2019生物A版学习课件16

专题十六生物技术实践

考纲专题解读

考点分布考题示例考查内容考试指导

2017课标H,37微生物发酵

传统发酵技术2016课标n,39果酒和果醋的制作

45分

iiii泡菜的腌制和亚硝酸

2013课标I,39

盐的测定

选修内容的考查方式略

微生物的培养、培养基

2017课标I,37有变化，有选修与必修

对微生物的选择作用

知识综合考查的趋势。

微生物的培养、微生物

2016课标I,39考查形式也略有变化，

数量的测定

减少了填空题，增加了

2016课标HI,39微生物的分离与培养

问答题，有侧重考查学

培养基对微生物的选

生的关键能力、核心素

2015课标I,39择作用、微生物数量的

微生物的培养与应

养的趋势。选修对必备

测定

用

105分知识的考查倾向于综合

微生物的分离与培养、

■■■■.性、应用性、创新性。

2014课标I,39培养基对微生物的选

微生物的分离与培养、

择作用

培养基对微生物的选择

微生物的培养、微生物

2014课标H,39作用仍是高考命题的热

数量的测定

点，试题常用创设情境、

微生物的分离与培养、

联系生产生活实际的方

2013课标H,39培养基对微生物的选

式加以考查

择作用

生物技术在其他方从生物材料中提取特

2017课标m,37

面的应用30分定的成分

444A2015课标II,39从生物材料中提取特

定的成分

考点各个击破

V

传统发酵技术

第c步试真题

1.（2017.课标H,37,15分）豆豉是大豆经过发酵制成的一种食品。为了研究影

响豆豉发酵效果的因素，某小组将等量的甲、乙两菌种分别接入等量的A、B

两桶煮熟大豆中并混匀，再将两者置于适宜条件下进行发酵，并在32h内定

期取样观测发酵效果。回答下列问题：

（1）该实验的自变量是、o

（2）如果发现发酵容器内上层大豆的发酵效果比底层的好，说明该发酵菌是

（3）如果在实验后，发现32h内的发酵效果越来越好，且随发酵时间呈直线上

升关系，则无法确定发酵的最佳时间；若要确定最佳发酵时间，还需要做的事

情是____________________________________________________________

（4）从大豆到豆豉，大豆中的成分会发生一定的变化，其中，蛋白质转变为

，脂肪转变为o

【答案】（1）菌种发酵时间（2）好氧菌（3）延长发酵时间，观测发酵效果,

最好的发酵效果所对应的时间即为最佳发酵时间（4）氨基酸和肽脂肪酸和

甘油

2.（2016•课标H,39,15分）苹果醋是以苹果汁为原料经发酵而成的，回答下列

问题：

（1）酵母菌的呼吸代谢途径如图所示。图中过程①和②是苹果醋生产的第一阶

段，在酵母菌细胞的中进行，其产物乙醇与试剂反

应呈现灰绿色，这一反应可用于乙醇的检验；过程③在酵母菌细胞的

中进行，与无氧条件相比，在有氧条件下，酵母菌的增殖速度O

(2)第二阶段是在醋酸杆菌的作用下将第一阶段产生的乙醇转变为醋酸的过程，

根据醋酸杆菌的呼吸作用类型，该过程需要在条件下才能完成。

(3)在生产过程中，第一阶段和第二阶段的发酵温度不同，第一阶段的温度

(填“低于”或“高于”)第二阶段的。

(4)醋酸杆菌属于核生物，其细胞结构中(填“含有”或“不

含有“)线粒体。

【解析】图示过程①和②分别表示无氧呼吸的第一、二阶段，场所均为细胞

质基质，橙色的重铭■酸钾溶液，在酸性条件下与乙醇发生化学反应，变为灰绿

色。过程③表示有氧呼吸的第二、三阶段，均在线粒体中进行。与无氧条件相

比，有氧条件下产生的能量更多，酵母菌的增殖速度快。(2)醋酸杆菌是一种

好氧菌，在氧气充足的条件下才能进行旺盛的生命活动，将第一阶段产生的乙

醇转变为醋酸的过程，需栗在有氧条件下才能完成。(3)第一阶段即果酒的制作，

所控制的温度范围是18〜25℃;第二阶段即果醋的制作，所控制的温度范围

是30〜35°C,所以第一阶段的温度低于第二阶段的。(4)醋酸杆菌属于原核生

物，其细胞结构中不含线粒体等复杂的细胞器。

【答案】(1)细胞质基质重铭酸钾线粒体快

(2)有氧(3)低于(4)原不含有

3.(2013•课标I,39,15分)回答下列有关泡菜制作的问题：

(1)制作泡菜时，所用盐水需煮沸，其目的是。为了缩短制作时间，

有人还会在冷却后的盐水中加入少量陈泡菜液，加入陈泡菜液的作用是

(2)泡菜制作过程中，乳酸发酵的过程即为乳酸菌进行的过程。

该过程发生在乳酸菌细胞的中。

(3)泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有、和

等。

(4)从开始制作到泡菜品质最佳这段时间内，泡菜液逐渐变酸。这段时间内泡菜

坛中乳酸菌和其他杂菌的消长规律是，

原因是。

【答案】（1）杀灭杂菌增加乳酸菌数量（2）无氧呼吸细胞质（3）温度

腌制时间食盐用量（4）乳酸菌数量增多，杂菌数量减少乳酸菌比杂菌更为

耐酸

第❷步理能力

一、与传统发酵有关的几种微生物的比较

项目酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌

生物学分类真核生物原核生物真核生物原核生物

生活方式异养兼性厌氧异养需氧异养需氧异养厌氧

适宜温度①________②_______③_________④________

⑤__________

发酵条件一直需氧一直需氧⑥________

主要用途酿酒、发面酿醋制作腐乳制作酸奶、泡菜

二、果酒和果醋的制作

1.果酒、果醋的制作原理及发酵条件比较

项目果酒制作果醋制作

制菌种酵母菌醋酸菌

作氧气、糖源充足时：

有氧条件下，大量繁殖：

原

C6H|2O6+O2--

反C6Hl2。6+6。2-----*6c。2+

理CH3coOH；

应6H2。；

缺少糖源、氧气充足时：

式无氧条件下，酒精发酵：

C2H5OH+O2―►

C6Hl2。6―»2c2H50H+2CO2

CH3COOH+H2O

酒精发酵的适宜温度为18〜

最适生长温度为30〜

发温度25℃;繁殖的最适温度为

35℃

酵⑦________左右

条pH耐酸耐酸

件氧气前期需氧，后期不需氧需要充足氧气

时间10-12d7-8d

通过观察、嗅、尝进行直观检通过观察变酸的酒的表面

测，也可通过显微镜观察酵母菌膜的形成、嗅、尝直观

发酵进程的菌形态和数目检测，也可用橙检测，也可用⑩________

检测色的⑧________在浓硫酸酸化比较醋酸发酵前后的pH

下与酒精发生⑨_______的颜检测，还可通过显微镜观

色反应的程度检测察并统计醋酸菌数目检测

制作流程图挑选葡萄f冲洗f榨汁f酒精发酵f醋酸发酵

11

果酒果醋

2.发酵装置

发酵装

部位操作

置图

制⑪___________时关闭充气口，制⑫

充气口

____________时连接充气泵输入无菌空气

⑬

排气口

充气口审"个尸

CH

出料口

⑭

长而弯曲

的胶管

出料口便于取料，及时监测发酵进行的情况

在发酵过程中，每隔12h左右将瓶盖拧松

a带盖的瓶一次，以放出此后再拧紧瓶盖。当发

C02,

子酵产生酒精后，再将瓶盖打开，盖上一层纱

布，进行制葡萄醋的发酵

3.操作注意事项

项目注意事项

选择新鲜的葡萄，榨汁前先将葡萄进行冲洗，除去灰尘和杂

材料的选择与处理

物的同时保留野生菌种，然后除去枝梗，以防葡萄汁流失及

污染

(1)榨汁机要清洗干净，并晾干

⑵发酵瓶等要清洗干净,用体积分数为⑮______的酒精进行

消毒，或用洗洁精洗涤

防止发酵液被污染⑶清洗葡萄时要先清洗后除枝梗

(4)发酵瓶排气管用曲颈管不用直管，可有效防止空气中微生

物进入造成的污染

⑸装入葡萄汁后，封闭充气口

(1)葡萄汁装入发酵瓶时，要留约⑯______的空间，目的是先

让酵母菌进行有氧呼吸，快速繁殖，耗尽。2后再进行酒精

发酵，还能防止发酵过程中产生的CO2造成发酵液的溢出

发酵条件的控制⑵在制葡萄酒时，要将温度严格控制在18〜25°C,时间控

制在⑰____________左右，需封闭充气口

(3)在制葡萄醋时，要将温度严格控制在30〜35C,时间控

制在⑱____________左右，并注意适时通过充气口充气

思维拓展fflnffliffl

(1)在葡萄酒的自然发酵过程中，起主要作用的是⑲

_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________O

(2)为了提高果酒的品质，更好地抑制其他微生物的生长，可以在果汁中加入⑳

______________________________________________________O

(3)在发酵过程中，随着酒精度数的提高，㉑也进入发

酵液，使葡萄酒呈现深红色。

(4)葡萄皮上除有酵母菌外，还有其他杂菌，但制葡萄酒时一般不会引起杂菌污

染，原因是在㉒的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝

大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到抑制，且酒精的产生也不利于

其他杂菌生长。

针对训练1(2016•天津理综，10,12分)天津独流老醋历史悠久、独具风味，

其生产工艺流程如下图。

|淀粉类原料叫廊郦野迎画画当智成然酷酷片画画

(1)在糖化阶段添加酶制剂需要控制反应温度，这是因为酶

(2)在酒精发酵阶段，需添加酵母菌。在操作过程中，发酵罐先通气，后密闭。

通气能提高的数量，有利于密闭时获得更多的酒精产物。

(3)在醋酸发酵阶段，独流老醋采用独特的分层固体发酵法，发酵30天。工艺

如下。

成熟酒酷醛能醯格成熟辞酷

①发酵过程中，定期取样测定醋酸杆菌密度变化，趋势如图。据图分析・，与颠

倒前相比，B层醋酸杆菌在颠倒后密度变化的特点是

,由此推测，影响醋酸杆菌密度变化的主要环境因素是

②乳酸含量高是独流老醋风味独特的重要成因。发酵过程中，发酵缸中

层醋醋有利于乳酸菌繁殖，积累乳酸。

③成熟醋醋中乳酸菌的种类明显减少，主要原因是发酵后期营养物质消耗等环

境因素的改变，加剧了不同种类乳酸菌的,淘汰了部分乳酸菌种类。

【解析】(1)酶的活性受温度影响，最适温度下，酶的活性最高。(2)通气会

促进酵母菌有氧呼吸，促进酵母菌群的繁殖，有利于获得更多酒精产物。(3)①

据图知，B层醋酸杆菌为“S”型曲线增长，变化趋势为先快速增长后保持稳定。

影响B层的主要环境因素为氧气、pH和营养条件。②乳酸菌为厌氧菌，应该

是下层发酵有利于其繁殖，如前面两个发酵缸中的B层，后面两个发酵缸中的

A层。③不同种类乳酸菌之间为竞争关系。

【答案】（1）在最适温度条件下催化能力最强（2）酵母菌

（3）①先快速增长后趋于稳定氧气、营养物质、pH②颠倒前的B层和颠倒

后的A（或不翻动，或下）③种间竞争（或竞争）

三、腐乳的制作

1.制作原理：多种微生物参与，其中起主要作用的是㉓______o毛霉等微

生物产生的㉔能将豆腐中的蛋白质分解成小分子肽和氨基酸；

㉕能将脂肪水解为甘油和脂肪酸。

2.制作流程

（1）毛霉的来源:传统腐乳制作,菌种来自空气中

的毛霉抱子。现代腐乳生产菌种是经过筛选

让豆腐t

的优良毛霉菌和L并且直接接种在豆腐t

长出毛霉

（2）需控制条件：温度为㉖，并保持

一定的湿度

（1）方法：逐层加盐,随层数加高而增加盐量，

接近瓶口表面的盐要铺厚一些

（2）盐的作用：a.㉗,

加盐腌制“使豆腐块变硬,以免后期制作中过『酥

烂；b.㉘•避免豆腐块

、腐败变质；c.调味

'（1）卤汤是由㉙及各种㉚配制

而成

加卤汤,（2）泗：卤汤中的酒含量一般控制在㉛左

装瓶'右.加酒可以抑制微生物的生长,同时使

腐乳具有独特的香味

（3）香辛料:可以调味,也具㉒的作用

密封腌制用酒精灯对瓶口灭菌后密封

3.影响腐乳品质的条件

项目说明

水的控制含水量约70%,用含水量过高的豆腐制腐乳，不易成形

盐的控制盐浓度过高会影响腐乳的口味；盐浓度过低，腐乳易腐

败变质

酒精含量一般控制在12%左右。酒精含量过高，使腐乳

酒的控制

成熟期延长；酒精含量过低，杂菌繁殖快，豆腐易腐败

温度控制温度为15〜18℃,适合毛霉生长

香辛料具有调味和杀菌的作用，也会影响腐乳的风味或质量

4.防止杂菌污染

（1）用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用沸水消毒。

（2）装瓶时，操作要迅速小心。加放卤汤后，要用胶条将瓶口密封。封瓶口时,

最好将瓶口通过酒精灯的火焰，防止瓶口被污染。

针对训练2（2012.海南单科，30,15分）回答下列关于腐乳制作的问题：

（1）腐乳是豆腐经微生物发酵后制成的食品。多种微生物参与了该发酵过程，其

中起主要作用的微生物是，其产生的蛋白酶可将豆腐中的蛋白质水解

为和;其产生的能将豆腐中的脂肪水解为

和0

⑵发酵完成后需加盐腌制，加盐还可以抑制________生长。

（3）腐乳制作的后期可加入由酒和多种香辛料配制而成的卤汤。卤汤除具有一定

的防腐作用外，还能使腐乳具有独特的o

【答案】（1）毛霉小分子的肽氨基酸脂肪酶甘油脂肪酸（2）微生

物（3）风味

四、泡菜的制作

1.制作原理：在无氧情况下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。

2.制作流程

测定亚硝酸盐含员|

|原料加工|~~"修整、洗涤、晾晒、一

切分成条状或片状

加入调味一

料、装坛

I加盐盐水砺~|H泡菜盐水

3.泡菜腌制过程中，乳酸菌、乳酸和亚硝酸盐的含量变化

发酵时期乳酸菌乳酸亚硝酸盐

少（有。2,乳酸菌活增加（硝酸盐还原菌的

发酵初期少

动受抑制）作用）

下降(硝酸盐还原菌受

最多(乳酸抑制其他积累、增多、

发酵中期抑制，部分亚硝酸盐被

菌活动)pH下降

分解)

减少(乳酸继续积累，

继续增多，pH下降至相对稳定(硝酸

发酵后期pH继续下降，抑制

继续下降盐还原菌被完全抑制)

其活动)

含量变化曲

巍

°发薛时间

°发酢时间VL°发酵时间

亚硝酸盐是硝酸盐还原菌促进硝酸盐还原形成的，而不是硝化

注意

细菌氧化氨形成的

4.操作注意事项

项目注意事项

(1)蔬菜应新鲜，若放置时间过长，蔬菜中的硝酸盐易被还

原成亚硝酸盐

材料的选(2)清水和盐的质量比为的________配制盐水，将盐水煮沸

择与处理后冷却。煮沸的作用是除去水中⑪________,并杀灭盐水

中的微生物。冷却后使用的目的是防止温度过高杀死乳酸

菌菌种

防止杂菌

每次取样用具要洗净，取样结束要迅速封口

污染

(1)创造缺氧环境：要选择合格的泡菜坛，不能漏气，以便

创造无氧环境，有利于乳酸菌发酵，防止蔬菜腐烂。泡菜

坛坛盖边缘内要注满水，以保证坛内乳酸菌发酵所需要的

发酵条件

的控制®,在发酵过程中要注意补水

(2)控制食盐的用量：盐的用量宜控制在10%〜15%之间，

用量过多，乳酸发酵㉚_______,风味欠佳。用量过少，

杂菌易繁殖，易引起泡菜变质

(3)控制温度：温度为18〜20C为宜，偏高时有害菌活动旺

盛，偏低时乳酸发酵慢

(4)控制发酵时间：亚硝酸盐含量在10d后开始下降

容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加

针对训练3(2015.广东理综，29,16分)泡菜是我国的传统食品之一，但制作

过程中产生的亚硝酸盐对人体健康有潜在危害。某兴趣小组准备参加“科技创

新大赛”，查阅资料得到下图。

用

H40

d

，35

(

、30

E一

O25宣

-20代

U15辐

娼

150趣

券

0看

海

学

里

就

(1)制作泡菜时，泡菜坛一般用水密封，目的是，乳酸菌发酵第一

阶段的产物有o

(2)据图，与第3天相比，第8天后的泡菜更适于食用，因为后者

__________________________________;pH值呈下降趋势，原因是

___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________O

⑶该小组得到一株“优选”乳酸菌(亚硝酸盐还原酶活力比普通乳酸菌高5

倍)，拟参照资料的实验方案和食盐浓度(4%〜10%),探究与普通乳酸菌相比用

“优选”乳酸菌制作泡菜过程中亚硝酸盐含量的高低，并确定其最适条件。请

你设计一个实验结果记录表，并推测实验结论。

【答案】(1)创造无氧环境丙酮酸、［H］、ATP(2)亚硝酸盐含量已接近最

低水平乳酸积累

(3)结果记录表

亚硝酸盐含量(单位：mg/kg)

食盐浓乳酸发酵时间/d

度/%菌12345678910

4普通

优选

普通

7

优选

普通

10

优选

注：其他合理答案也可。

推测实验结论：

①用“优选”乳酸菌制作泡菜，亚硝酸盐含量更低

②最适条件是亚硝酸盐含量最低时的食盐浓度和发酵时间

①18〜25c②30〜35c③15〜18c④室温⑤前期需氧，后期不需氧

⑥无氧⑦20c⑧重铭酸钾⑨灰绿色⑩pH试纸⑪葡萄酒⑫葡萄醋

⑬用来排出CO2⑭防止空气中微生物的污染⑮70%⑯1/3⑰10〜12天

⑱7〜8天⑲附着在葡萄皮上的野生型酵母菌⑳人工培养的酵母菌㉑红

葡萄皮的色素㉒缺氧、呈酸性㉓毛霉㉔蛋白酶㉕脂肪酶㉖15〜

18℃㉗析出豆腐中的水分㉘抑制微生物的生长㉙酒㉚香辛料

㉛12%㉒防腐杀菌@4：1①氧气须无氧环境㉖受抑制劭温度过

高、食盐用量过低、腌制时间过短

第0步过摸拟

1.（2017.辽宁东北育才中学模拟，39）根据下面的实验装置图（甲）和果酒的生产工

艺流程简图（乙）回答问题：

（1）制作果酒时可选用图甲的装置，为适当提高果酒的生产速率，进气口应

;排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连，这样做的原因

是o

(2)图乙为樱桃果酒生产工艺流程简图，其中冲洗的目的是o樱桃榨汁

前需要除去果柄，此操作是在冲洗之________进行的。这样做的原因是

(3)若是从混杂的微生物中分离酵母菌应使用培养基。从微生物培养的

角度分析，樱桃果汁能够为酵母菌的生长提供水、无机盐和o

(4)樱桃果酒制作是否成功，发酵后可在酸性条件下用溶液来鉴

定。在酒精发酵旺盛时，醋酸菌(填“能”或“不能”)将果汁中的糖

发酵成醋酸，乳酸菌(填“能”或“不能”)将乳酸分解成C02和水。

【答案】(1)先打开后关闭既可以放气，又可防止污染

(2)洗去浮尘后防止果汁流失和杂菌污染(只答出防止杂菌污染也可)(3)

选择碳源、氮源(4)重铭酸钾不能不能

2.(2016•山西康杰中学等四校联考，39)下图是果酒、果醋的制作流程。请据图回

答以下问题：

忧氧卜诞一r画-^v一i|p胡W]卜|[彘M卜l|[^赢1卜[|M藁l|

⑴在葡萄酒制作过程中出现葡萄酒变酸现象，其原因可能是发酵液中混有

_____________菌发酵产生乳酸；也可能是,导致

菌生长繁殖，产生醋酸。

(2)某同学尝试用罐头瓶制作果酒，在培养过程中，每隔12h左右将瓶盖拧松

一次，此后再拧紧，这样做的主要目的：一是；

二是避免氧气进入和杂菌污染。

(3)在酸性条件下，可用来检测果酒发酵是否成功。若要进一步检测所

得果酒中活体酵母菌的密度时，一般采用法，但此种方法最终计

算得出的菌体数往往比实际数目低。

(4)在果酒制作中，加入的新鲜葡萄汁没有经过灭菌处理，但是在制出的果酒中

基本检测不出酵母菌以外的杂菌，从生态学角度分析：一是酵母菌与杂菌之间

存在________关系；二是的发酵液令绝大多数其他微生物

无法适应而受到抑制；三是由于果酒中的不利于杂菌的生长。

【答案】（1）乳酸发酵装置密闭不严醋酸（2）放掉发酵产生的COK答案

合理即可，如排气、防止装置爆裂、降压等）（3）重铭酸钾稀释涂布平板（4）

竞争无氧、呈酸性酒精

3.（2017.山东济南一模，35）腐乳是我国古代劳动人民创造出的一种经过微生物发

酵的大豆食品。下面是腐乳制作的实验流程示意图。请回答下列相关问题。

（1）从微生物培养的角度分析，豆腐块是毛霉等微生物的培养基，按照其状态称

为培养基。现代的腐乳生产是在严格的无菌条件下，将优良的毛霉菌

种接种在豆腐上，这样可以o

（2）用盐腌制时，应注意控制；配制卤汤时，要使卤汤中酒的含量控制

在%左右。腐乳制作过程中，加盐的作用是

和O

（3）吃腐乳时，会发现腐乳外部有一层致密的“皮”，其实质是微生物的

，对人体无害；各地腐乳风味迥异，在原料和菌种相同时，可通

过___________制作出不同风味的腐乳。

【答案】（1）固体避免其他菌种的污染，保证产品的质量（2）盐的用量12

析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质

（3）（匍匐）菌丝控制发酵的条件

4.（2017.广西柳州中学模拟，28）如图是泡菜的制作及测定亚硝酸盐含量的实验流

程示意图，请据图回答下面的问题：

（1）选用新鲜蔬菜做泡菜，原因是o

⑵为了保证既无杂菌，又能使发酵菌发挥正常作用，泡菜所用盐水应

______________________________再使用O

（3）在泡菜腌制过程中经常向坛口边缘的水槽中补充水分，目的是提供

环境。

(4)在泡菜腌制过程中定期测定亚硝酸盐含量的目的是

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________9

泡菜腌制过程中等因素容易造成细菌大量

繁殖，亚硝酸盐含量增加。

(5)同样的材料和腌制条件，不同坛中各时期测得亚硝酸盐含量不同，最可能的

原因是不同O

(6)在果醋的制作过程中酒精浓度较高时，通常不适宜进行醋酸发酵，原因是较

高浓度的酒精会_______________________________________________，使产

酸量下降。

(7)在制作腐乳、果醋、泡菜的过程中，需要氧气的是

_____________________________________________________________________________________________________________________________________O

【答案】(1)亚硝酸盐的含量低(2)先煮沸杀灭杂菌，后冷却至室温

⑶无氧(4)把握取食的最佳时间温度过高、食盐用量过低、腌制时间过短

(5)各坛中微生物的种类和数量(6)抑制醋酸菌的生长和代谢(7)腐乳和果醋

微生物的培养与应用H4

第c步试真题

1.（2017.课标I,37,15分）某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和N%,供植物

吸收和利用。回答下列问题：

（1）有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生________o能分

解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是

________________________________________，但可用葡萄糖作为碳源，进入细

菌体内的葡萄糖的主要作用是__________________________________________

______________________________________________________（答出两点即可）。

（2）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择（填“尿

素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”）作为氮源，不选择其他两组的原因是

（3）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2P。4和Na2HPO4）其作用有

_____________________（答出两点即可）。

【答案】（1）胭酶分解尿素的细菌是异养生物，不能利用CO2来合成有机

物为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料（2）尿素其他

两组都含有NH4NO3,能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用

NH4NO3,不能起到筛选作用（3）为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持

细胞生长过程中pH稳定

2.（2017.江苏单科，31,7分）苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有

严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛

选酚降解高效菌株。请回答下列问题：

〈©WET©飞

5

活性污泥富集培养10-10-210-310Y10-

（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白陈、K2HPO4>MgSO4、苯酚和水，其中可作

为碳源的有。

(2)将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐,以

达到富集酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步，

以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须

添加o

⑶右图为连续划线法示意图，在图中(填图始处

中序号)区域更易获得单菌落。①

(4)采用比色测定法(使用苯酚显色剂)检测降解后的废

水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反②腿乂③

应，下表中1〜5号比色管的苯酚浓度应分别为

【解析】(1)酚降解菌培养基中的蛋白陈和苯酚为酚降解菌生长提供碳源。(2)

转接的目的之一是富集降解苯酚能力强的酚降解菌，随转接次数增多，培养基

中的苯酚含量应逐渐增加。若平板中菌落过于密集，则需进一步稀释，降低菌

体密度后再涂布培养，以便于菌落分离与计数。制备平板培养基时，需添加琼

脂等凝固剂。(3)连续划线时，在划线的末端菌体密度最低，即在划线的末端

最易获得单菌落。(4)1号比色管应为空白对照组，由6号比色管中苯酚浓度知，

1〜5号比色管苯酚浓度应为0.2mg/L、0.4mg/L.0.6mg/L、0.8mg/L0废水为

50mg/L苯酚溶液，降解后残留的苯酚浓度约为50X21%=10.5(mg/L),则需

对残留液进行20倍稀释后[10.5+20=0.525(mg/L)],才可以进行比色。

【答案】⑴蛋白陈、苯酚⑵增加稀释涂布凝固剂(3)(3)(4)0、0.2、

0.4、0.6、0.8(3)

3.(2016・四川理综，10,12分)图甲是从土壤中筛选产胭酶细菌的过程，图乙是

胭酶基因转录的mRNA部分序列。

土壤样品培养基培养基培养基菌种

甲

—CUGAGUGAGAAAUUUGGU-

271(表示从起始密码开始算起的碱基序号)

乙

⑴图中选择培养基应以为唯一氮源；鉴别培养基还需添加

作指示剂，产麻酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将

变成________色。

(2)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为的土壤样品液o.imL,培

养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。

该过程采取的接种方法是，每克土壤样品中的细菌数量为

X1()8个；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较

(3)现有一菌株的胭酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙

箭头所示位置增加了70个核昔酸，使图乙序列中出现终止密码(终止密码有

UAG、UGA和UAA)。突变基因转录的mRNA中，终止密码为,突

变基因表达的蛋白质含个氨基酸。

【解析】(1)臊酶能够催化尿素分解为氨，故图中选择培养基应以尿素作为唯

一氮源。由于尿素被分解成了氮，氮会使培养基的碱性增强，pH升高，使酚

红指示剂变红色。(2)用于计数细菌菌落数的接种方法是稀释涂布平板法，统计

的菌落数应介于30〜300之间，故选择细菌菌落数为156、178和191的平板

计数，每克土壤样品中的细菌数量为(156+178+191)/3+0.1X1()5=175X1()8。

由于两个或多个细菌连接在一起时，往往统计的是一个菌落，故用此方法测得

的细菌数偏低。(3)密码子由三个相邻的碱基组成，271个碱基和后面2个碱基

一起共构成91个密码子，插入的70个核昔酸和后面2个碱基一起共构成24

个密码子，后面是UGA,是终止密码，翻译结束，表达的蛋白质含115个氨

基酸。

【答案】（1）尿素酚红红⑵稀释涂布平板法1.75少（3）UGA115

4.（2016.课标I,39,15分）空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地

沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度

空气中微生物的分布情况。实验步骤如下：

①配制培养基（成分：牛肉膏、蛋白陈、NaCkX、H2O）；

②制作无菌平板；

③设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；

④将各组平板置于37℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均

数。

回答下列问题：

（1）该培养基中微生物所需的氮来源于。若要完成步骤②，该

培养基中的成分X通常是O

（2）步骤③中，实验组的操作是__________________________________________

______________________________________________________________________O

（3）若在某次实验中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照

组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了

现象。若将30（即36—6）个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法（填

“正确”或“不正确”）。

【解析】（1）牛肉膏和蛋白月东都含有蛋白质的水解产物，都可以作为氮源；平

板为固体培养基，故需要加入琼脂。（2）实验探究的是教室内不同高度空气中

微生物的分布，其中自变量为不同高度，故需在不同高度下放置开盖平板。同

时，为了保证单一变量，需要保证开盖放置时间一致。为了保证实验可靠，需

要设置多个平行实验。（3）在完全正确操作的情况下，空白对照组中不应出现菌

落。若出现菌落，说明操作过程中存在微生物污染，属于实验失误，所得实验

数据均不应采用。

【答案】（1）牛肉膏、蛋白陈琼脂（2）将各实验组平板分别放置在教室不

同高度的位置上，开盖暴露一段时间（3）污染不正确

5.（2016•课标III,39,15分）某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸

菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能

溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：

（1）分离纯化乳酸菌时，首先需要用对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯

度稀释的理由是_____________________________________________________

（2）推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有和

-分离纯化时应挑选出___________________的菌落作为候选

菌。

（3）乳酸菌在一20℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的（填

“蒸储水”“甘油”或“碳酸钙”）o

【解析】（1）分离纯化乳酸菌时，由于泡菜滤液中菌的浓度高，因此需要用无

菌水对泡菜滤液进行梯度稀释，其目的是将聚集在一起的乳酸菌分散成单个细

胞，以便在培养基表面形成单菌落。（2）乳酸菌代谢过程中可产生乳酸，若在培

养基中加入碳酸钙，则碳酸钙既可以中和乳酸，又可以在乳酸菌菌落的周围出

现明显透明圈，据此可以用于乳酸菌的鉴别。（3）乳酸菌在一20c长期保存时，

为了避免水结冰产生冰晶损伤细胞，在菌液中常需栗加入一定量的甘油。

【答案】（1）无菌水泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落

（2）鉴别乳酸菌中和产生的乳酸（或酸）具有透明圈（3）甘油

6.（2015.课标I,39,15分）已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂

肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：

（