常用培养基配方

伊红美蓝培育基伊红美蓝培育基原理一般用来鉴定大肠杆菌;当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色 ,再与美蓝结合形成紫黑色菌落,并带有绿色金属光泽;在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色,伊红和美蓝不能结合,故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透亮菌落;金葡菌在此培育基上不生长;常用的伊红美蓝乳糖培育基,可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌;假设有大肠杆菌,因其猛烈分解乳糖而产生大量的混合酸,菌体带H+,,从菌落外表的反射光中还可以看到金属光泽;用伊红美蓝培育基鉴定水中大肠杆菌步骤如下：①制作伊红美蓝培育基,趁热注入培育皿中,凝成平板,待用;②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水,按1：10稀释;③取毫升稀释液接种于伊红美蓝培育基上;用平板划线分别法进展分别;④将划线后的培育皿倒置37℃温箱中培育18～24小时;培育基中会消灭⑤将菌落接种于斜面培育基上由养分琼脂培育基制成 ;配置方法蛋白胨配置方法蛋白胨10g乳糖乳糖10g磷酸氢二钾2g琼脂20~30g蒸馏水1000ml2%伊红水溶液20ml13ml储藏培育基的制备先将琼脂加至900ml蒸馏水,加热溶解,然后参加磷酸氢二钾及蛋白胨,混匀使之溶解,再以蒸馏水补足至1000ml,调整PH为~;趁热用脱脂棉或绒布过滤,再参加乳糖,混匀后定量分装于烧瓶内,置高压蒸汽灭菌器内以115℃灭菌20min,贮存于冷暗处备用;制法将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正PH,,121℃高压灭菌15min备用;临用时参加乳糖并加热溶化琼脂,冷至50～55℃,参加伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板;麦康凯培育基原理全称麦康凯琼脂或是麦康凯一种用于分别鉴定的培育基,杆菌在其上呈红色或,有的菌落只是中间红色;配置方法17g3g猪胆盐或牛、羊胆盐5g氯化钠5g17g1000mL10g%结晶紫水溶液10mL%中性红水5mL麦康凯-制法将蛋白胨、胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL中,校正;将琼脂参加600mL加热溶解;将两液合并,分装于烧瓶内,121℃15min50～55℃时,参加结晶紫和中性红水溶液,摇匀后倾注平板;注：结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌;吲哚试验吲哚indol试验有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培育基中的色氨酸生成吲哚靛基质,经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用,生成玫瑰吲哚而呈红色,是为吲哚试验阳性;

LB配方1g0.5g1g-2g100mlLB培育基-LB培育基条件LB培育基-固态培育基LB固体培育基1L和液体一样,加15g琼脂粉,肯定要在温度降下之前加好抗生素,并且倒好板;LB配制：100mlLB培育基参加1.5g琼脂粉LB固体培育基置与55℃的水浴中,待培育55℃时手可触摸参加抗生素,以免温度过高导致抗生素失效,并充分摇匀;倒板：一般10ml倒1个板子;培育基倒入培育皿后,翻开盖子,在紫外下照10-15保存：用封口胶封边,并倒置放于4℃保存,一个月内使用;牛肉膏蛋白胨培育基养分琼脂配方10g；3g；5g；15～20g；1000mL；制法15%氢氧化钠溶液约2mL,校正pH至～;参加琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化;分装烧瓶,12115min;2%;甲基红试验甲基红试验-化学属性MethylRed肠杆菌科各菌属都能发酵,在分解葡萄糖过程中产生,进一步分解中,由于糖代谢的途径不同,可产生乳酸,、醋酸和甲酸等大量酸性产物,可使培育基PH值下降至以下,使甲基红变红;甲基红试验-试验方法挑取的待试纯培育物少许,接种于通用培育基,培育于36±1°C或30°C以30°C3~5天,从其次天起,每日取培育液1ml,加甲基红指示剂1~2滴,阳性呈鲜红色,弱阳性呈淡红色,阴性为黄色;迄至觉察阳性或至第5天仍为阴性、即可判定;甲基红为酸性指示剂,pH~,pK上,则随碱度而增加黄色,在或上下接近时,可能变色不够明显,此时应延长培育,重复;尿素酶某些能产生尿素酶,分解尿素产生大量的氨,使培育基变碱;将待检菌接种于含有尿素的培育基中,3518~24h,观看结果;红色为阳性,不变为阴性;主要用于肠杆菌科变形、普罗威登菌属、克雷伯菌属及假单胞菌属的鉴定;明胶液化gelauneliquefaction指把的现象;明胶液化-它的特征征;明胶液化-适应范围collagen而成的,因此,它是由产生于体外的蛋白酶进展分解的;用血清或蛋清清蛋白代替明胶也可看到大致一样的现象;VPVP试验-试验简介VPtest检验中常用的之一;某些在蛋白胨水中能分解葡萄糖产生,丙酮酸缩合,脱羧成乙酰甲基甲醇,后者在环境下,被空气中氧氧化为,二乙酰与蛋白胨中的生成红色化合物,称V－P+反响;VP1O’Meara氏法：将试验菌接种于通用培育基,于36±1°C培育48h,培育液1ml加OMeara试剂加有%肌酸Creatine或肌酸酐Creatinine的40%氢氧化钠水溶液1ml,摇动试管1~2min,静置于室温或36±1°C恒温箱,假设4h内不呈现伊红、即判48~50°C2h2Barritt氏法：将试验菌接种于通用培育基,于36±1°C培育4天、培育液先参加5°Cα萘酚2-na-phthol纯酒精溶液,再加40%氢氧化钾水溶液,摇动2~5min,阳性菌常马上呈现红色,假设无红色消灭,静置于室温或36±1°C恒温箱,如2h内仍不显现红色、可判定为阴性;快速法：将%肌酸溶液2滴放于小试管中、挑取产酸反响的三糖铁琼脂斜面培育物一接种环,乳化接种于其中,参加5%α-萘酚3滴,40%氢氧化钠水溶液2滴,振动5min,判定结果;不产酸的培育物不能使用;时,通用培育基中的磷酸盐可阻碍乙酰甲基醇的产生,故应省去或以氯化钠代替;生理盐水生理盐水就是%的氯化钠水溶液,由于它的渗透压值和正常人的、组织液都是大致一样的,所以可以用作补液不会降低和增加正常人体内钠离子浓度以及其他医疗用途,也常用作体外培育活组织、细胞;氯化钠：俗称盐、食盐;菌注射用水一般使用来溶解难溶于药物使用的,生理盐水就是我们静脉点滴常用的％的氯化钠注射液,外用具有肯定的杀菌消毒作用;所以它们不是一样的概念.;人体生活中所处环境的配方：0.9100毫升;

血琼脂平板制法：取养分琼脂PH7．6,加热使其溶解待冷至45-50℃,以灭菌操作于每100毫5-10用途：1．2．尿液,脓液3．分别标本用;胰蛋白胨胰蛋白胨水成分 胰蛋白胨10g；蒸馏水1000mL；制法 将上述成分溶解,校正pH;分装试管,121℃高压灭菌15min;Baird－Parker成分胰蛋白胨10g；牛肉膏5g；酵母膏1g；丙酮酸钠10g；甘氨酸12gLiCl·6H2O5g；琼脂20g；蒸馏水950mL；;增菌剂的配法30%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚蹄酸钾溶液10mL混合,保存于冰箱内;制法将各成分加到蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解;冷至25℃,校正p