒干，取出放凉。黄连片每100千克用吴茱萸1