免疫原的制备（免疫学检验课件）

免疫原的制备

抗原和抗体是免疫学检测中的两大基本因素，抗原的纯化是制备特异性抗体的先决条件，制得的抗体又可用于抗原的纯化和检测。

前言免疫原的制备

免疫原（immunogen）就是抗原，是指能够刺激机体产生抗体并能与之发生特异性反应的物质。众多的抗原物质中绝少是单一组分的，所以必须从复杂的物质中提取出目的抗原成分，制成合格的免疫原。

一、细胞性免疫原的制备1.绵羊红细胞抗原制备采集新鲜绵羊红细胞注入无菌并带有玻璃珠的三角烧瓶内，充分摇动15分钟后除去纤维蛋白，再以无菌生理盐水洗涤3次，最后配成1×106/ml浓度的细胞悬液，即可应用。

2.细菌抗原的制备细菌抗原有菌体抗原和鞭毛抗原等，多选用典型菌株的液体或固体培养物经集菌后处理。鞭毛抗原需用有动力的菌株，菌液用0.3％～0.5％甲醛处理，而菌体抗原则需要在100℃加温2～2.5小时后应用。

蛋白质、酶、核酸、细菌毒素等皆为可溶性抗原，这些物质大多来源于人和动物的组织和细胞，要想获得此类抗原，通常要先破碎组织和细胞，再进一步提取和纯化。

二、可溶性抗原的制备及鉴定制备流程选材预处理细胞粉碎提取纯化

鉴定冷藏保存

可溶性抗原包括蛋白质、脂多糖、核酸等，多来源于人和动物的组织或细胞，需先将组织或细胞破碎，再提取和纯化，才能获得所需的可溶性抗原。制备组织匀浆粉碎细胞蛋白质脂多糖核酸提取1.组织匀浆的制备

高速捣碎法或研磨法2.细胞破碎的方法

（1）反复冻融法（2）超声波破碎法（3）溶菌酶处理法（4）表面活性剂处理法

3.可溶性抗原的提纯

方法：

超速离心法，选择性沉淀法，凝胶过滤，离子交换层析，亲和层析，电泳法4.纯化抗原的鉴定、浓缩与保存鉴定内容：分子量、含量、纯度和免疫活性。浓缩：吸收法、蒸发法与超滤法。保存：液态或干燥状态低温保存。

用化学合成法或基因重组法制备的抗原，称之为人工抗原，包括人工结合抗原、人工合成抗原和基因重组抗原。三、人工免疫原制备

半抗原不能直接做为免疫原，只有把这些半抗原和大分子物质结合后，才具有免疫原性。这种经过人工修饰的半抗原称之为人工结合抗原，用于偶联半抗原的大分子物质称为载体。

（一）人工结合抗原制备

半抗原是仅有抗原性而无免疫原性的物质。多肽、甾体激素、核苷、某些药物等小分子物质均为半抗原。载体蛋白半抗原表位半抗原+载体（蛋白、合成载体）=完全抗原物理法或化学法（碳二亚胺法、戊二醛法）连接⑴蛋白质类

⑵多肽聚合物

⑶大分子聚合物人工结合免疫原的鉴定要鉴定人工结合免疫原的质量，必须要测定偶联在载体上的半抗原量，一般要连接20个以上才具有免疫原性。常用的测定方法有吸收光谱分析法和核素标记半抗原渗入法。

用化学方法将活化氨基酸聚合，使之成为合成多肽，即人工合成抗原。

（二）人工合成抗原

将编码免疫原性氨基酸序列的基因克隆化并与适当载体DNA分子相结合，然后引入受体细胞中（如大肠杆菌或酵母菌）使之表达，能获得免疫原性之融合蛋白，经纯化后可作为抗原，即基因工程抗原。

（三）基因工程抗原四、免疫佐剂

免疫佐剂（immunoadjuvant）是先于抗原或与抗原一起注入机体，可增强机体对该抗原的特异性免疫应答或改变免疫应答类型的物质。免疫佐剂简称佐剂（adjuvant），为一类非特异性的免疫增强剂。免疫佐剂可以是无免疫原性也可以是有免疫原性的。

在进行动物免疫时最常用的佐剂是福氏（Freund）佐剂，根据有无卡介苗又可分为福氏不完全佐剂和福氏完全佐剂。福氏不完全佐剂是由油剂和乳化剂制成，在福氏不完全佐剂中加入卡介苗就成了福氏完全佐剂。

（一）佐剂的种类

福氏佐剂和抗原的比例为1:1。由于福氏佐剂是油剂，加入抗原后要充分混合成乳剂。

混合方法：研磨法搅拌注射器混合法注射器混合法1.改变