药物常见定量分析方法 样品前处理和分析方法的验证 （药物分析课件）

样品前处理样品前处理是指在样品分析前要采用一定的方法，使待测药物纯化或待测元素转化为适宜的状态后再进行分析测定。样品前处理1.目的样品前处理消除干扰，保护仪器。提高方法的准确度、精密度、选择性和灵敏度。分析检测的关键环节。前处理对象前处理方法样品前处理含金属（Ca、Fe、Zn、Hg）卤素（F、Cl、Br、I）、N元素、P、S不经有机破坏经有机破坏样品前处理1.不经有机破坏的分析方法对药物分子的有机结构部分不进行完全破坏，通过选用适当溶剂溶解或经简单回流处理，使待测元素电离、离解，转化为无机离子进行测定，适用于含金属有机药物或结合不牢固的含卤素药物的分析。方法包括直接溶解法、提取分离法中的加热回流、超声处理、索氏提取、水蒸气蒸馏法、冷浸或渗漏法、萃取浓集法化学分解法……样品前处理2.经有机破坏的分析方法某些药品中含有机氮、硫、磷及有机金属离子与碳原子结合牢固，用上述方法难以成为无机的化合物，此时必须采用有机破坏的方法，使之转变为无机化合物，方可进行测定。样品前处理方法包括湿法破坏法和干法破坏法。破坏法2.经有机破坏的分析方法

（1）湿法破坏法1、硝酸—高氯酸方法2、硫酸—硫酸盐方法3、硝酸—硫酸法方法4、其他湿法主要采用强酸进行有机破坏，将有机结合的待测元素转变为可测定无机化合物。本法可用于生物制品中氮、磷或金属元素的测定。以硫酸-硫酸盐法为基础的含氮有机药物定量分析方法。适用于含氮有机药物前处理。例：凯氏定氮法用浓硫酸进行消解消解液加氢氧化钠蒸馏，用2%硼酸溶液吸收生成硼胺再用稀硫酸滴定2.经有机破坏的分析方法

样品前处理高温炽灼法氧瓶燃烧法2.经有机破坏的分析方法

（2）干法破坏法适用于含卤素、硫、磷等有机物的前处理，亦可用于含硒、砷盐药物的测定。样品前处理主要用于含卤素药物的鉴别。本法将有机药物经高温灼烧灰化，使有机结构分解而待测元素转化为无机元素或可溶性的无机盐。样品前处理（1）高温炽灼法将有机药物放入充满氧气的密闭烧瓶中进行燃烧，将燃烧所产生的待测物质吸收在适当吸收液中，采用适当分析方法进行鉴别、检查或含量测定。适用于含卤素及硫、磷、硒等药物的鉴别、检查和含量测定。（2）氧瓶燃烧法样品前处理2.经有机破坏的分析方法

分析方法的验证药品质量标准分析方法验证的目的是证明采用的方法适合于相应检测要求。分析方法的验证对原分析方法进行修订

建立药品质量标准AC制剂的组分变更BD

药品生产工艺变更需要进行方法验证的情况方法验证的理由、过程和结果均应记载在药品质量标准起草说明或修订说明中。分析方法的验证质量标准中需要验证的项目鉴别试验、限量或定量检查、原料药或制剂中有效成分含量测定、制剂中其他成分药品溶出度、释放度等检查中溶出量等的测定方法。准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。在分析方法验证中，须采用标准物质进行试验。分析方法的验证指标分析方法的验证一、准确度准确度系指采用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。准确度应在规定的范围内测定。

加样回收率测定——向已知被测成分含量的供试品中精密加入一定量的被测成分对照品，用实测值与供试品中含有量之差，除以加入对照品量计算回收率。

数据要求：9个测定结果，3个不同浓度，每个浓度各3份(80，100，120％)分析方法的验证在规定的条件下，同一份均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果在不同实验室由不同分析人员测定所得结果二、精密度重现性中间精密度重复性分析方法的验证三、专属性在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）存在下，采用的分析方法能正确测定被测物的能力。鉴别反应、杂质检查和含量测定方法，均应考察其专属性。对照品溶液供试品溶液空白溶液分析方法的验证检测限检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。检测限仅作为限度试验指标和定性鉴别的依据，没有定量意义。四、检测限分析方法的验证定量限试样中被测物能被定量测定的最低量，应符合准确度和精密度要求。适用于微量或痕量药物分析、定量测定药物杂质和降解产物。五、定量限分析方法的验证指在设计的范围内，测定响应值与试样中被测物浓度呈比例关系的程度。应在规定的范围内测定线性关系。以测得的响应信号对应被测物的浓度作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。可用同一对照品贮备液经精密稀释，或分别精密称取对照品，制备一系列对照品溶液的方法进行测定，至少制备5份不同浓度的对照品溶液。六、线性分析方法的验证必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算；可采用描述浓度-响应关系的非线性模型。六、线性数据要求：列出回归方程、相关系数和线性图。分析方法的验证范围能达到一定精密度、准确度和线性要求时的高低限浓度或量的区间。范围应根据分析方法的具体应用及其线性、准确度、精密度结果和要求确定。分析方法的验证七、范围八、耐用性在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为所建立的方法用于日常检验提供依据，开始研究分析方法时，就应考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻，应在方法中写明并注明可以接受变动的范围，可先采用均匀设计确定主要影响因素，再通过单因素分析等确定变动范围。分析方法的验证九、验证内容的选择

010203定量分析方法如原料药或制剂的含量测定及含量