临床免疫学和免疫检验酶免疫技术练习题

',医学教育网',医学教育网**用.med66.匚口m版权所有 第1页临床免疫学和免疫检验酶免疫技术练习题一、A11、HRP与TMB反应后，加 H2SO4终止反应前呈A、蓝色B、橙黄色C、棕黄色D、黄色E、紫色HRP与底物OPD反应后的测定波长为278nm450nm403nm495nm492nmHRP与底物TMB反应后的测定波长为278nm450nm403nm495nm492nm4、用于标记的HRP的RZ值应大于2.43.01.53.55.05、酶免疫技术中酶的要求A、酶的活性要强，催化反应的转化率高，纯度高B、易与抗体或抗原偶联，标记后酶活性保持稳定C、作用专一性强，酶活性不受样品中其他成分的影响D、酶催化底物后产生的产物易于判断或测量，方法简单易行、敏感和重复性好E、以上都是6、酶免疫测定根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的与游离的酶标记物而分为下述哪几种类型A、均相异相B、同相均相C、异相固相D、口相均相',医学教育网**',医学教育网**用.med66.匚口m版权所有第#页24、用ELISA抗体夹心法检测抗原A时，口相载体的包被物是（）。A、酶标记 A抗体B、未标记的抗 A抗体C、未标记抗原AD、酶标抗球蛋白抗体E、酶标记的 A抗原二、B1、A.免疫印迹法B.ELISA（双抗体夹心法）C.自身红细胞凝集试验D.ELISA（间接法）E.免疫组织化学技术1>、可用于HIV抗体、HBsAg的检测的方法是（）。TOC\o"1-5"\h\z\o"CurrentDocument"A B C D E2>、测定HIV抗体确诊HIV感染常用的方法是（）。\o"CurrentDocument"A B C D E3>、对相应的抗原进行定性、定位和定量测定常用的方法是（）。\o"CurrentDocument"A B C D E4>、检测抗原最常用的方法是（）。\o"CurrentDocument"A B C D E答案部分一、A1【正确答案】A口答案解析口TMB是一种优于OPD的新型HRP色原底物。TMB经HRP作用后变为蓝色，加入硫酸终止反应后变为黄色，最大吸收峰波长为 450nm。【答疑编号100916712,点击提问】【正确答案】E口答案解析口OPD被认为是HRP最为敏感的色原底物之一。 OPD在HRP的作用下口橙黄色，加强酸如硫酸或盐酸终止反应后呈棕黄色，最大吸收峰在492nm波长。【答疑编号100916711,点击提问】3、【正确答案】B【答案解析口TMB是一种优于OPD的新型HRP色原底物。TMB经HRP作用后变为蓝色，加入硫酸终止反应后变为黄色，最大吸收峰波长为450nm。【答疑编号100916710,点击提问】4、【正确答案】B【答案解析】用于酶免疫技术的HRP,其RZ值应大于3.0。【答疑编号100916709,点击提问】5、【正确答案 】E【答案解析 】1.酶的活性要强，催化反应的转化率高，纯度高。2.易与抗体或抗原偶联，标记后酶活性保持稳定，且不影响标记抗原与抗体的免疫反应性。3.作用专一性强，酶活性不受样品中其他成分的影响，受检组织或体液中不存在与标记酶相同的内源性酶或抑制物。用于均相酶免疫测定的酶还要求当抗体与酶标抗原结合后，酶活性可出现抑制或激活。4.酶催化底物后产生的产物易于判断或测量，方法简单易行、敏感和重复性好。【答疑编号100809891,点击提问】6、【正确答案 】A【答案解析 】酶免疫测定根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的与游离的酶标记物而分为均相和异相这两类。【答疑编号100809890,点击提问】7、【正确答案】B口答案解析口酶增强免疫测定技术( EMIT)是均相酶免疫测定技术。 EMIT的基本原理：口抗原与酶结合成酶标半抗原，保留半抗原和酶的活性，当酶标半抗原与抗体结合后，所标的酶与抗体密切接触，使酶的活性中心受到影响而活性被抑制，反应后酶活力大小与标本中的半抗原量呈一定的比例，从酶活力的测定结果可推算出标本中半抗原的量。【答疑编号100809889,点击提问】8、【正确答案】C【答案解析】均相酶免疫测定是将半抗原或小分子抗原如药物、激素、毒品、兴奋剂等与酶结合制成酶标记物，酶与抗原(半抗原)结合后仍保留酶和抗原(半抗原)的活性。均相酶免疫测定操作简便、快速、适合于自动化，应用广泛，不仅可检测药物、激素、毒品、兴奋剂等半抗原或小分子抗原，也可测定大分子蛋白质、病毒及细胞性抗原成分。最大缺点是易受样品中非特异的内源性酶、酶抑制药及交叉反应物的干扰，而且由于采用竞争性结合分析原理，灵敏度不及异相酶免测定。【答疑编号100809888,点击提问】9、【正确答案】B【答案解析】在双位点一步法测定中，应注意钩状效应，类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。【答疑编号100809887,点击提问】10、【正确答案】A口答案解析口许多化合物可作为 HRP的供氧体，在 ELISA中常用的供氢体底物为邻苯二胺( OPD)、四甲基联苯胺( FMB)和 ABTS。OPD为在ELISA中应用最多的底物，灵敏度高，比色方便。【答疑编号100809886,点击提问】11、【正确答案】A【答案解析】制备抗体酶结合物的方法通常有戊二醛交联法、过碘酸盐氧化法和标记抗体鉴定法。【答疑编号100809885,点击提问】12、【正确答案 】D【答案解析 】斑点免疫层析试验以硝酸纤维素为载体，利用微孔滤膜的毛细管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，犹如层析一般。【答疑编号100809884,点击提问】13、【正确答案 】B【答案解析 】化学发光是吸收了化学能使分子激发而发射的光，而荧光是吸收了光能使分子激发而发射的光。【答疑编号100809883,点击提问】14、【正确答案】C口答案解析口钩状效应即HOOK效应，是指由于抗原抗体比例不合适而导致假阴性的现象，其中抗体过量叫做前带效应；抗原过量叫做后带效应。在等价带前后分别为抗体、抗原过剩则影响沉淀物的形成，这种现象称为带现象。带现象在临床检验中经常出现，特别是 ELISA反应中。出现在抗体过量时，称为前带，出现在抗原过剩时，称为后带。所以在临床工作中一定要注意前带和后带现象，以免出现假阴性结果，尤其以前带效应明显，这种情况可以通过进一步稀释样本进行解决。【答疑编号100809877,点击提问】15、【正确答案】A口答案解析口均相酶免疫测定方法有酶增强免疫测定技术（ EMIT）和克隆口供体免疫分析方法。其中，口增强免疫测定技术是最早取得实际应用的酶免疫测定方法。【答疑编号100809876,点击提问】16、【正确答案】C【答案解析】间接法是检测抗体最常用的方法，其原理是利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，只要更换不同的固相抗原，就可以用一种酶标抗体检测各种与抗原相应的抗体。【答疑编号100809875,点击提问】17、【正确答案】E【答案解析】免疫渗滤试验和免疫层析试验具有简便、快速、单份测定、可立等结果等优点，无需任何仪器设备，试剂稳定，因此多用于急诊检验。这类试验不能准确定量，所以主要限于检测正常体液中不存在的物质以及正常含量极低而在特殊情况下异常升高的物质。 目前临床检验中已开展的项目有 HCG、抗HCV和抗HIV、HBsAg等，新项目正在不断发展中。【答疑编号100809874,点击提问】18、【正确答案】D【答案解析】ELISA是在固相载体上包被抗原或抗体后，通过抗原抗体反应使酶标抗体（或酶标抗原）结合到载体上，经洗涤使结合的酶标抗体和游离的酶标抗体分离，洗去游离的酶标抗体（或酶标抗原）。在这种测定方法中有 3种必要的试剂：口固相的抗原或抗体。口酶标记的抗原或抗体。③酶作用的底物。间接法和捕获法还使用稀释的血清标本做试剂。戊二醛是一种双功能团试剂，可以使酶与蛋白质或其他抗原的氨基通过它而耦联。与 ELISA的方法相反。【答疑编号100809873,点击提问】19、【正确答案【【答案解析】影响发光剂标记的因素有被标记蛋白的性质、原料比、标记率、温度。【答疑编号100809872,点击提问】20、【正确答案【答案解析在ELISA中，常用的酶为辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（APDDDOAP系统，其口感性一般高于应用HRP系统，空白值也较低。但由于AP较难得到高纯度制剂，稳定性较HRP低，价格较HRP高，制备酶结合物时得率较HRP低等原因，国内在ELISA中一般均采用HRP。【答疑编号100809871,点击提问】21、【正确答案【答案解析【答疑编号【答案解析【答疑编号100809870,点击提问】】酶免疫技术的主要试剂为固相的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体和与标记酶直接关联的酶反应底物。最常用的固相载体物质是聚苯乙烯。22、【正确答案【答案解析【答案解析ELISA板为载体，通常将抗原或抗体溶于缓冲液口最常用的为pH9.6的碳酸缓冲液口中ELISA板为载体，通常将抗原或抗体溶于缓冲液口最常用的为pH9.6的碳酸缓冲液口中，加于ELISA板孔中在4℃过夜， 经清洗后即可应用。如果包被液中的蛋白质浓度过低，固相载体表面有能被此蛋白质完全覆盖，致本底偏高。在这种情况下，如在包被后再用程称为封闭。包被好的【答疑编号100809869,点击提问】23、【正确答案致本底偏高。在这种情况下，如在包被后再用程称为封闭。包被好的【答疑编号100809869,点击提问】23、【正确答案【答案解析】酶联免疫吸附试验（ELISA）的位点一步法是在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原其后加入的血清标本和酶结合物中的蛋白质也会部分地吸附于固相载体表面，最后产生非特异性显色而导1%口5%牛血清白蛋白包被一次，可以消除这种干扰。这一过ELISA板在低温可放置一段时间而不失去其免疫活性。分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则可如图中所示，在测定时可使ELISA提高到新水平。标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。此法不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的ELISA提高到新水平。【答疑编号100809868,点击提问】24、【正确答案【答案解析口ELISA抗体夹心法检测抗原A时，口相载体的包被物是未标记的抗A抗体。【答疑编号100809867,点击提问】二、B1、【正确答案【答案解析】自身红细胞凝集试验可用于HIV抗体、HBsAg的检测，灵敏度与间接血凝试验相仿。【答疑编号100