细胞工程第十一章动物细胞培养的应用技术

细胞工程第十一章动物细胞培养的应用技术第1页，课件共91页，创作于2023年2月第一节动物细胞培养在单克隆抗体制备中的应用1975年kohler和milstein首次用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出均一性的单克隆抗体获得1984年诺贝尔奖。单克隆抗体概念：每一克隆B细胞所产生的理化性状高度均一、组成均一、只与同一种抗原决定族反应的抗体，称为单克隆抗体（monoclonalantibody,McAb）。第2页，课件共91页，创作于2023年2月一、杂交瘤技术的基本原理和过程（一）细胞的选择与融合（二）选择培养基的应用（三）有限稀释与抗原特异性选择第3页，课件共91页，创作于2023年2月二、杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本过程及方法第4页，课件共91页，创作于2023年2月二、杂交瘤技术制备单克隆抗体流程动物免疫分离脾细胞制备骨髓瘤细胞细胞融合HAT培养基选择杂交瘤细胞阳性孔克隆化并扩大培养再次克隆克隆扩大培养扩大培养收集上清液动物接种收集腹水单克隆抗体纯化保存ELISA测血清第5页，课件共91页，创作于2023年2月三、单克隆抗体的基本技术1.抗原提纯与动物免疫：抗原纯度高：电泳纯与骨髓瘤细胞同源的BALB/c小鼠2.细胞的选择：

A经过抗原免疫的B细胞（脾细胞）。

B肿瘤细胞(多发性骨髓瘤细胞:Sp2/0）。3.细胞融合：融合剂：聚乙二醇

(PEG,常用聚合度1000~2000浓度w/v：40%)

细胞比例：1:2~1:10，常用1:4。反应时间：2~4min。第6页，课件共91页，创作于2023年2月4.培养基的选择：HAT培养基。含有三种关键成分：次黄嘌呤(hypoxanthine,H)氨甲蝶呤(aminopterin,A)胸腺嘧啶核苷(thymidine,T).5.细胞的DNA合成一般有两条途径：A：由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，叶酸作为重要的辅酶参与反应。B：在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在下，经次黄嘌呤磷酸核糖转化酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶(TK)的催化下合成DNA。第7页，课件共91页，创作于2023年2月6.HAT培养基的选择原理：⑴氨甲蝶呤(A)是叶酸拮抗剂，可阻断细胞利用正常途径合成DNA，细胞在含有氨甲蝶呤的培养基中不能通过正常途径合成DNA。⑵瘤细胞是HGPRT酶阴性细胞，自身不能通过替代途径合成DNA而繁殖。⑶B细胞虽含有HGPRT，但不能在体外培养存活（只存活5~7d，且功能下降)。⑷融合细胞含有B细胞和瘤细胞，其中瘤细胞核利用B细胞的HGPRT酶进行旁路合成DNA而存活。第8页，课件共91页，创作于2023年2月7.克隆化并扩大培养(单细胞培养称为克隆化)：⑴有限稀释法:将细胞悬液逐次稀释后加入培养孔(36%的孔为1个细胞/孔)，可获得单个细胞形成的克隆，选择高分泌抗体的细胞株扩大培养或冻存。⑵显微操作法：在倒置显微镜下吸出单个细胞培养。⑶软琼脂平板法：下饲养/上融合C,分层培养后用⑵法⑷细胞分选仪法：流式细胞仪分选。8.单克隆抗体的制备、纯化：A体外细胞株扩大培养，取上清液提纯。B接种小鼠腹腔，取腹水提纯。C纯化按抗体纯化步骤进行。9.细胞株冻存和复苏：加小牛血清或1640培养液配成终浓度10%的二甲亚砜(DMSO)冻存液后液氮(-196℃)保存。原则是：慢冻(逐步降温，以每分钟降1℃为宜)，快融(立即浸入37~40℃水浴)。第9页，课件共91页，创作于2023年2月10.注意事项：⑴用降植烷(pristane)等油类制剂，反复注入BALB/C小鼠腹强腔，可诱发产生小鼠骨髓瘤细胞。这种细胞在适宜培养条件下，具有无限繁殖能力，选择本身不会产生Ig(SP2/O和小鼠骨髓瘤653细胞株)的对数期生长细胞作为融合细胞。⑵选择缺乏HGPRT或TK的细胞：

A采用毒性药物8-氮鸟嘌呤(8-azaguanine,8-AG)选育出缺乏HGPRT的细胞(因为缺乏HGPRT+细胞利用8-AG后合成毒性核苷酸而死亡，只有HGPRT+细胞才能存活），培养过程中有个别细胞出现返祖现象，故应定期用15~20ug/ml的8-AG处理细胞。第10页，课件共91页，创作于2023年2月B或利用5-溴脱氧尿嘧啶(5-bromodeoxyuridine,BudR)诱发缺乏TK的细胞。一般选育缺乏TK的细胞较困难。⑶采用饲养细胞：在体外培养条件下，单个或少数分散的细胞不易顺利生长繁殖。当加入一定量的其他活细胞后，常可促进原有细胞的繁殖，这种加入的细胞即称为饲养细胞，可用普通小鼠脾细胞/腹腔细胞/胸腺细胞、大鼠和豚鼠的腹腔细胞，最常用普通小鼠腹腔细胞。第11页，课件共91页，创作于2023年2月三、典型制备单克隆抗体具体步骤（一）细胞的选择与培养（二）细胞融合试验（三）单克隆抗体检测（四）克隆化培养（五）杂交瘤细胞的鉴定（六）单克隆抗体的制备（七）单克隆抗体的鉴定（八）单克隆抗体的纯化第12页，课件共91页，创作于2023年2月四、单克隆抗体的应用1.诊断(检测)试剂：病原体、肿瘤标志物、细胞表面标志等2.治疗：A移植物受者使用T细胞的McAb，可预防急性排斥反应。B供体骨髓在体外经T细胞的McAb处理，可减轻或消除移植物抗宿主反应。CAIDS治疗D肿瘤介入治疗：细胞毒剂(药物)与抗肿瘤抗原的McAb结合后，利用McAb的导向作用，将细胞毒剂(药物)定位于肿瘤细胞，到达直接杀死肿瘤细胞的目的。第13页，课件共91页，创作于2023年2月第二节外源基因在动物细胞中的表达一、基本原理&基本技术宿主载体原件转导第14页，课件共91页，创作于2023年2月通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的个别基因复制出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向改造生物的遗传性状。第15页，课件共91页，创作于2023年2月第16页，课件共91页，创作于2023年2月基因重组与基因工程

(geneticrecombination

andgeneticengineering)第17页，课件共91页，创作于2023年2月基因重组

是指在体外用酶学方法将不同来源的DNA进行切割、连接，组成一个新的DNA分子的过程，又称DNA重组。基因克隆

将重组DNA分子导入到合适的受体细胞中，使其扩增和繁殖，以获得大量的同一DNA分子，称此为基因克隆、DNA克隆或分子克隆。基因工程

实现基因克隆所采用的方法和相关工作，统称为重组DNA技术或基因工程。第18页，课件共91页，创作于2023年2月

本章主要内容重要的工具酶基因克隆常用的载体重组DNA基本原理重组技术在医学和制药工业中的应用第19页，课件共91页，创作于2023年2月第一节重要的工具酶工具酶

基因工程中的工具酶主要是指用于DNA和RNA分子的切割、连接、聚合、修饰、反转录等有关的各种酶系统。第20页，课件共91页，创作于2023年2月一、限制性核酸内切酶(RE)是一类由细菌产生的能专一识别双链DNA中的特定碱基序列、并水解该点磷酸二酯键的核酸内切酶，简称限制酶或切割酶。

根据限制酶的作用特性，一般分为三类：

——Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型，其中常用的是Ⅱ型限制酶。

第21页，课件共91页，创作于2023年2月

限制酶（Ⅱ型）识别及切割位点特异识别及切割48个bp长度且具有回文序列的DNA片断，主要产生3种缺口：5ˊ－粘性末端

3ˊ－粘性末端平端或钝端

回文序列是指该部位的核苷酸序列呈180O旋转对称;

粘性末端是指经内切酶特异切割后产生的5ˊ－末端突出或3ˊ－末端突出的碱基序列相互具有互补性。第22页，课件共91页，创作于2023年2月⑴产生5'-粘性末端

⑵产生3'-粘性末端第23页，课件共91页，创作于2023年2月⑶产生平(头末)端/钝端其它特殊性质的Ⅱ型限制酶同裂酶（异源同工酶）同尾酶可变酶第24页，课件共91页，创作于2023年2月同裂酶

又称异源同工酶。指来源不同，但具有相同的识别序列。在切割DNA时，其切割点可以是相同的，产生平头末端，称为同识同切；切割点也可以是不同的，产生3ˊ或5ˊ粘性末端，称为同识异切。第25页，课件共91页，创作于2023年2月同裂酶——同识同切第26页，课件共91页，创作于2023年2月同裂酶——同识异切第27页，课件共91页，创作于2023年2月同尾酶

同尾酶

指来源不同，但识别与切割顺序有一定的相关性的一类酶。它们作用后产生相同的粘性末端。第28页，课件共91页，创作于2023年2月可变酶可变酶

识别顺序中的一个或几个碱基是可变的，并且识别顺序往往超过6个碱基对。如，BstpⅠ，其识别顺序为GGTNACC。第29页，课件共91页，创作于2023年2月

常用限制性核酸内切酶的特性微生物名称酶名称识别顺序同裂酶同尾酶BacillusamyloliquefaciensH解淀粉芽孢杆菌BamHⅠGGATCCBstⅠBglⅡMboⅠBacilliusglobigil球芽孢杆菌BglⅡACATCTEscherichiacoliRY13大肠杆菌EcoRⅠGAATTCHaemophilusinfluenzae流感嗜血菌HindⅢAAGCTTHsuⅠProvidenciastuartii164普罗威登细菌PstⅠCTGCAGSalpⅠStreptomycesalbusSubspeciespathocidicus白色链球菌SalⅠGTCGACAvaⅠXhoⅠ第30页，课件共91页，创作于2023年2月二、DNA聚合酶

（最常用的DNA聚合酶有以下4种）

DNA聚合酶ⅠDNA聚合酶Ⅰ大片段——Klenow片段

TaqDNA聚合酶

T4噬菌体DNA聚合酶第31页，课件共91页，创作于2023年2月㈠DNA聚合酶Ⅰ

E.Coli

DNA聚合酶Ⅰ（DNApolⅠ）是一个具有3种酶活性的多功能性酶。包括：

5ˊ→3ˊDNA聚合酶活性

5ˊ→3ˊ核酸外切酶活性

3ˊ→5ˊ核酸外切酶活性第32页，课件共91页，创作于2023年2月

DNApolⅠ应用⑴催化DNA缺口平移反应，制备高比活性DNA

探针；⑵第二条cDNA链的合成；⑶对DNA3’突出末端进行标记；⑷DNA序列分析。第33页，课件共91页，创作于2023年2月E.coliDNApol.Ⅰ催化切口平移第34页，课件共91页，创作于2023年2月㈡Klenow片段（DNApol.大片断）第35页，课件共91页，创作于2023年2月

Klenow片段用途⑴补齐双链DNA的

3ˊ末端；⑵用标记碱基补齐3ˊ末端；

⑶在cDNA克隆中，用于第二股链的合成；⑷DNA序列分析。第36页，课件共91页，创作于2023年2月

㈢TaqDNApol（耐热DNA聚合酶）

作用特点1）TaqDNApol催化DNA合成的最适温度范围

7075℃，2）95℃以上高温，半小时不失活，3）最适合用于聚合酶链反应（PCR）。第37页，课件共91页，创作于2023年2月三、逆转录酶

特点

逆转录酶是一个多功能性酶，至少具有以下3种酶活性：⑴以单链RNA为模板，催化合成cDNA单链⑵具有RNaseH活性，能水解RNA:DNA杂交链中的

RNA⑶以DNA为模板，催化合成cDNA双链。第38页，课件共91页，创作于2023年2月

逆转录酶的应用：⑴将mRNA逆转录成cDNA，构建cDNA文库；⑵补平和标记5ˊ-末端突出的DNA片段；⑶代替Klenow酶用于DNA序列分析；⑷制备杂交探针等。第39页，课件共91页，创作于2023年2月四、DNA连接酶(DNAligase)

DNA连接酶可以催化带有粘性末端或平头末端的双链DNA中一条链的3ˊ－OH与另一条链的5ˊ－PO3H2形成磷酸二酯键而相连，从而构成一条完整的DNA长链。

DNA连接酶的用途（1）两个双链DNA片段连接起来5ˊ-ACGAATTCGT-3ˊT4DNA连接酶5ˊ-ACGAATTCGT-3ˊ3ˊ-TGCTTAAGCA-5ˊ3ˊ-TGCTTAAGCA-5ˊ（2）修补带有缺口的双链DNA分子T4DNA连接酶第40页，课件共91页，创作于2023年2月五、碱性磷酸酶

碱性磷酸酶(BAP)能够催化水解去除DNA或RNA5ˊ-端的磷酸基团。用途⒈制备载体时，用碱性磷酸酶处理去除载体分子5ˊ－端磷酸基后，可防止载体自身环化连接，提高重组效率。⒉用32P标记5'-端前，去除5'-P，再通过激酶作用把放射性核苷酸加到5'-端进行标记。第41页，课件共91页，创作于2023年2月六、末端（脱氧核苷酸）转移酶(TdT)

作用

将标记或未标记的dNTP加到DNA的3ˊ—OH末端；也可催化载体分子或待克隆的DNA片断上加上互补的同聚尾，便于进一步连接。应用①探针标记

P32-α.dGTPG32G32G32G32G32G32G32G32

②在载体和待克隆的片段上形成同聚物尾，以便于进行连接第42页，课件共91页，创作于2023年2月重要的工具酶工具酶活性限制性核酸内切酶识别特异序列，切割DNAT4DNA连接酶催化DNA5ˊ-磷酸与3ˊ-羟基形成磷酸二酯键DNA聚合酶以DNA为模板合成DNA逆转录酶以RNA为模板合成DNA碱性磷酸酶切除末端磷酸T4多聚核苷酸激酶催化核酸5'-羟基磷酸化末端脱氧核苷酸转移酶

催化3'-端合成同聚体尾第43页，课件共91页，创作于2023年2月第二节基因克隆常用的载体载体(vector)

是将外源DNA(目的DNA)片断引入宿主细胞的运载工具，其化学本质为DNA。

本节主要内容载体必须具备的基本条件载体的种类常用的载体第44页，课件共91页，创作于2023年2月一、载体必须具备的基本条件⒈有自身的复制子，能独立复制⒉具备多个限制酶的识别位点(多克隆位点)⒊具有遗传表型或筛选标记⒋有足够的容量以容纳外源DNA片段。⒌表达型载体还应具备与宿主细胞相适应的启动子、前导序列、增强子等调控元件。⒍载体DNA中均有一段非必需区，将外源基因插入该非必需区，而载体本身不受影响。第45页，课件共91页，创作于2023年2月二、载体的种类*（一）克隆载体

用来克隆和扩增DNA片段的载体，具有3点共性：⑴能够在受体细胞复制；⑵带有药物抗性基因，便于筛选；⑶可导入受体细胞。（二）表达载体除具有克隆载体所具有的性质外，还带有表达构件——转录和翻译所必须的DNA顺序。第46页，课件共91页，创作于2023年2月三、常用的载体

（一）质粒(plasmid)：

是存在于细菌染色体外的、能自主复制的双链环状DNA分子。

作为克隆载体的质粒应具备以下特点：

1.分子量相对较小，能稳定存在于细菌体内，有较高的拷贝数

2.具有1个以上的遗传标志，便于筛选

3.具有多克隆位点

第47页，课件共91页，创作于2023年2月

总而言之，质粒载体应该是一种分子量较小、高拷贝的“松弛型”质粒，且具有一个以上遗传标志和多克隆位点的质粒。广泛应用的质粒：

pBR32质粒、pUC系列等第48页，课件共91页，创作于2023年2月

pBR322质粒①4363bp②含一个复制点含一个抗氨卞青霉素标记(ampR)④一个抗四环素标记(tetR)⑤ampR和tetR基因内各有一些限制酶的酶切位点，供外源基因插入当外原基因插入抗药基因位点时，AmpR→Amp敏感(AmpS)、TetR→Tet敏感(TetS).第49页，课件共91页，创作于2023年2月pUC系列质粒

由pBR322和M13噬菌体构建而成的双链质粒载体；（1）2674bp；（2）有ampr和与M13噬菌体相同的多克隆位点（MCS）（3）有一个来自大肠杆菌的LacZ操纵子的DNA片断,编码半乳糖苷酶第50页，课件共91页，创作于2023年2月(二)λ噬菌体组成特点：双链线状DNA分子，全长50kb，含65个基因，在其分子两端各含有12个碱基的互补单链，是天然的粘性末端，被称为COS位点。第51页，课件共91页，创作于2023年2月

λ噬菌体感染细菌后的溶菌性生长和溶源性生长

溶菌性生长（lyticpathway）噬菌体感染细菌后，借助其2个COS位点互补成环，在宿主菌体内连续复制，合成大量基因产物，进而装配成噬菌体颗粒，裂解宿主菌，释放出来的噬菌体又可感染其他细菌。

溶源性生长(lysogenicpathway)

噬菌体感染细菌后，可将自身DNA整合到细菌的染色体中去，与之一起复制，并遗传给子代细胞，宿主细胞不被裂解。第52页，课件共91页，创作于2023年2月

λ噬菌体两种生长途径（示意图）第53页，课件共91页，创作于2023年2月

第三节重组DNA基本原理（DNA重组基本程序包括下列过程）

分—获取目的基因和载体接—目的基因与载体的连接转—重组DNA导入宿主细胞筛—重组DNA的筛选与鉴定第54页，课件共91页，创作于2023年2月1、获取

DNA重组基本过程第55页，课件共91页，创作于2023年2月2、重组第56页，课件共91页，创作于2023年2月3、转化第57页，课件共91页，创作于2023年2月4、筛选第58页，课件共91页，创作于2023年2月5、克隆第59页，课件共91页，创作于2023年2月6、表达表达产物分离纯化第60页，课件共91页，创作于2023年2月一、目的基因的获取（分）目的基因是指所要研究或应用的基因，也是需要克隆或表达的基因。

目的基因来源

1）制备基因组DNA2）制备cDNA3）聚合酶链反应

4）人工合成基因第61页，课件共91页，创作于2023年2月（一）制备基因组DNA（基因文库）分离、纯化基因组DNA

条件：温和，在EDTA或SDS等存在下

↓RE用蛋白酶K消化细胞、酚抽提大小不同酶切片段

片段分离：常用蔗糖梯度或电泳分离

↓分别与同样RE消化的载体连接常用噬菌体载体或质粒载体

↓DNA连接酶连接。

导入细胞进入宿主细胞内培养扩增。

↓

筛选鉴定用分子杂交、凝胶电泳等方法鉴定。第62页，课件共91页，创作于2023年2月（二）制备cDNA

（cDNA文库）（1）合成cDNA第一条链反应体系只有mRNA、逆转录酶、4种dNTP、引物。引物是与mRNA3ˊ端polyA互补的寡聚dT（12～18dT片段）（2）合成cDNA第二条链RNase去掉模板mRNA（3）构建cDNA文库①cDNA两端加接头或衔接头接头是人工合成的双链寡核苷酸两端平头，含有限制酶切位点。衔接头是另一种人工合成的双链寡核苷酸一端平头，另一端为粘性末端。②cDNA与载体相连。③导入宿主细胞进行克隆，这些菌体内保存cDNA集合体便是cDNA文库。第63页，课件共91页，创作于2023年2月（二）制备cDNA（cDNA文库）

分离目的基因的mRNA逆转录生成cDNA单链水解去除mRNA，合成cDNA双链水解回折处单链得到平端双链cDNA导入宿主细胞克隆,构建cDNA文库第64页，课件共91页，创作于2023年2月（三）聚合酶链反应(PCR)

在模板DNA、引物、dNTP、TaqDNA聚合酶等条件下，体外经94℃变性、54℃退火及72℃延伸3个步骤的反复多次循环（2530次），扩增目的基因（见18章）。

（四）人工合成基因

引用DNA测序仪测出某一基因的碱基序列，或根据某一蛋白质的氨基酸组成反推核苷酸序列，再用DNA合成仪通过化学合成原理合成目的基因。

一般先合成短片断DNA，然后再拼接成长片段。第65页，课件共91页，创作于2023年2月二、目的基因与载体的连接（接）

（主要有以下4种连接方式）1)粘性末端连接2）平头末端连接3）人工接头法4）同源多聚尾连接法第66页，课件共91页，创作于2023年2月

（一）粘性末端连接

将目的基因和载体用同一种限制酶酶切，产生相同粘性末端，再通过DNA连接酶作用将两者连接起来，构成重组DNA分子。

（二）平头末端连接

某些限制酶只能将目的基因和载体DNA切割成平端，此时在T4DNA连接酶的作用下同样能连接起来。第67页，课件共91页，创作于2023年2月（三）人工接头法合成连接子→与DNA平头末端连接→限制酶切割,产生粘性末端→连接，构建重组DNA。第68页，课件共91页，创作于2023年2月（四）同源多聚尾连接法第69页，课件共91页，创作于2023年2月三、重组DNA导入宿主细胞（转）

无性繁殖

体外重组后的DNA导入受体细胞，形成转化子。然后随受体细胞生长、增殖，使重组DNA发生复制、扩增，这一过程称为无性繁殖。克隆

从上述无性繁殖细胞中进一步筛选出含目的DNA的重组体分子即为无性繁殖系或克隆。宿主细胞

进行无性繁殖时所采用的受体细胞.第70页，课件共91页，创作于2023年2月

重组DNA导入宿主细胞的类型转化以质粒作载体构建的重组体导入受体细胞的过程；转染以病毒作载体构建的重组体导入受体细胞的过程；转导以噬菌体作载体构建的重组体导入受体细胞的过程。

感受态细胞

用特殊方法处理后，受体细胞才具备接受外源DNA的能力，这种细胞称感受态细胞。感受态细胞有原核细胞和真核细胞两大类。第71页，课件共91页，创作于2023年2月四、重组DNA的筛选与鉴定（筛）（筛选含重组体的阳性菌落，一般有下列几种方法）

1）平板筛选2）限制酶切图谱筛选3）PCR筛选重组体4）原位杂交技术插入失活蓝－白筛选第72页，课件共91页，创作于2023年2月（一）平板筛选

是指利用载体的遗传性标记直接筛选的方法。如，具有抗药性标记的载体，转化宿主细胞后，能在含抗生素（Amp或Tet）的培养平板上生长；未转化的则不能生长。插入失活

当外源DNA序列插入质粒中某一抗药基因内，使该基因失活，转化细胞就不能生长在含相应抗生素的培养平板上。第73页，课件共91页，创作于2023年2月

抗生素平板筛选（插入失活）第74页，课件共91页，创作于2023年2月（2）蓝-白筛选

它是一种利用蓝色化合物的形成作为指示剂的筛选方法，筛选含有编码β-半乳糖苷酶的基因。

载体：编码β-半乳糖宿主：编码β-半乳糖苷酶N端序列苷酶C端序列α-互补细菌表达：β-半乳糖苷酶活性蛋白↑5-溴-4-氯-3-吲哚（

X-gal）→

形成蓝色菌落

当在质粒中插入外源DNA→β-半乳糖苷酶的N端基因失活→不能与宿主β-半乳糖苷酶的C端进行α-互补→产生白色菌落。

（IPTG存在下）

第75页，课件共91页，创作于2023年2月

蓝－白筛选示意图第76页，课件共91页，创作于2023年2月2.限制性内切酶图谱鉴第77页，课件共91页，创作于2023年2月3.PCR筛选重组体

抽提少量重组DNA→PCR扩增→电泳鉴定→序列分析。4.原位杂交技术第78页，课件共91页，创作于2023年2月五、重组体在宿主细胞中的表达和调控

基因工程的最终目的是通过载体将外源基因导入合适的宿主细胞中高效表达，产生有重要价值的蛋白质产品。

克隆基因表达有三个条件

⑴基因的编码区不能被插入序列所中断;

⑵基因转录要有启动子，而启动子必须能被宿主

细胞的RNA聚合酶有效地识别;

⑶mRNA必须相当稳定，并有效地被翻译，产生的外

源蛋白质必须不为宿主细胞的蛋白酶所降解。第79页，课件共91页，创作于2023年2月第四节重组技术在医学和制药工业中的应用

一、疾病基因的发现

1990年美国科学家首先启动人类基因组计划（HGP），计划历时15年，至2005年完成；

2001年2月12日由Since和Nature杂志同时向世界宣布，人类基因组3X109bp的最新图谱，约含34万个基因；整个人类基因组的全部核苷酸序列不久即将完成。但要揭示人类4万个基因功能的任务将更为艰巨。第80页，课件共91页，创作于2023年2月

人类基因组图谱的初步完成，不仅为全部基因的定位建立了一个开放框架，而且为分离、鉴定人类疾病相关基因提供了参照模板。如，已知人类遗传性疾病约有3000种，推测可能是由于某些基因结构异常或基因位移等突变所致。如果利用分子生物学技术，将患者疾病基因与正常基因图谱作对照分析，必将有助于阐明遗传病的分子机制，这对遗传病的基因治疗将起到不可估量的推动作用。第81页，课件共91页，创作于2023年2月

产品名称治疗功能与医药范围

1.人胰岛素