微生物的实验室培养SK

微生物的实验室培养SK第1页，课件共71页，创作于2023年2月微生物包括哪五类：病毒细菌放线菌真菌原生动物原核生物界原生生物界真菌界病毒界微生物基础知识特点：小;简单;低等;代谢速度快。第2页，课件共71页，创作于2023年2月常见的三种细菌典型形态A.球菌B.杆菌C.弧菌细菌的形态第3页，课件共71页，创作于2023年2月细菌细胞由外向里依次有鞭毛、菌（纤）毛、荚膜、细胞壁、细胞膜、细胞质，细胞质中又有液泡、储存性颗粒、核质等。细菌的构造图1-3细菌的结构第4页，课件共71页，创作于2023年2月芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.芽孢：椭圆形的休眠体第5页，课件共71页，创作于2023年2月第6页，课件共71页，创作于2023年2月1.何为培养基？3.不同的培养基有不同的配方，但是其基本成分都相同，都包括哪些营养成分？有何作用？请举例说明。阅读教材P14~15相关内容，回答以下问题：2.按照不同的培养基划分标准，培养基有哪些种类、配制特点及其应用？一、培养基第7页，课件共71页，创作于2023年2月液体培养基：不加琼脂。用于工业生产。半固体培养基：液体培养基中加少量琼脂。用于观察细菌运动、鉴定和保藏菌种。固体培养基：在液体培养基的基础上添加较多琼脂。用于微生物的分离、计数和鉴定（一）培养基的种类1、按物理状态分：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长繁殖的营养基质称培养基第8页，课件共71页，创作于2023年2月液体培养基第9页，课件共71页，创作于2023年2月半固体培养基无动力有动力(弥散)(是否运动？)

第10页，课件共71页，创作于2023年2月固体培养基：菌落，菌苔第11页，课件共71页，创作于2023年2月2、按功能分：选择培养基：加入（缺少）某种化学物质，从众多微生物中分离出所需微生物鉴别培养基：加入某种指示剂，鉴别不同种类的微生物第12页，课件共71页，创作于2023年2月加入青霉素的培养基:不加氮源的无氮培养基:不加含碳有机物的无碳培养基:

几种选择培养基举例：分离酵母菌、霉菌等真菌分离固氮菌分离自养型微生物唯一碳源为纤维素的培养基分解纤维素的细菌第13页，课件共71页，创作于2023年2月3、按化学成分：合成培养基：由已知成分配制，成分明确。用于菌种分离鉴定天然培养基：由天然成分配制，成分不明确。用于工业生产。第14页，课件共71页，创作于2023年2月（二）不同的微生物的生长往往需要采用不同的培养基配方（三）不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、无机盐、等营养物质。⑴碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3--牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物⑵氮源无机氮源：有机氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含氮的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源第15页，课件共71页，创作于2023年2月除上述几种主要营养物质的基础上，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质（如维生素、碱基、某些氨基酸）以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。培养乳酸杆菌需添加维生素、培养霉菌需将培养基pH调至酸性，培养细菌需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧生物提供无氧的条件。第16页，课件共71页，创作于2023年2月（四）配制原则⑴目的明确：⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当⑶适宜的pH值：有机碳源异养型：根据微生物的种类、培养目的选择原料自养型：不加碳源加入缓冲剂（空气中CO2为碳源）生产科研第17页，课件共71页，创作于2023年2月1.何为无菌技术？无菌技术包括哪些方面？2.什么是消毒？灭菌？两者有何区别？3.常用的消毒与灭菌的方法有哪些？有何要求？4.请说出干热灭菌法和高压蒸汽灭菌法的操作步骤。二、无菌技术第18页，课件共71页，创作于2023年2月(一)无菌技术的概念

无菌技术泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法技术。获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，无菌技术就是防止杂菌污染的操作技术。第19页，课件共71页，创作于2023年2月2.无菌范围：实验操作空间、操作者的手和衣着清洁和消毒实验接种用具、培养的器皿、培养基灭菌实验操作过程酒精灯旁操作超净工作台避免已灭菌的材料用具与周围物品接触第20页，课件共71页，创作于2023年2月耐高温需保持干燥的物品，160～170℃1～2小时接种环、接种针等金属用具70~75℃、30min80℃、15min100℃、5~6min消毒灭菌定义方法较为温和理化方法，杀死部分有害菌体（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂紫外线灼烧灭菌干热灭菌酒精、氯气、石炭酸等高压蒸汽灭菌培养基，100KPa、121℃、15～30min1.消毒与灭菌：（二）无菌技术第21页，课件共71页，创作于2023年2月第22页，课件共71页，创作于2023年2月1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。旁栏思考第23页，课件共71页，创作于2023年2月1．关于微生物营养物质的叙述中，正确的是A、是碳源的物质不可能同时是氮源B、凡碳源都提供能量C、除水以外的无机物只提供无机盐D、无机氮源也能提供能量答案：D课堂练习第24页，课件共71页，创作于2023年2月2．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是A、防止杂菌污染B、消灭杂菌C、培养基和发酵设备都必须灭菌D、灭菌必须在接种前答案：B第25页，课件共71页，创作于2023年2月编号成分含量①粉状硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml3．右表是某微生物培养基成分，请据此回答：（1）右表培养基可培养的微生物类型是

。（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。如不想浪费此培养基，可再加入

。自养型微生物

含碳有机物

第26页，课件共71页，创作于2023年2月（3）若除去成分②，加（CH2O），该培养基可用于培养

。（4）表中营养成分共有

类。（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行是

。（6）右表中各成分重量确定的原则是

。（7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是

。固氮微生物

3

调整pH

依微生物的生长需要确定

琼脂（或凝固剂）

第27页，课件共71页，创作于2023年2月1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g四.实验操作㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂→补水定容4.调pH、分装、封口：5.灭菌：6.倒平板：培养基、培养皿培养基冷却到50℃第28页，课件共71页，创作于2023年2月灭菌:

将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170℃下灭菌2h。第29页，课件共71页，创作于2023年2月

1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。问题讨论第30页，课件共71页，创作于2023年2月倒平板技术1.将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。1234第31页，课件共71页，创作于2023年2月倒平板技术2.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。1234第32页，课件共71页，创作于2023年2月

2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。第33页，课件共71页，创作于2023年2月倒平板技术12343.用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10~

20mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。第34页，课件共71页，创作于2023年2月倒平板技术12344.等待平板冷却凝固，大约需5~10min。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。第35页，课件共71页，创作于2023年2月3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染，又可以防止培养基水分过快挥发。第36页，课件共71页，创作于2023年2月

4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。第37页，课件共71页，创作于2023年2月无菌检查：将未接种的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种.第38页，课件共71页，创作于2023年2月（二）纯化大肠杆菌方法：平板划线法和稀释涂布平板法纯化大肠杆菌是让大肠杆菌分散成单个细胞，每个细胞繁殖成一个菌落第39页，课件共71页，创作于2023年2月单个或少数菌体2.特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。3.功能：1.定义：菌落鉴定菌种的重要依据固体培养基上大量繁殖子细胞群体第40页，课件共71页，创作于2023年2月平板划线的操作方法第41页，课件共71页，创作于2023年2月第42页，课件共71页，创作于2023年2月第43页，课件共71页，创作于2023年2月第44页，课件共71页，创作于2023年2月一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。第45页，课件共71页，创作于2023年2月第46页，课件共71页，创作于2023年2月第47页，课件共71页，创作于2023年2月第48页，课件共71页，创作于2023年2月第49页，课件共71页，创作于2023年2月第50页，课件共71页，创作于2023年2月第51页，课件共71页，创作于2023年2月第52页，课件共71页，创作于2023年2月第53页，课件共71页，创作于2023年2月第54页，课件共71页，创作于2023年2月问题讨论

1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？

答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；

每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。

划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。第55页，课件共71页，创作于2023年2月

2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。

3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？

答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。第56页，课件共71页，创作于2023年2月稀释涂布平板法第57页，课件共71页，创作于2023年2月

1.将分别盛有9mL水的6支试管灭菌，并按101~106的顺序编号。第58页，课件共71页，创作于2023年2月2.用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。第59页，课件共71页，创作于2023年2月3.从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复第2步的操作。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。第60页，课件共71页，创作于2023年2月注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰1~2cm处.第61页，课件共71页，创作于2023年2月第62页，课件共71页，创作于2023年2月第63页，课件共71页，创作于2023年2月第64页，课件共71