血清蛋白电泳检查作业指导书

血清蛋白电泳检查作业指导书（电泳法）1.实验原理血清电泳检查是临床实验室中一种常用的蛋白质分析技术。它可以对血清或其他体液中的异常蛋白质进行筛选。它是以区带电泳为基础在一种合适的支持介质—琼脂糖上进行的电泳。血清蛋白质在给定的PH条件下主要根据其所在带电荷数将其分离成各种片段，根据其支持介质不同，电泳技术已有很大发展。选用琼脂糖作介质，其使用十分方便。血清蛋白质由五个不同迁移区带组成：ALB,α1，α2，β和γ球蛋白。每一区带含有一种或多种血清蛋白质。2.标本采集2.1标本采集前病人准备：受检者应空腹。2.2标本种类：静脉血3.标本储存：静脉血分离出血清，储存于2-8℃冰箱中，5天。4.标本运输：储存于2-8℃状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。5.标本拒收标准：细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。6.试剂试剂名称：血清蛋白电泳检查试剂6.2试剂生产厂家：法国Sebia公司6.3包装规格：150tests6.4试剂盒组成琼脂糖凝胶10块缓冲液条带10包×2条氨基黑（浓缩液）1瓶×100ml点样模具滤纸10条×1盒6.5试剂储存条件及有效期：贮存于室温（15～30℃）或冰箱（2～8℃），不能冷冻。有效期两年。7.仪器设备7.1仪器名称：SEBIA电泳仪7.2仪器厂家：法国Sebia公司7.3仪器型号：HYDRASYS8.操作步骤8.1启动电泳仪8.2将加样器放在一平板上，有数字的一端向上。各加样孔加入10ul溶血的样品，2分钟内加样完毕。将加样器放入保湿盒内，齿端向上（转运时用塑料齿保护架）。等待5分钟，使样品扩散至齿端。打开电泳仪盖，抬起电极和加样器支架。8.3使用HYDRAGEL15HEMOGLOBINCE时选择仪器的“PROTEIN”程序（位于链盘左侧）。8.4从包装袋内取出缓冲条，拿出末端的塑料片，将缓冲条两端塑料片固定在电极支架背侧的钉上，塑料片应紧贴支架。8.5取出凝胶板。将薄的滤纸轻轻吸去凝胶板表面的多余液体，然后立即丢弃滤纸。在电泳仪温度控制板表面的边线内加200ul蒸馏水或去离子水。凝胶面朝上，放置凝胶板，边缘对齐边线。略略将凝胶弯曲，然后放平，使水均匀分布在凝胶板下面而不含气泡。8.6降低支架，使缓冲条不接触到凝胶板。8.7从保温盒里取出加样器。取时拿保护框。折断加样器齿端保护框。将加样器放在6号位置。8.8关上电泳仪盖子，按下键盘左侧的绿色箭头“START”键，电泳开始。8.9凝胶染色扫描8.9.1打开盖子8.9.2取出并丢弃加样器8.9.3升高两个支架，握住塑料端取出并丢弃缓冲条。8.9.4打开凝胶托架，平放，将干燥的凝胶片放入两层间，然后关上托架。8.9.5将凝胶支架放入染色池8.9.6取出凝胶支架，打开盖子，取出干燥的凝胶片。8.9.7在光密度仪的570nm处或以黄色滤光片扫描测定。使用HYDRYS，DVSE或PREFERENCE光密度仪时，使A2片段的标记置于扫描板5mm的标志处。10.结果判断与参考范围：扫描得到的只是每种血清蛋白条带的相对浓度值。参考范围：建议测定每一批样本时都附有一控制品。11.临床意义11.1正常血清电泳检查一般可分为五条区带，即ALB,,α1，α2，β和γ球蛋白，脐带血清，胎儿血清，部分原发性肝癌血清，在AlB与α1球蛋白之间可增加一条甲胎蛋白带。多发性骨髓瘤可分离出六条区带，多出的1条称为M蛋白带。在下列疾病中可见醋纤膜蛋白电泳图明显异常。11.2M蛋白血症单克隆γ球蛋白（M蛋白）血症，主要见于多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症，重链病以及一些良性M蛋白增多症。在β与γ球蛋白后区段的各部分出现一条致密浓集的M蛋白带。11.3蛋白缺乏症主要包括α1抗胰蛋白酶缺乏症，γ球蛋白缺乏症等。临床上较少见。电泳图型表现为α1或γ球蛋白部位蛋白缺乏或显著减低。11.4肾病见于急慢性肾炎，肾病综合症，肾功能衰竭等。表现为ALB减低，α2和β升高。11.5急慢性炎症表现为α1，α2和β三种球蛋白均增高。11.6肝病包括急慢性肝炎和肝硬化。主要表现为ALB减低，β和γ球蛋白增高，出现β和γ难分离相连的“β~γ桥”，此现象往往是由于IgA增高所致，IgA与肝纤维化有关。12.操作性能：灵敏度高、特异性强、操作简便，重复性好。13.注意事项：13.1试剂贮存于室温（15～30℃）或冰箱（2～8℃）内，不能冷冻。13.2不要应用溶