《基因工程的基本操作程序》 省赛获奖 市赛获奖

基因工程的基本操作程序1．目的基因的获取2．基因表达载体的构建3．将目的基因导入受体细胞4．目的基因的检测与鉴定基因工程基本操作的四个步骤目的基因的获取阅读课本第一自然段，回答以下问题：2．获取目的基因的常用方法有哪些？（1）从基因文库中获取（2）利用PCR技术扩增（3）人工合成1．什么叫目的基因？并举例说明。主要是编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子1．原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区与RNA聚合酶结合位点启动子终止子启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因首端是RNA聚合酶识别和结合的部位并能驱动基因转录出mRNA。没有启动子，基因就不能转录。终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来，使转录终止。编码区非编码区非编码区内含子外显子启动子终止子2．真核细胞的基因结构注意：原核基因转录出的mRNA只能与编码区的

链配对，与编码区中互补链呢？真核基因转录出的mRNA只能与编码区的

配对。（一）从基因文库中获取目的基因1.基因文库：概念见课本2.基因文库的分类:（按外源DNA片段的来源分类）种类基因组文库：含有一种生物的全部基因部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：cDNA文库3.建立基因文库的目的

为了在不知目的基因序列的情况下，便于获得所需的目的基因。提取某种生物的全部DNA用适当的限制酶切一定大小的DNA片段将DNA片段与载体连接导入受体菌中储存基因组文库4.基因文库的构建方法（1）基因组文库构建单链互补DNA双链cDNA片段导入受体菌中储存与载体连接cDNA文库反（逆）转录酶DNA聚合酶（2）cDNA文库的构建——反转录法某种生物的单链mRNA思考：1．基因组文库和cDNA文库的比较2．如何从基因文库中得到所需要的目的基因？(见课本P9)文库类型cDNA文库基因组文库文库大小基因中启动子有无基因中内含子有无基因多少物种间的基因交流小大无有无有某种生物的部分基因某种生物的全部基因可以部分基因可以阅读课本第10页回答问题：（1）RCR的中文全称？PCR是一项什么样的技术？（2）PCR原理？利用这一技术获取目的基因的前提？（3）PCR的过程？这一过程利用了什么酶？（4）通过PCR使目的基因的数目如何增长？(三)利用PCR技术扩增目的基因5/3/G—GT—C3/5/A—GC—C5/3/引物ⅡG—G变性复性延伸1．变性(90－－95℃)：目的基因DNA受热变性，解链为单链；2．复性（55－－60℃）：引物与两条单链通过碱基互补配对原则结合；3．延伸（70－－75℃）：在Taq酶的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的DNA链5/3/A—G引物Ⅰ

概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术条件：原理：方式：以_____方式扩增，即___（n为扩增循环的次数）结果：聚合酶链式反应体外特定DNA片段双链DNA复制四种原料热稳定DNA聚合酶（Taq酶）指数2n在短时间内大量扩增目的基因前提：要有一段已知目的基因的核苷酸序列2种引物、模板DNA（含目的基因）蛋白质的氨基酸序列