肾上腺皮质激素与性激素

关于肾上腺皮质激素与性激素第1页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三基本结构：环戊烷骈多氢菲ABCD12345678910111213141516171819第一节基本结构和分类一、母核第2页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三环上双键的表示方法：双键位置4

1,4

5

5(10)

第3页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三二、分类：甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素第4页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三1．肾上腺皮质激素皮质酮的衍生物

Δ4-3-酮基：UV、与羰基试剂反应C17位有α-酮醇基：还原性11C11位有-OH或=O母核含有21个C第5页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三代表药物：

可的松氢化可的松第6页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三人工合成药物：地塞米松氢化可的松结构的基础上1，2位间引入一个双键，9位上引入-F，16位上引入-CH3

在氢化可的松结构的基础上1，2位间引入一个双键

12氢化泼尼松12916第7页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三结构特点：ⅰ．含有21个Cⅱ．A环：4-3-酮结构（,-不饱和酮）ⅲ．17位：-醇酮基，有还原性。

人工合成品：1、2位间有双键，6位，9位引入卤素，16位或16位引入甲基，16位引入羟基等。第8页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三2．雄性激素及蛋白同化激素睾丸素的衍生物

结构特点：(1)母核含有19个C(2)A环的4-3-酮(3)17位羟基\甲基\酯蛋白同化激素在C10位上一般无角甲基第9页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三代表药物：甲基睾丸素丙酸睾丸素苯丙酸诺龙第10页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三3．孕激素黄体酮结构特点：(1)含有21个C(2)A环的4-3-酮(3)17位甲酮基与亚硝基铁氰化钠反应第11页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三4．雌激素—雌二醇、炔雌醇及衍生物炔雌醇

雌二醇雌酮(1)母核含有18个C(2)A环：苯环，3位Ar-OH

10位无甲基(3)17位：羟基、乙炔基结构特点：第12页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三口服避孕药炔诺酮异炔诺酮安宫黄体酮第13页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三小结甾体激素碳原子数A环17位取代基肾上腺皮质激素214-3-酮-醇酮基雄性激素194-3-酮-OH-CH3孕激素214-3-酮甲酮基雌激素18苯环C3-酚OH-OH-C≡CH第14页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三第二节鉴别试验一、化学鉴别法(一)母核反应H2SO4,H3PO4,HClO4,HCl甾体激素类药物呈色如：第15页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三(二)官能团的反应1、C17

–

α–醇酮基强还原性TTC——氯化三苯四氮唑(又叫红四氮唑－RT)BT——蓝四氮唑（碱性酒石酸酮）沉淀反应呈色反应第16页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三C3–酮基和C20–酮基:甾酮类激素类药物呈色羰基试剂＃常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼,异烟肼,硫酸苯肼,氨基脲,苯肼异烟腙（黄色）第17页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三2NCONHNH2HCl黄体酮异烟双腙（黄色）第18页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物呈色①亚硝基铁氰化钠②间二硝基酚③芳香醛3.甲酮基孕激素特征反应。第19页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三黄体酮蓝紫色H2O2+-4Fe5CNNOCHCOO黄体酮蓝紫色亚硝基铁氰化钠其他甾体淡橙色如：第20页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三第21页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三活泼次甲基反应（Zimmermann反应）羰基邻位的次甲基叫活泼次甲基。羰基C3、C11、C20次甲基C2、C12、C21羰基C17次甲基C16可的松雌酮212211716第22页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三雌激素类药物红色偶氮染料重氮苯磺酸4.酚羟基含炔基的甾体激素银盐沉淀AgNO35.乙炔基第23页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三有机氟Fˉ有机破坏有机氯Clˉ6.有机卤素茜素氟蓝—硝酸亚铈HNO3—AgNO3AgCl↓呈色第24页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三茜素氟蓝蓝紫色F-第25页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三香7.水解产物的反应第26页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三特臭特臭第27页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三（二）制备衍生物测定熔点（三）紫外分光光度法（四）红外光谱法（特征性强）

中国药典上收载的甾体激素类药物均有红外光谱图。（五）薄层色谱法（六）HPLC第28页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三第三节特殊杂质检查

有关物质、硒、残留溶剂、游离磷酸盐（一）有关物质1、来源:原料,中间体,异构体,降解产物2、方法:（具有一定分离能力）TLC法（高低浓度对比法）HPLC法（类似高低浓度对比法）第29页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三（1）TLC法（高低浓度对比法）判定方法：规定杂质斑点数目规定杂质斑点颜色（2）HPLC法（高低浓度对比法）

判定方法：规定杂质峰数目规定杂质峰面积第30页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三醋酸氟轻松检查其他甾体取本品加氯仿-甲醇(9:1)制成3.0mg/ml作为供试液，精密量取适量，加氯仿-甲醇(9:1)稀释成0.06mg/ml作为对照液；照薄层色谱法，各取5μl，分别点于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇（97:3）为展开剂，展开后晾干，在105℃干燥10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视，供试品溶液如显杂质斑点，不得多于2个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。12第31页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三

取本品适量，精密称定，以无水乙醇为溶剂，配制成每1ml含2mg的溶液（1）与每1ml含0.04mg的溶液（2），用含量测定项下的方法和溶液(0.16mg/ml)，取10μl注入液相色谱仪，调整仪器灵敏度，使主成分峰高度达记录仪的满量程。再分别取溶液（1）和溶液（2）各10μl，进样。记录至主成分峰保留时间的2倍。溶液（1）显示的杂质峰数不得超过4个，各杂质峰面积及其总和分别不得大于溶液（2）主峰面积的1/2和3/4。醋酸甲地孕酮检查其他甾体第32页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三二、硒1、来源：合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢剧毒2、原理3、方法第33页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三对照品溶液的制备：精密量取标准砷溶液（每1mL相当于1μg的Se）5mL,置100mL烧杯中，加硝酸溶液(1→30)25mL和水10mL,即得。供试品溶液的制备：取本品50mg，照氧瓶燃烧法进行破坏后，将吸收液转移至100ml烧杯中，用水15ml冲洗燃烧瓶及铂丝，并入吸收液中，即得。检查法：将上述硒对照品溶液和供试品溶液分别用氨试液调节pH值至2.0±0.2后，转移至分液漏斗中，用水少量分次洗涤烧杯，洗液并入分液漏斗中，使成60ml，各加盐酸羟胺溶液（1→2）1ml，摇匀后，立即精密加二氨基奈试液5ml，摇匀，在室温下放置100分钟，精密加环己烷5ml，强烈振摇2′，静置分层，取环己烷脱水后，测A378nm。规定A供＜A对。醋酸氟轻松检查硒第34页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三第35页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三三、有机溶剂残留（甲醇和丙酮）甲醇：0.3%丙酮：≤0.5%（g/g)GC法第36页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三地塞米松磷酸钠检查甲醇和丙酮

精密称取本品0.16g，置10ml量瓶中，精密加内标溶液2ml，加水稀释至刻度，作为供试液；另精密量取甲醇10μl(≈7.9mg)与丙酮100μl(≈79mg)置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，精密量取1mL，置10mL量瓶中，精密加内标溶液2ml,加水至刻度，作为对照液。取对照品溶液和供试品溶液，照残留溶剂测定法测定，应符合规定。第37页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三四、游离磷酸对照品法1、原理：地塞米松磷酸钠氢化可的松磷酸钠倍他米松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠第38页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三检查游离磷酸地塞米松磷酸钠

精密称取本品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml溶解，精密加钼酸铵硫酸试液2.5ml与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液1ml，加水至刻度，摇匀，在20℃放置30～50分钟，照分光光度法，在740nm处测定吸收度，与对照液4.0ml同法处理的吸收度比较，不得更大。（对照液

0.0035%KH2PO4）第39页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三（对照液

0.0035%KH2PO4）第40页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三第四节含量测定一、HPLC,USP、BP、JP均采用,RP－

HPLC（大多内标法）（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰）特点:用样量少，灵敏度高，分离效果好第41页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三黄体酮注射液的含量测定取本品适量乙醚50mL量瓶精密量取5.0mL挥散乙醚残渣甲醇振荡提取10min/次/4次离心上清液内标溶液5.0mL甲醇25mL量瓶供试品溶液的制备对照品溶液的制备15min黄体酮约25mg甲醇25mL量瓶精密量取5.0mL内标溶液5.0mL25mL量瓶第42页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三测定与计算供试品溶液5µL对照品溶液5µLHPLCAi供，As供Ai对，As对第43页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三（1）专属性——“干扰”方法学验证对照品色谱图阴性对照溶液色谱图缺黄体酮的模拟注射液供试品溶液的制备(不加内标)阴性对照溶液供试品溶液色谱图第44页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三（2）仪器精密度（3）方法重复性——仪器稳定性（同一溶液6次测定的RSD）——供试品制备工艺的稳定性（同一工艺下平行制备6份供试液测定值的RSD）（4）标准曲线及线性范围X：Ci（黄体酮）y：Ai/As（待测物与内标物的峰面积比值）（5）回收率试验——方法的准确度→发现量与加入量的接近程度→R=发现量/加入量≈1（6）耐受性第45页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三二、UV法△４-3-酮240nm(±)肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素苯环280nm(±)雌激素①

适用于原料药。②样品中“其它甾体”不合格时，不适用。第46页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三三、比色法（一）异烟肼比色法（二）四氮唑比色法（三）kober反应比色法——对照品比较法第47页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三（一）异烟肼比色法1．原理

C3—酮基及某些其他位置上的酮基能与羰基试剂异烟肼在酸性条件下形成黄色异烟腙，在一定波长下具有最大吸收，可用于定量第48页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三2、反应条件（1）溶剂：无水乙醇，无水甲醇（2）酸的种类、浓度及异烟肼的浓度

常用HCl

HCl：异烟肼=2M:1M时，获最大吸收度。

第49页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三（3）水分、O2、光线的影响含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓O2与光线无影响（4）反应的专属性

反应条件下，△4-3-酮具有一定专属性

C20—酮基反应慢，

C17—酮基反应慢；

C11—酮基不反应△4-3-酮—室温下，不到1h反应完全第50页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三倍他米松磷酸钠的含量测定取本品适量λ=420nm50mL量瓶精密量取1.0mL异烟肼溶液20mL60℃水浴,1h甲醇25mL量瓶供试液：对照液：取倍他米松磷酸钠适量摇匀冷却甲醇Ai第51页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三

肾上腺皮质激素类C17-α-醇酮基强还原性1、原理（二）四氮唑比色法（1）红四氮唑（缩写TTC或RT）

2、四氮唑盐的种类：（2）蓝四氮唑：BP；ChPUSP第52页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三不溶于水的三苯甲瓒↓深红氯化三苯四氮唑（TTC）红四氮唑（RT）第53页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三蓝四氮唑（BT）双甲瓒（暗蓝）第54页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三4、讨论

结构、反应温度和时间、水分、碱浓度、空气中氧、试剂类别和浓度等，对反应速度，呈色强度和稳定性有影响。（1）官能团位置的影响

①C11:V11C=O>V11C-OH可的松>氢化可的松第55页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三B：V简单酯>V复杂酯

醋酸酯>磷酸酯>琥珀酸酯>三甲基醋酸酯（1）官能团位置的影响

②C21：α-羟基（C21-OH）A:21-OH酯化后较母体羟基反应速度慢

即：V游离体>V酯类如：可的松>醋酸可的松第56页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三（2）溶剂、水分的影响含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓10%含水30%→几无反应—无醛无水乙醇醛→A↑—无水乙醇第57页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三采用氢氧化四甲基铵能得到满意结果。（3）碱的种类及加入顺序的影响

加入顺序：先加TTC或BT，后加(CH3)4N+OH-原因：皮质激素与(CH3)4N+OH-长时间接触，有部分分解。第58页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三（4）O2与光线的影响反应过程反应产物怕光→避光、快速O2影响颜色强度和稳定性隔绝空气—充N2快速第59页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三（5）温度与时间t℃↑→ν↑→甲瓒分解↑→%↓ChP25℃40～45′BP30℃1h第60页，讲稿共68页，2023年5月2日，星期三1.原理λmax=465