鸡马立克氏病流行与防控课件

省鸡场病料阳性鸡场阳性病料阳性率年度MDVMDV+REVMDV+ALVMDV+CAVMDV+REV+CAVMDV+ALV+CAVMDV+REV+ALV+CAV201337403120201239135142201119141011合计95679273MDV与REV、ALV和CAV的混合感染（2011-2013）---混合感染是常见现象序号病毒名称分离时间病料采集地点发病鸡日龄代次132bp拷贝数Meq(bp)致病性1SY062006.06辽宁NAF321020vvMDV2CGZ072007.09黑龙江NAF3多1197mMDV3MS072007.08四川NAF621020vvMDV4QQHE2007.12黑龙江NAF421020vvMDV5HuaY2008.09四川50F321020—6HC1102008.05辽宁110F3多1120—7HC32008.12辽宁NAF221020—8HC1352008.05辽宁135F921020vv+MDV9DH12008.05吉林NAF221020—10HC1402008.05辽宁NAF421020—11DH72009.04吉林NAF321020—12LY112011.06辽宁NAF421020vvMDV13MDJ112011.02黑龙江NAF221020—14Hrb112011.03黑龙江NAF321020—15ChangZou2011.03江苏NAF4多1197—16JLCC2011.10吉林114F421020vv+MDV17SDWC2011.11山东110F321020vvMDV18SDCY2011.11山东40F721020vv+MDV19JSYC2012.10江苏NAF321020vvMDV20HB122012.08河北60F221020vvMDV21MDJ20122012.12黑龙江100F421020—22HLJWC122012.03黑龙江95F321020vvMDV23ZY122012.03江苏NAF421020vvMDV24JLSY2012.04吉林125F521020—25SYTS72012.03辽宁80F421020—26SY122012.09辽宁63F3多1197mMDV27TS62012.03辽宁NAF321020vv+MDV28JZ52012.04辽宁NAF321020—29YH112012.04辽宁NAF321020—30DH132013.07吉林112F321020—31LY132013.09吉林140F221020—32MDJ132013.05黑龙江NAF321020—MDV分离毒株特性注：NA表示未知，“—”表示未检测。MDV流行毒株致病性多在vv（9）-vv+（4）符合强、弱毒的分子特征177bpMDV101组织上以多形态的淋巴细胞增生浸润为基础，包括小型、中型和大型淋巴细胞。MDV086MDV-感染B和T淋巴细胞，转化T；我国MDV流行毒株处于一个独立的进化分支急性发病症状—3-4周龄即开始出现肿瘤，8-9周龄时已很严重，并能在3周龄引起特别严重的短暂麻痹，从而导致很高的死亡率MDV095这种重组可能改变MDV的组织趋向性、传播方式、致病性、疫苗保护性---MDV的进化？图1，2，3分别为牡丹江地区病料（瘤化的卵巢、肠系膜和脾脏）。细胞核淡明，核仁大而明显。PercentageMDmortality肿瘤组织病灶通常呈圆形或类圆形。江苏病例（乌鸡和麻鸡）

肾脏肿Introduction存在MDV和REV病毒粒子宿主范围扩大—火鸡感染发病反转录病毒为了自身复制，可以整合到任何双链DNA中（宿主、MDV、HVT、禽痘病毒）MDV流行毒株致病性多在vv（9）-vv+（4）HVT(1970s)---我国MDV呈经常性、普遍性散发状态反转录病毒—REV在疱疹病毒MDV基因组中的插入病毒Virus鸡数NumberofchickensMD早期死亡率（%）PercentageMDEMSMD死亡率（%）PercentageMDmortalityMD阳性率（%）PercentagetotalMDSY1764.764.7100ZY17035.394.1YC15202080FY15040100QQHE152020100HB13038.5100WC122001095ZY12201020100JS1210251421.428.6100WC1114021.3100GA17023.582.4PBS1500010株MDV分离毒株对SPF鸡的致病性MDV流行毒株对鸡具有高致病性病毒疫苗鸡数MD死亡鸡数MD阳性率保护指数（PI）HBCVI9881108/1127.3WC12CVI9881600/16100ZY12CVI9881703/1782.3JS121025CVI9881026/1040WC11CVI9881202/1283.3GACVI9881700/17100PBSCVI9881500/15-PBSPBS1500/15-5株MDV分离毒株对免疫鸡（CVI988疫苗）的致病性---MDV致病性增加；现有疫苗对某些毒株不能提高完全保护。MDV与REV混感和分子重组一个混感感染病例

2011年某鸡场商品蛋鸡，40日龄开始发病。症状--腺胃炎，腺胃肿；鸡瘦小；有死亡；无明显肿瘤。送检鸡--52日龄。检测结果—MDV+、REV+电镜负染切片MDVREV存在MDV和REV病毒粒子组别疫苗发病率肿瘤率死亡率保护指数

攻毒组—15/15，100%15/15，100%14/15，93%—CVI9889/14，64%7/14，50%0/14，0%36空白对照组—0/15，0%0/15，0%0/15，0%—----高发病率、高致死率、高肿瘤率；突破疫苗保护.致病性分离株攻毒-腺胃MDV肿瘤特征肿瘤组织病理学观察组织上以多形态的淋巴细胞增生浸润为基础，包括小型、中型和大型淋巴细胞。即，细胞的大小不一，形态各异。细胞核淡明，核仁大而明显。浸润范围广泛，取代原来的正常组织（腺胃）。腺胃的肿瘤细胞可见多数的异常核分裂像。同时可见肿瘤细胞的坏死（核浓缩）CVI988-分离株组-肾-肝-腺胃-----肿瘤的差异REV肿瘤特征肿瘤细胞为成淋巴细胞。细胞大小均一，细胞核淡明，核仁1-数个。细胞浆淡染，细胞界限不明显。未见核分裂像。肿瘤细胞呈占位性，呈局灶性浸润。肿瘤组织病灶通常呈圆形或类圆形。未见肿瘤细胞凋亡和坏死。（MDV1S2）5株MDV分离毒株对免疫鸡（CVI988疫苗）的致病性（gI）疫苗---毒株？---感染程度？宿主范围扩大—火鸡感染发病存在MDV和REV病毒粒子疫苗---毒株？---感染程度？基因组为双股线性DNA长度约为166-180Kb。PercentageMDmortalityMDV098正确使用疫苗和控制病原污染是防控MD的主要方法。肿瘤细胞呈占位性，呈局灶性浸润。同时可见肿瘤细胞的坏死（核浓缩）MDV流行毒株致病性多在vv（9）-vv+（4）腺胃肿瘤化为特征的病例未见肿瘤细胞凋亡和坏死。不同日龄鸡感染性—Rosenberg等，注射和同居接触19、34和49日龄的SPF鸡，出现临床发病和肿瘤病变图1，2，3分别为牡丹江地区病料（瘤化的卵巢、肠系膜和脾脏）。宿主范围扩大—火鸡感染发病MDV083背景：反转录病毒—REV在疱疹病毒MDV基因组中的插入重组基础混合感染现象---商业鸡群---多致瘤病毒共感染共同的宿主---淋巴细胞和相同的微环境，MDV-感染B和T淋巴细胞，转化T；ALV引起骨髓细胞转化MDV和ALV都在成纤维细胞中复制，ALV胸腺，法氏囊中复制；REV，淋巴细胞或网状内皮细胞，成纤维细胞中复制反转录病毒为了自身复制，可以整合到任何双链DNA中（宿主、MDV、HVT、禽痘病毒）细胞中相同的复制位置REV在MDV基因组中的插入验证Hot-SpotPCR（REV和MDV上下游交叉引物检测，病毒重组的验证）MDVpBAC-C全基因组序列C

全长TRLULIRLIRSUSTRSREVLTR大小(bp)1778111291311354212913129411035012346533（2）位置1-177811

964-1387613877-127418127419-140331141210-154150154151-164500164501-176846153096-152564165795-165263IRs区插入的相对位置（MDVMd5）LTR

MDV086（细胞质蛋白）MDV085

（预测蛋白）

MDV083（反义RNA蛋白）MDV084

（ICP4）

MDV087

（MDV1S2

）MDV088

（ICP22）

MDV089

（Us10

）IRs区TRs区插入的相对位置（MDVMd5）LTR

MDV097

（MDV1S2

）

MDV096

（gE

）

MDV095

（gI

）

MDV098

（细胞质蛋白）

MDV099

（预测蛋白

）

MDV101

（反义RNA蛋白）

MDV100

（ICP4

）TRs区插入重组的意义：反转录病毒是混乱宿主和疱疹病毒遗传物质的元件之一。这种重组可能改变MDV的组织趋向性、传播方式、致病性、疫苗保护性---MDV的进化？细胞浆淡染，细胞界限不明显。（2011-2013）10株MDV分离毒株对SPF鸡的致病性反转录病毒—REV在疱疹病毒MDV基因组中的插入HVT(1970s)母源抗体干扰---HVT、“814”免疫鸡群IntroductionREV，淋巴细胞或网状内皮细胞，成纤维细胞中复制MapoftheevolutionofMDincidence.临床症状由主要是慢性多发性神经炎转变为多发性神经炎和内脏淋巴瘤、内脏淋巴瘤、神经症状、严重的脑水肿和急性死亡同时可见肿瘤细胞的坏死（核浓缩）即，细胞的大小不一，形态各异。细胞大小均一，细胞核淡明，核仁1-数个。MDV流行毒株致病性多在vv（9）-vv+（4）同时可见肿瘤细胞的坏死（核浓缩）即，细胞的大小不一，形态各异。图1，2，3分别为牡丹江地区病料（瘤化的卵巢、肠系膜和脾脏）。MDV流行毒株致病性多在vv（9）-vv+（4）毒力增强—突破不同MD疫苗的保护作用疫苗---毒株？---感染程度？MDVmeq序列-88株，测定序列-63株

（2006-2013）

参考序列-25株（中国分离毒株-11株，国外毒株-14株）

我们测的63株中除了3株位于弱毒分支外，其他的60株位于一个独立进化分支（不同于国外的毒株）。

MDVmeq我国MDV流行毒株处于一个独立的进化分支A：MDV毒株的长重复区遗传进化树B：MDV毒株的短重复区遗传进化树15株MDV（全基因组）分子进化MD的防控防止雏鸡MDV野毒早期感染控制混感---重组、加重MD？免疫特点---非清除性抗肿瘤免疫、占位干扰作用---超感染和超感染抑制？---控制传播疫苗---毒株？---感染程度？免疫剂量二次免疫

控制污染源-

抗病力-

免疫

MD疫苗株的应用FourgenerationsofMDVaccines:致弱的血清1型毒株(1970)HVT(1970s)双价苗HVT+SB1(1983)CVI988(Rispens株)(1990s)，“814”株

我国MD疫苗使用情况曾经使用的疫苗：

HVT、CVI988、“814”、HVT+SB1、HVT+Z4、HVT+SB1+“814”、CVI988+HVT当前主要使用的疫苗：种鸡、蛋鸡-CVI988、“814”、HVT、CVI988+HVT

肉鸡-主要为HVTHVT-IBDV-VP2---“立克法”“威力克”814弱毒疫苗种毒株的建立策略：自然弱毒中筛选、建立---弱毒疫苗种毒株优点---安全性好、稳定性好和免疫效力好。黑龙江省牡丹江（白洛克和来航）---多年没有发生MD--毒株培育：K株---DEF、CES；---“814”S株---DEF、QEF--毒株血清型和致病性：血清1型，自然弱毒株安全性：（1）接种鸡12个月-（2）回归易感鸡10代免疫原性：实验室免疫攻毒（J-1株）K株的KC25和45代（稳定性）--PI：88.9传代特点:1.KC50-非融合细胞---50-120代也很少见2.病毒粒子的数量较多-几乎每个细胞都有病毒粒子3.容易见到---有囊膜的完全病毒粒子母源抗体干扰---HVT、“814”免疫鸡群MD疫苗“814”株---净化净化必要性---强细胞嗜性---禽源RNA病毒、支原体污染---免疫失败的主要原因之一---MDV814病毒DNA拯救疫苗强毒株保护指数（PI）“814”克隆株J-1（国内vMDV）82-93GA（vMDV）Md5（vvMDV）

ZY（分离毒株）SY（分离毒株）“814”克隆株的免疫原性总结：1.我国MD流行呈现散发状态，发病率阶段性增高。2.多种病原混感是疫苗免疫失败的一个重要原因。3.我国流行的MDV毒力向更高方向进化。4.进化分析表明，我国的MDV流行株已经发生明显变化，

并且处于一个独立的进化分支。5.正确使用疫苗和控制病原污染是防控MD的主要方法。FourgenerationsofMDVaccines:MDV流行毒株致病性多在vv（9）-vv+（4）2011年某鸡场商品蛋鸡，40日龄开始发病。急性发病症状—3-4周龄即开始出现肿瘤，8-9周龄时已很严重，并能在3周龄引起特别严重的短暂麻痹，从而导致很高的死亡率ALV引起骨髓细胞转化未见肿瘤细胞凋亡和坏死。毒力增强—突破不同MD疫苗的保护作用腺胃的肿瘤细胞可见多数的异常核分裂像。图1，2，3分别为牡丹江地区病料（瘤化的卵巢、肠系膜和脾脏）。反转录病毒—REV在疱疹病毒MDV基因组中的插入PercentageMDmortality腺胃肿瘤化为特征的病例MDV085---MDV致病性增加；这种重组可能改变MDV的组织趋向性、传播方式、致病性、疫苗保护性---MDV的进化？双价苗HVT+SB1(1983)S株---DEF、QEF急性发病症状—3-4周龄即开始出现肿瘤，8-9周龄时已很严重，并能在3周龄引起特别严重的短暂麻痹，从而导致很高的死亡率15株MDV（全基因组）分子进化PercentageMDmortality谢谢大家！MapoftheevolutionofMDincidence.ColorsrepresentthecurrentexistenceofMDoutbreaksasfollowed:red=currentMDoutbreaks;yellow=nocurrentMDoutbreaks;grey=datanotavailable.TheexistenceofMDoutbreaksduring1990sisindicatedbyverticalstripes秘鲁俄罗斯尼日利亚摩洛哥葡萄牙中国IntroductionMDV的复制早期溶细胞感染潜伏感染第二次溶细胞感染肿瘤增生-产生成熟病毒粒子早期溶细胞感染序号病毒名称分离时间病料采集地点发病鸡日龄代次132bp拷贝数Meq(bp)致病性1SY062006.06辽宁NAF321020vvMDV2CGZ072007.09黑龙江NAF3多1197mMDV3MS072007.08四川NAF621020vvMDV4QQHE2007.12黑龙江NAF421020vvMDV5HuaY2008.09四川50F321020—6HC1102008.05辽宁110F3多1120—7HC32008.12辽宁NAF221020—8HC1352008.05辽宁135F921020vv+MDV9DH12008.05吉林NAF221020—10HC1402008.05辽宁NAF421020—11DH72009.04吉林NAF321020—12LY112011.06辽宁NAF421020vvMDV13MDJ112011.02黑龙江NAF221020—14Hrb112011.03黑龙江NAF321020—15ChangZou2011.03江苏NAF4多1197—16JLCC2011.10吉林114F421020vv+MDV17SDWC2011.11山东110F321020vvMDV18SDCY2011.11山东40F721020vv+MDV19JSYC2012.10江苏NAF321020vvMDV20HB122012.08河北60F221020vvMDV21MDJ20122012.12黑龙江100F421020—22HLJWC122012.03黑龙江95F321020vvMDV23ZY122012.03江苏NAF421020vvMDV24JLSY2012.04吉林125F521020—25SYTS72012.03辽宁80F421020—26SY122012.09辽宁63F3多1197mMDV27TS62012.03辽宁NAF321020vv+MDV28JZ52012.04辽宁NAF321020—29YH112012.04辽宁NAF321020—30DH132013.07吉林112F321020—31LY132013.09吉林140F221020—32MDJ132013.05黑龙江NAF321020—MDV分离毒株特性注：NA表示未