土壤酶活性及土壤微生物计数测定方法

土壤酶活性及微生物测定土壤酶活性测定取样工具及取样方法在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。土样在自然条件下烘干装入袋中备用。所需试剂：酒石酸钠、NaCl、阿拉伯胶、纳氏试剂、硫酸铵[(NH4)2SO4]、甲苯、苯磷酸二钠、NaAc.3H2O、HAc、酚、铁氰化钾、4-氨基安替吡啉、碘化钾、氯化汞、氢氧化钾、、配置方法：铵态氮标准溶液：称取0.4717g(精确至0.0001g)干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4]溶于水中，再加水稀释至1000mL，此溶液1mL含100µgN。往500ml容量瓶中注入10、25、40、60、75、90ml标准溶液并用蒸馏水稀释至刻度，制备成的溶液在490nm下比色，并绘制标准曲线。醋酸缓冲液：PH5.0，NaAc.3H2O50g，溶于适量水中，加6mol/LHAc34ml，稀释至500ml。硼酸缓冲液：PH9.0，80毫升0.05mol/l硼砂（Na2B4O7.10H2O）和0.2mol/l的硼酸混合。纳氏试剂：将碘化钾10g溶于10ml水中，边搅拌边慢慢地加入氯化汞饱和水溶液，直至生成的红色沉淀不再溶解为止。加入氢氧化钾30g并溶解之，再加入氯化汞饱和溶液1ml，加水至200ml。静置，取上层清液，贮于棕色瓶中酚的标准溶液：（1）原液—1克酚溶于蒸馏水中定容至1升，溶液在暗色中稳定，（2）工作液—取50ml原液稀释至1升（1ml含0.05mg酚）；分别向100ml容量瓶中注入1、2、3、4、5、6、7ml工作液并显色定容（分别相当于0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35毫克酚），待颜色稳定后，570nm比色绘制标准曲线。测定方法磷酸酶活性测定试验原理土壤中的磷，很大部分以有机磷化合物的形式存在。磷酸酶能促进有机磷化合物的水解。实验表明，土壤微生物对于土壤含磷有机物质的矿化起着主要作用；土壤的磷酸酶活性，在很大程度上取决于土壤的腐殖质含量，活性磷量，能矿化有机磷化合物的微生物数量，植物类型等因素，土壤的磷酸酶活性可以表征土壤的肥力状况。累实验度仪器爱恒温币箱、勒分光来光度鬼计、姓实验赞药品新甲苯铅、苯唐磷酸筛二钠杂、酚害、醋勤酸缓刑冲液殖、硼绣酸缓从冲液洞、铁竿氰化劣钾、偶4-吐氨基呈安替斯吡啉秒、地实验保步骤监取斑5克树过2折0目隶筛的雹风干秆土样英于5耍0毫宰升容去量瓶碗中，物用0丑.8粥(1词6滴滩)毫滨升甲玻苯处搁理，条15护分钟务后，植加入更5毫炒升苯句磷酸至二钠魔溶液言（岸6.贫75罗克案苯磷令酸二报钠溶年于水药，并广稀释武至楼1升狂）和页5毫镜升相需应的煮缓冲替液（洽碱性属磷酸丈酶用投pH末10踪的硼菌酸缓醒冲液菊，中糟性磷积酸酶弱用p贯H7米.0李的柠啊檬酸鸭缓冲疼液，辫酸性疲磷酸百酶用烈pH萝5.忌0的执醋酸摩缓冲享液）面。仔足细混慕合后付，将夜反应嫁物置慌于序37凭摄氏哭度跪恒温干箱中侦培养工12遇小时掘，然模后用药蒸馏耻水定凝容至累刻度择，摇疮匀过欠滤，打用5表毫升球水代哭替基傲质以抛设置钻对照句。为击了测苹定反营应混插合物所中的殿酚量去，取呜1毫怜升滤廉液于绝10巩0毫烟升容眯量瓶妙中，担加5章毫升泻硼酸撇缓冲璃液（抛pH比9.领0）伍，再女加入初3毫瓣升2砌.5伏%的别铁氰多化钾熔和3彩毫升类0.悬5%球的4拍-氨测基安犯替吡蛮啉，贩摇动景，溶及液呈奏粉红钞色，洲然后奋再加予水定朝容，惰待颜携色褪翼到稳乒定时茎（约躬需2揪0~凡30尸分钟阿），虾在分毫光光驼度计氏上于孤波长取57勿0纳宽米处瓣测定堪溶液叫的光传密度础，根闹据用功酚制县备的裕标准幅曲线竟查出旬供试拍滤液握中酚象的含煤量。形磷酸绣酶活律性以霞每克肺土壤音的酚削毫克斑数表虹示。捉脲酶拨活性驳测定凳试验堂原理茂小俱土壤师的脲宋酶活镇性，奸与土楼壤的指微生僵物数舰量、枝有机拆物质女含量辩、全芽氮和揪速效袍氮含稍量呈戚正相规关。复根基评土壤水可测往得最携大的除脲酶尼活性遣，人们们常魔用土截壤的跪脲酶成活性洲表征岩土壤封的氮晨素状小况。惑实验鲜仪器下锥形秃瓶、渣定性弓滤纸络、震肤荡器罢、分诸光光纹度计鞭、库1m茄m娃筛、丧实验有药品没酒石宜酸钠医、N耕aC逐l、嘉阿拉门伯胶拳、纳贝氏试泛剂、室铵态筝氮标庭准溶命液、坏双蒸膏水肿实验伪步骤破准确处称取似10银.0篮0g城过小1m跨m白筛的雹风干冤土样脚，置吓于1吸50片mL丙锥形闸瓶中膨，注留入5译0m役L2园0%边的N税aC徐l溶油液，违将瓶橡塞紧装，在导振荡铁30敌mi撞n(幻12蕉0r敏/m贤in调)后求，用适定性茄滤纸私过滤誓。浩取2已0m料L滤嘉液于线50提mL撕容量横瓶中汇，加望双蒸翠水稀抗释至歌40喝mL难左右辛，加谷2m秀L2墓5%冈酒石翼酸钠祥，充狂分摇些动静朗置5亿mi犬n，秤使其塔与C笼d，浅Mg少离子生络合声；赞再加档入1推0滴作1%猾阿拉蕉伯胶之，摇秃动后眼加2寄mL耻纳氏何试剂被，边筝加边敌摇，被定容仪至刻碑度，努5m暂in录后用辞49指0n售m比晋色，燕配制愁铵态屈氮标虑准溶抹液，幻绘制夺标准吉曲线始，附比色教后求捉算土党壤脲扶酶活化性。堵结果男分析巧滴定捧法测此定过般氧化休氢酶棒活性池试验嘴原理衰土壤运的过宿氧化话物酶摆活性唉，与陵土壤碍的呼痛吸强协度和肚土壤遗微生门物活絮动相块关，储在一贱定程钟度上狭反映葛土壤寄微生咽物过走程的刚强度窄。根翠际土沙壤的雷过氧丙化物萍酶活惭性，裹远较送根际耍外土略壤为姜高。永有机名质含嫁量高禁的土见壤，拍过氧曲化氢竭酶活泻性较刺强。敌因此驳，土怠壤过献氧化骑物酶缸的活石性可殿以表胆征土厕壤总康的生想物学殊活性维和肥残力状唱况。迟本试宋验采职用滴该定法虎测定何过氧捞化氢扇酶活偷性，估即通球过定冤量滴专定酶基促反雄应后甘剩余盖的过贞氧化径氢量仇。茶实验蒙仪器吴致密失滤纸捷、酸导式滴纪定管赖、倾1m宴m领筛与实验净药品沸双蒸丸馏水寺、H奇2脾SO染4历、过房氧化婆氢、物KM郊nO唯4强、译实验仰步骤茄准确醉称取竟5.六00腿g伤过芳1m鸦m固筛的狮风干顺土样嗽，置码于1姨50船mL集锥形丑瓶中凶，注用入4纠0m商L双情蒸馏倾水和蝇5m赚L0僚.3摧%过崇氧化预氢，泉另设聚对照粪，塞公紧瓶哈盖，族振荡劣30如mi柱n(骑12含0r险/m挎in矿)后梳，注则入5掀mL绿1.响5m仇ol拾/L找H途2像SO淹4寺终止术反应句，用歉致密狠滤纸海过滤艰，取棒滤液嫁25雀mL弄，用烛0.贼1m让ol见/L款KM你nO免4弱滴定避至微蒸红色蒜。土奥壤的移过氧蓬化氢帮酶活获性，刺用香10桥0g红土重扣的0虽.1涂mo辱l/揉LK缠Mn歪O猛4绍毫升别数表怜示。圈土壤丑微生检物检症测苦一、趁取样崭工具邪无菌羊刮铲询、土命样采闸集器移、镊各子、奏手套常、无轿菌小帅塑料芳袋和婶塑料滋瓶等起。尘二、炊采土范方式场：厌在选焰好适抢当地勤点后绿，用黄小铲指子除欣去表燕土，刊取离躺地面狼5妇-1不5c苹m方处的所土约列10义g唤，盛交入清治洁的化牛皮躲纸袋喝或塑惩料袋隔中，怠扎好捕，标纯记，欲记录赶采样保时间帆、地洞点、果环境涉条件庄等，蹈以备敞查考斑。为斑了使织土样邻中微华生物盆的数避量和饱类型丹尽少妻变化茅，宜见将样肃品立务即进宝行处扇理或江放在龄4冈℃惕冰箱咬中暂违存。葛三、木所需纸培养魂基及晌配置彻方法嘉1、判牛肉敞膏蛋槽白胨游培养黄基（算培养见细菌咽用）愉饮果牛肉然膏仰3g工，蛋摔白胨这10运g谊，N熊aC认l

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