实验四灭活疫苗的制备及其应用

关于实验四灭活疫苗的制备及其应用第1页，讲稿共16页，2023年5月2日，星期三2什么是疫苗？疫苗是将病原微生物（如细菌、立克次氏体、病毒等）及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用转基因等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制剂。疫苗保留了病原菌刺激动物体免疫系统的特性。当动物体接触到这种不具伤害力的病原菌后，免疫系统便会产生一定的保护物质，如免疫激素、活性生理物质、特殊抗体等；当动物再次接触到这种病原菌时，动物体的免疫系统便会依循其原有的记忆，制造更多的保护物质来阻止病原菌的伤害。第2页，讲稿共16页，2023年5月2日，星期三3疫苗的种类有哪些？一、人工主动免疫1.灭活疫苗病原细菌、病毒、立克次体等，经人工培养，再用物理或化学方法将其杀灭制成疫苗疫苗。此种疫苗失去繁殖能力，但保留免疫原性。2.减毒活疫苗用人工定向变异方法或从自然界筛选出毒力减弱或基本无毒的活微生物制成减毒活疫苗。接种后在体内有生长繁殖能力，可激发机体对病原的持久免疫力。3.类毒素细胞外毒素经甲醛处理后失去毒性，仍保留免疫原性，为类毒素。第3页，讲稿共16页，2023年5月2日，星期三4第4页，讲稿共16页，2023年5月2日，星期三5二、人工被动免疫1.抗毒素2.人免疫球蛋白制剂3.细胞因子制剂4.单克隆抗体制剂人工主动免疫和人工被动免疫均能使机体增加抗病能力，但后者的持续时间短，主要用治疗和紧急预防。第5页，讲稿共16页，2023年5月2日，星期三6三、新型疫苗1.亚单位疫苗通过蛋白质水解方法，提取细菌、病毒的特殊蛋白质结构，筛选出的具有免疫活性的片段制成的疫苗，称为亚单位疫苗。2.结合疫苗指采用化学方法将多糖共价结合在蛋白载体上所制备成的多糖-蛋白结合疫苗，用于提高细菌疫苗多糖抗原的免疫原性，如b型流感嗜血杆菌结合疫苗。3.合成肽疫苗合成肽疫苗是一种仅含免疫决定簇组分的小肽,即用人工方法按天然蛋白质的氨基酸顺序合成保护性短肽,与载体连接后加佐剂所制成的疫苗,是最为理想的安全新型疫苗。4.基因工程疫苗使用DNA重组生物技术，把天然的或人工合成的遗传物质定向插入细菌、酵母菌或哺乳动物细胞中，使之充分表达，经纯化后而制得的疫苗。第6页，讲稿共16页，2023年5月2日，星期三7第7页，讲稿共16页，2023年5月2日，星期三8疫苗有哪些接种方式？注射、口服、浸泡、喷雾第8页，讲稿共16页，2023年5月2日，星期三草鱼注射疫苗现场

123第9页，讲稿共16页，2023年5月2日，星期三10实验四灭活疫苗的制备及其应用一、实验目的1．了解疫苗的种类和免疫途径；2．掌握组织浆疫苗的制备方法。第10页，讲稿共16页，2023年5月2日，星期三11二、实验内容1．鱼病检测（为后续实验做准备）2．组织浆疫苗的制备3．灭活疫苗的安全性评价（了解）第11页，讲稿共16页，2023年5月2日，星期三12三、主要仪器及试材解剖用具，包括解剖盘、解剖刀、解剖针、大小手术剪、大小镊子，培养皿，载玻片，盖玻片、纱布等。离心机、注射器等。实验鱼。第12页，讲稿共16页，2023年5月2日，星期三13四、实验方法与步骤（一）组织浆疫苗的制备1．活苗的制备：取有典型症状的鱼，先用酒精或碘制剂消毒鱼体表，解剖后取肝、脾、肾组织，并称重。然后让在研钵中磨成糊状，加入5倍生理盐水，用双层纱布过滤，去除沉淀，即成原毒组织浆（活苗）。2．灭活：取上述活苗，于60-65℃水浴锅中孵育2h。3．防腐保存：对已灭活的疫苗加入福尔马林，使成1%的浓度，4℃保存。第13页，讲稿共16页，2023年5月2日，星期三14四、实验方法与步骤（二）安全性实验1．灭活效果的评价（1）细菌性灭活疫苗：涂布于琼脂平板上，放入28℃温箱24h，生长缓慢的细菌培养48h。（2）病毒性灭活疫苗：接种至合适细胞系，观察细胞病变。2．鱼体安全性实验取灭活的疫苗，加入同体积的生理盐水，注射10cm规格的鲫30尾，每尾0.2ml，正常饲养，5d内无死亡，可用于后续的免疫保护评价。第14页，讲稿共16页，2023年5月2日，星期三15五、实验注意事项

操作用的全部工具消毒后方可使用