实验一乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验

实验一、乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物检验一、实验目的1.了解酸乳中乳酸菌分离原理2.学习并掌握乳酸菌饮料中乳酸菌菌数的检测方法。二、实验原理活性酸奶需要控制各种乳酸菌的比例，有些国家将乳酸菌的活菌数含量作为区分产品品种和质量的依据。由于乳酸菌对营养有复杂的要求，生长需要碳水化合物、氨基酸、肽类、脂肪酸、酯类、核酸衍生物、维生素和矿物质等，一般的肉汤培养基难以满足其要求。测定乳酸菌时必须尽量将试样中所有活的乳酸菌检测出来。要提高检出率，关键是选用特定良好的培养基。采用稀释平板菌落计数法，检测酸奶中的各种乳酸菌可获得满意的结果。三、实验材料1.培养基改良MC培养基(ModifiedChalmers培养基)2.仪器和器具无菌移液管（25ml,1ml），无菌水（225ml带玻璃珠三角瓶，9ml试管），无菌培养皿，旋涡均匀器。恒温培养箱。四、实验方法流程：酸奶→稀释→制平板→培养→检查计数1.样品稀释先将酸奶样品搅拌均匀，用无菌移液管吸取样品25ml加入盛有225ml无菌水的三角瓶中，在旋涡均匀器上充分振摇，务必使样品均匀分散，即为10-1的样品稀释液，然后根据对样品含菌量的估计，将样品稀释至适当的稀释度。2.制平板选用2~3个适合的稀释度，培养皿贴上相应的标签，分别吸取不同稀释度的稀释液1ml置于平皿内，每个稀释度作2个重复。然后用溶化冷却至46℃左右的改良MC培养基倒平皿，迅速转动平皿使之混合均匀，冷却成平板。赌3.寨培养圈和计焦数稿将平粉皿倒纷置于阔40帮℃腾恒温拔箱内枯培养源24宪~4避8h恼，观茫察长酸出的晃细小比菌落签，计谅菌落低数目姐，按弯常规昆方法挠选择得30悔~3削00我个菌浴落平鸭皿进枝行计版算。资五、欢结果缓1窃.仪指示染剂显订色反炎应梯乳酸甚菌的誉菌落逢很小昏，1节~心3m寨m叔，园称形隆蒜起，厨表面驴光滑享或稍暑粗糙波，呈粪乳白中色、罗灰白析色或当暗黄春色。道由于惩产酸闹菌落但周围满能使鼻Ca虾CO脉3产禽生溶恨解圈捉，酸筒碱指观示剂斥呈酸旦性显嫌色反幻应。虎2.渔镜检凉形态卡必要恭时，狡可挑肃取不及同形夏态菌侵落制率片镜命检确榴定是提乳杆雹菌或阔乳链督球菌恒。保优加利戒亚乳捷杆菌棚呈杆鬼状，锈成单译杆、谁或双北杆菌犬或长骨丝状弄。嗜播热链务球菌声，呈桐球状连，成熊对、书或短悠链、港或长坦链状秧。条3诱.计秆数结范果束公式怒：岸平均档菌落骗数翻×呜稀释昏倍数谢稀释筒度存重复舟1雕2玩1甩2戏1老2响菌落导数愤平均互数忆报告躲八、刚思考励1.在为什星么乳抖酸菌付的检珠测关贿键是昨选用笑特定挑良好鸣的培裕养基祥？削2石.极培养絮基中证为什件么要炉加C谊aC靠O3划？找实验胜二、旷发酵乡制品扁中大缝肠菌储群的泊测定骗一、苏实验描目的卡1社、学鸟习食苍品中灿大肠肯菌群卫检测卧程序胶、方罗法；怕2膊、掌团握食糠品中祸大肠训菌群杨检测诵结果遥的报误告方贿式。低二、假实验巾原理殃大肠彼菌群端系指倡一群焦能发猛酵乳民糖、闸产酸济产气冬、需组氧和且兼性静厌氧国的革帮兰氏迟阴性活无芽壳胞杆寄菌。死该菌惠主要耀来源飞于人狂畜粪喂便，份故以滋此作佩为粪警便污黑染指走标来翅评价页食品鞠的卫叮生质狮量，秤推断瞧食品估中有珠否污穗染肠痛道致惜病菌别的可校能。向三、醒实验员材料手1旗、设雨备和期材料厕温箱它、水佛浴锅逐、天妥平、圣显微伏镜、计均质卡器或欲乳钵平、温纷度计荒、平贝皿、筐试管缘、发化酵管寇、吸李管、奉载玻树片、绕接种伞针洲2炮、培疾养基松及试妄剂未乳糖搂—卖胆盐布发酵宽管、口乳糖歌发酵旨管、断蛋白妙胨水徒、靛会基质植试剂遭、麦作康凯典、伊椒红美酬蓝琼母脂（倒EM轮B州）、废远腾贩氏琼论脂、挖革兰索氏染伪色液床3、攻样品顿发酵赞香肠速四、把实验控方法须与步护骤举1难、采撒样及作稀释栗①泻以无膛菌操品作将挤检样她25脆g绣放于嫌含有那22萍5m捐l搏灭菌绘生理岔盐水至，或用均在质器寺，以舰8天00幼0～厨10获00吨0r帜/m确in茄的速铲度处之理1给mi忙n，大做成求1∶峡10吹的均仆匀稀毒释液脖。始②击用受1m肆l葵灭菌壶吸管祸吸取替1饱：氏10有稀释崇液芒1m山l路，注东入含界有县9m摇l慕灭菌炸生理质盐水笔或其堪他稀榨释液索的试睁管内中，振让摇混知匀，重做成练1舍：蜘10糖0滥的稀册释液轿，换询用乌1蜡支师1m喝l畜灭菌挎吸管师，按绍上述你操作身依次身作浮10路倍递堤增稀训释液餐③挣根据词食品谅卫生遇要求融或对无检验井样品矛污染壮情况导估计乞，选积择三刷个稀历释度娱，每声个稀疏释度怠接种严3乒管。沟也可斧直接杰用样脚品接读种。爸2.打锁乳糖芒初发应酵试雨验命即通淡常所肉说的额假定乡试验柳。其钞目的冷在于革检查烘样品酿中有宅无发献酵乳度糖产忙生气楼体的增细菌昼。好将待萌检样寇品接澡种于劈乳糖龟胆盐阔发酵愉管内培，接定种量舰在驳1m狭l妈以上暗者，肯用双膏料乳祥糖胆伸盐发锈酵管快；晨1m稳l炕及重1m宫l舟以下披者，连用单习料乳爽糖发头酵管照。每舞一个贵稀释臣度接耀种秒3胆管，丰置（若36妈±混1测）字0大C孤温箱愉内，闭培养哀（阀24凭±闪2管）武h绣，如御所有情乳糖映胆盐虾发酵牢管都优不产什气，练则可鞋报告筒为大环肠菌精群阴什性，尺如有碗产生标者，币则按岸下列康程续罢进行嚷3.凤分离周培养短将产惰气的蜓发酵途管分炼别转丰种在龙伊红姐美蓝鞭琼脂低板或谜麦康溪凯琼俊脂平束板上浙，置贸（捎36意±侮1闹）直0忘C蚂温箱泰内，学培养饮18我h~瓶24绕h寒，然绪后取闻出，嘉观察仆菌落钳形态惑并作脉革兰辞氏染屑色镜摆检和冻复发律酵试能验。臣4.狮乳糖妖复发鼻酵试阅验哄即通掘常所哑说的站证实斑试验雁，其淡目的杨在于盐证明厌从乳登糖初促酵管趁试验勺呈阳津性反侍应的夸试管耀内分驴离到惹的革味兰氏跨阴性朵无芽饱胞杆度菌，骨确能嘴发酵锹乳糖奏产生让气体录。史在上镇述的捎选择夏性培殿养基鉴上，备挑取华可疑炒大肠咬菌群酸1~跳2得个进州行革亦兰氏她染色洋，同忧时接弃种乳夕糖发恢酵管歌，置让（玻36堂±黑1玩）惯0读C阴的温秀箱内党培养渠（邻24箩±耻2蛙）冠h们，观挠察产贫气情设况。吃凡乳酬糖发出酵管煌产气挡，革咐兰氏追染色喷为阴搁性无理芽胞碗杆菌祝，即断报告闸为大晒肠杆乞菌阳喝性；优凡乳版糖发浮酵管娇不产晋气或见革兰滴氏染靠色为映阳性颤，则振报告使为大照肠杆听菌为谎阴性修。什5.渴报告正根据热证实闪为大赶肠菌舅群阳樱性的枣管数绑，查颠MP桂N宁检索圈表，叉报告盆每隙10滨0m锦l漆（绳g唯）食闯品中狸大肠伙菌群怜的最比可能私数。策试管肥编号节稀释朽度胡初发供酵贱分离馅实验脆形态暮复发默酵猜试验据结果鹿1忘2里3矿4阔5井6划7恳8算9纺报告售实验驼三肌伤寒蛮疫菌双免疫互力实浆验肿一亚、实对验目称的撤学督习如遇何进鲜行伤棍寒疫巨菌免折疫力毅测定谦.猫二、画实验瓣原理屿伤寒淋是一默种由户伤寒琴杆菌腔感染艺所致礼的、收使人续衰弱疑并威壶胁生极命的稠肠道匀传染中病。权伤寒练患者澡会有每持续检发热衣、疲烧倦、嫩食欲鲁不振斑、严魂重头艺痛、化脾脏陈胀大还、便抛秘或府腹泻送的情岂况出呜现。干副伤系寒的慨病征壳与伤捐寒相闷似，驳但程细度一劫般较应轻，康它是蜡由另董一类消的沙千门氏酒菌所赞引起宝的。嫁伤寒尿及副攀伤寒赞的传范播途恩径是分经由紧一些狐受到胜病者设或带传菌者摊的粪潜便或锅尿液羡所沾据染的列饮食田而传蝴播。弱带菌唤者是虽一些旁经感酸染后乓而康垂复的煌人士息，但终在体税内仍驶存着货病菌针。若科食物蝶及饮叶品曾职由一性些不嗽断排充放病吨菌的鼠人员暂处理轧、或吓饮用毒和冲兰洗食艇物的卷水受叫到污街水所只污染肾，便冤有机卷会传估播伤平寒及扇副伤淘寒病姜。该苍疾病属在缺床少充君分的妥排污张系统启和环术境卫脆生设杠施的搁发展踏中国舟家比纷较多枣见。万据美旋国疾袋病控桃制和滩预防解中心共报道战，全崭世界司每年盛约有绣16诵00珠万人样发生纹伤寒歪，其和中大付约6适0万逗人死解于该炼疾病赏。屠三、叉实验命材料植间南劈小丙鼠窑毒菌造伤匙寒怖疫苗坚四表、实速验步过骤孙将经飞56逗℃薯30铃分钟潜加温全杀菌田（或贴用其岔他方畜法杀敲菌）派，不血加防偷腐剂偏的菌拜液稀展释为描每跳1m宵l含众伤寒古菌2庙.5纷×伯10盗8培。用昂该菌最液免酱疫体纳重为估14长~氏16横g蚀小鼠忠至少就30垃只，晃每只威皮下伶注射绑0.毒5m然l，盾注射办2次姓，间资隔7鸦天，忙末次德免疫盏后9胶~旷11潮天进兰行毒茂菌攻春击。灾免疫趋组小冠鼠每婆只腹童腔注电射1随M手LD把的毒吸菌（帖含于踩0.墓5m羞l中拴），宏同时学应用气同批保饲养站或体梯重与尤免疫故组相滨同的宪小鼠偏3组狐（每己组至旧少5条只）冬作对跪照，表分别接于腹额腔注反射2宿、1难及1虑/2旗M鸦LD妇的付毒菌键（各窃含于个0.静5m味l中档）。略观察疮3天功，对磨照组益小鼠老感染位2筐ML词D及屈1孤M女LD报者应否全部环死亡牙，感殿染颜1/提2于M不LD三者要辣有部讨分死贵亡。沉免疫储组至究少保余护7如0%熟小鼠同活存沿。评五流、实纳验结夏果：蜓实验仪四卸光仆化学饺荧光吴分析势法测清定氨闲苄青弱霉素雹一伟实畜验目鸽的读学会幸氨苄须青霉辞素的苏测定辉方法饭二、纯实验徒原理趴氨苄未青霉恋素未(A挺mp酒ic惜il想li的n)旺损为临筑床上披常用豆控制泪细菌固感染脉的一冈类重亮要的荐青霉晒素类老抗生唱素链,街属广爷谱抗同菌素附，纵对大爷多数钻G宝+才菌的蛾抗菌写作用勉不及奶青霉备素G猎,对赶阴性兴杆菌前的作竟用超辉过青挠霉素座。作俗用机菊制同袍青霉贸素。婶但侮肠球蜘菌对晒氨苄石青霉档素都较为液敏感栋,对旨G-抖杆菌熔作用鱼较卡皮那霉团素,尸庆大荐霉素就弱,貌与四龙环素睛相仿含,对活伤寒政杆菌勿,大弱肠杆野菌的判抗菌眉作用冻较强矿,绿刮脓杆时菌和辅金葡闷菌对密本品线耐药荡.主野要用冈于治桐疗敏戴感细宵菌所身致的夕败血励症妇、挺尿路占感染镰、摔肺部裙感染双、静胆道扯感染仅等财；旺治疗文伤寒葱、副倒伤寒休疗效猫与氯幼霉素毒相仿李。本多品在唇脑膜盈炎症志时，千脑脊岭液浓剥度较燥高，壁也适叫用于纺治疗厦由肺喷炎球立菌、荒脑膜抱炎双赵球菌冶及流享感杆朝菌引恩起的房脑膜宏炎。富与其邀他半挂合成牌青霉的素类木、氨蚕基糖节甙类醒及氯凤霉素锈等合丧用可涉增强趁疗效疮。嚷鉴于萌其特从殊的乒药理磁作用光,亿其质塌量控炎制就拳显得羞更为朵重要祸。目脚前国复内外架主要按通过敞高效针液相窗色谱字法来费测定督氨苄闪青霉宿素的键含量梦,文本实望验采鼻用光秘化学田荧光高分析牌法取来测袄定其岸粉针羽剂中翅氨苄腾青霉胞素的致含量尽。龟三、漫实验壤材料妄氨苄情青霉晒素药久物（竭市售维）喇RF症-5被00泄0型畜荧光贼分光箭光度错计砍YE劝-1哭型荧丹光分链光光谋度计致12僵5W陡高压斤汞灯愁（破差除玻潜璃外型壳）寻TO院A型衣Ph认计巨2%激甲醛滩溶液捐四、膨实粮验步袄骤贸：摆将药职物样益品稀酬释，帅制定迟溶