微生物的培养与应用h

培养基的类型按物理状态分固体培养基液体培养基——允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长——根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品按功能分选择培养基鉴别培养基培养基类型本文档共34页；当前第1页；编辑于星期二\1点43分培养基的营养物质——水、无机盐、碳源、氮源、生长因子培养基组分提供的主要营养牛肉膏5g碳源、氮源、磷酸盐、维生素蛋白胨10g氮源、维生素NaCl5g无机盐水1000ml氢元素、氧元素牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成培养基组成本文档共34页；当前第2页；编辑于星期二\1点43分可以作为硝化细菌碳源、氮源和能源的是：A．CO2、NH3、光能B．(CH2O)、N2、NH3C．CO2、NH3、NH3D．(CH2O)、NH3、N2【解析】本题考查知识点：①硝化细菌是化能自养型微生物；②硝化细菌合成有机物所需能量来源来自氧化分解外界环境中的NH3；③合成有机物所需的碳源是CO2；④NH3氧化分解的产物是NO3－，也就是硝化细菌的氮源本文档共34页；当前第3页；编辑于星期二\1点43分关于微生物营养物质的叙述中，正确的是：A.是碳源的物质不可能同时是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外的无机物只提供无机盐D.无机氮源也能提供能量【解析】有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。本文档共34页；当前第4页；编辑于星期二\1点43分【解析】对于C选项，除水以外的无机物种类繁多功能也多样。二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；NaHCO3可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaCl则只能提供无机盐。对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。本文档共34页；当前第5页；编辑于星期二\1点43分 ▲土壤中分解尿素细菌的分离▲分解纤维素的微生物的分离选择培养基的成分：尿素作为唯一氮源选择培养基的成分：纤维素作为唯一碳源鉴定方法：在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，pH升高，说明细菌能分解尿素鉴定方法：刚果红染色法本文档共34页；当前第6页；编辑于星期二\1点43分透明圈透明圈越大，细菌分解纤维素的能力越强本文档共34页；当前第7页；编辑于星期二\1点43分(2013广东)以下为某兴趣小组获得的实验结果及其分析，正确的是：解析：细菌分解纤维素后会形成一个透明圈，透明圈越大，细菌分解能力越强。本文档共34页；当前第8页；编辑于星期二\1点43分（2011·新课标全国卷）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染，某同学欲从污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：

(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_______为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于________培养基。

(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力_____。选择原油强本文档共34页；当前第9页；编辑于星期二\1点43分(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即____和_______。(4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、________和________。无菌技术要求实验操作应在酒精灯________附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。火焰平板划线法稀释涂布平板法干热灭菌高压蒸汽灭菌本文档共34页；当前第10页；编辑于星期二\1点43分富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择_______的培养基，并在________条件下培养。

高温以淀粉为唯一碳源脲酶可以将尿素分解为NH3，从而使尿素溶液pH升高，这可用_______试剂来检验。用纤维素作唯一碳源的培养基培养微生物，得到的纤维素分解菌中可能还混有_______。自养微生物(硝化细菌)酚红本文档共34页；当前第11页；编辑于星期二\1点43分练习下表表示某培养基的配方，下列有关叙述正确的是： A.从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于鉴别培养基B．培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨C．该培养基缺少提供生长因子的物质D．该培养基调节到合适的pH后就可以接种菌种本文档共34页；当前第12页；编辑于星期二\1点43分【解析】伊红、美蓝能使某些细菌着色，起鉴别作用；糖类(尤其是葡萄糖)是最常用的碳源；蛋白胨主要用作氮源，但也提供生长因子，并作为异养型微生物的碳源、能源。伊红美蓝培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色本文档共34页；当前第13页；编辑于星期二\1点43分选择培养基的制作方法(1)基础培养基中加抗性物质。举例：①加高浓度食盐：分离金黄色葡萄球菌。②加青霉素：分离酵母菌和细菌。(2)通过改变培养基的成分。举例：①培养基中缺乏氮源：可分离自生固氮微生物。②培养基中缺乏有机碳源：可分离自养微生物。本文档共34页；当前第14页；编辑于星期二\1点43分(3)利用培养基的特定成分。举例：①当石油是唯一碳源：可分离出能消除石油污染的微生物。②当纤维素为唯一碳源：可分离纤维素分解菌。(4)通过某些特殊环境分离微生物。举例：①在高盐环境中可分离耐盐菌，其他菌在盐浓度高时易失水而不能生存。②在高温环境中可分离得到耐高温的微生物，其他微生物在高温环境中因酶失活而无法生存。本文档共34页；当前第15页；编辑于星期二\1点43分消毒和灭菌获得纯净培养物的关键——防止外来杂菌的入侵——指使用强烈的理化因素杀死物体内外

所有微生物，包括芽孢和孢子。——使用较为温和的物理或化学方法，仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒灭菌常用的消毒和灭菌的方法P15-16本文档共34页；当前第16页；编辑于星期二\1点43分计算→称量→溶化→灭菌→倒平板培养基的制备P17倒平板操作的讨论：(1)培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。(2)为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。本文档共34页；当前第17页；编辑于星期二\1点43分(3)平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(4)在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。本文档共34页；当前第18页；编辑于星期二\1点43分纯化原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是纯化的细菌菌落。纯化技术接种的方法平板划线法稀释涂布平板法本文档共34页；当前第19页；编辑于星期二\1点43分平板划线法本文档共34页；当前第20页；编辑于星期二\1点43分稀释涂布平板法本文档共34页；当前第21页；编辑于星期二\1点43分平板划线操作的讨论(1)为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。本文档共34页；当前第22页；编辑于星期二\1点43分(2)在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。(3)在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。本文档共34页；当前第23页；编辑于星期二\1点43分▲显微镜直接计数原理——利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量，但不能区分死菌与活菌统计微生物数目的方法▲活菌计数法原理——当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低本文档共34页；当前第24页；编辑于星期二\1点43分(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即____和_______。(4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、________和________。无菌技术要求实验操作应在酒精灯________附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。火焰平板划线法稀释涂布平板法干热灭菌高压蒸汽灭菌（2011·新课标全国卷）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染，某同学欲从污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：

本文档共34页；当前第25页；编辑于星期二\1点43分练习(2013四川)普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽胞杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中，经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种（过程如图甲所示）。工程酵母菌固体平板培养接种接种筛选、接种②液体培养菌种α-淀粉酶基因①重组质粒接种到新鲜培养基③图甲⑴图甲中，过程①需要的酶有

。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以

作为唯一碳源。②、③过程需要重复几次，目的是

。筛选出真正高效利用淀粉的工程酵母菌菌种限制酶和DNA连接酶淀粉本文档共34页；当前第26页；编辑于星期二\1点43分练习⑵某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是

，推测该同学接种时可能的操作失误是

。⑶以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种

菌的发酵罐需要先排气，其原因是

。⑷用凝胶色谱法分离α-淀粉酶时，在色谱柱中移动速度较慢的蛋白质，相对分子质量较

。图乙稀释涂布平板法涂布不均匀（3）工程酵母工程酵母菌利用淀粉的速度很快，发酵产生CO2的速度也很快（4）小本文档共34页；当前第27页；编辑于星期二\1点43分练习（2013新课标卷II）临床试用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：（1）为了从样本中获取致病菌菌落，可用_______法或_________法将样本借种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。（2）取该单菌落适当稀释，用______法接种于固体培养基表面，在37℃培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。

本文档共34页；当前第28页；编辑于星期二\1点43分练习（3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A，B，C，D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_____；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B_____；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的________。（4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选择抗生素_______。本文档共34页；当前第29页；编辑于星期二\1点43分练习【答案】（1）平板划线稀释涂布平板（2）稀释涂布平板（3）敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A弱耐药菌（4）A【解析】（1）分离菌落常用稀释涂布平板法或平板划线法（2）取该单菌落适当稀释，稀释用涂布平板法进行接种（3）含抗生素的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对该抗生素有敏感性，周围没有透明圈的说明该抗生素不具有敏感性。透明圈越大的敏感性越强。（4）实验结果抗生素A对该致病菌的作用最好。本文档共34页；当前第30页；编辑于星期二\1点43分练习（2013上海）回答下列关于微生物的问题。阿拉伯胶是一种多糖，研究者从某地合欢树下距离地表深10～15cm处的土样中初筛到能合成阿拉伯胶降解酶的菌株SM01，以下为该菌株的鉴定过程。为获得单菌落，可采用

法将初筛菌液接种在_____培养基上。表4中培养液pH均为6.0，若对SM01中