病原学诊断与防治课件

致病菌的检验程序标本直接涂片染色镜检分离培养与鉴定病原菌抗原检测其它检测形态、结构、染色性涂片镜检菌落特征生化反应药敏试验血清学反应沉淀反应协同凝集免疫荧光对流免疫电泳酶免疫测定免疫印迹细菌代谢产物（气相色谱）细菌核酸（PCR）噬菌体分离细菌素测定分子生物学技术动物试验人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应答而产生特异性抗体。抗体的量常随感染过程而增多，表现为效价（滴度）的升高。因此，用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。一般采取病人的血清进行试验，故称为血清学诊断(serologicaldiagnosis)。血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，当后者的抗体效价比前者升高大于等于4倍时方有意义。常用方法：直接凝集试验、乳胶凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、ELISA。第二节血清学诊断第二节病毒学诊断

一标本的采集与送检（principleofcollectionspecimen）1早期（前驱期、急性期、发病前1~2天）2根据不同病毒感染，采集不同部位标本3病毒易被灭活（细胞内寄生，怕热不怕冷），低温保存，快速送检4标本无菌采集与处理（加抗生素，除菌并防止污染）5血清学实验检查抗体（双分血清）二病毒的分离培养与鉴定（virusisolationanddetermination）

（一）病毒的分离方法动物接种选择易感动物及接种部位，观察发病情况鸡胚培养不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。细胞培养：分离病毒最常用的方法（1）原代细胞—来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传2-3代。（2）二倍体细胞—在体外分裂50-100代后仍保持2倍体染色体数目的单层细胞。（3）传代细胞—能在体外无限传代的细胞多由癌细胞或二倍体细胞突变而来。病毒在培养细胞中增殖的指标细胞的变化（1）出现细胞病变效应（CPE）：即某些病毒在细胞内增殖引起的特有的细胞病变（细胞变圆、聚集、坏死、脱落等）（2）形成细胞融合（多巨核细胞）（3）形成包涵体：某些病毒在细胞浆或核内增殖后形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。（病毒增殖场所）红细胞吸附干扰现象细胞代谢改变（pH）正常细胞病变细胞（二）病毒的数量与感染性测定（三）新分离病毒的鉴定核酸类型、理化性状、形态、血清学鉴定、基因测序和生物对比。一般采取病人的血清进行试验，故称为血清学诊断(serologicaldiagnosis)。（3）形成包涵体：某些病毒在细胞浆或核内增殖后形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。2根据不同病毒感染，采集不同部位标本酶免疫技术（EIA）等。细胞培养：分离病毒最常用的方法四、病毒感染的快速诊断（3）形成包涵体：某些病毒在细胞浆或核内增殖后形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。基因治疗（反义寡核苷酸、抑制病毒复制）四、病毒感染的快速诊断基因治疗（反义寡核苷酸、抑制病毒复制）聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCRDNA）光镜——大病毒和包涵体——抑制病毒基因转录各种癣症——外用抗真药（易复发）电镜和免疫电镜——直接观察病毒DNA印迹杂交（Southernblot）4标本无菌采集与处理（加抗生素，除菌并防止污染）——抑制病毒基因转录（2）形成细胞融合（多巨核细胞）（1）原代细胞—来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传2-3代。三、病毒感染的血清学诊断用已知病毒抗原检测病人血清中相应抗体以诊断病毒性疾病（中和实验、补体结合实验、血凝抑制实验、凝胶免疫扩散等）

四、病毒感染的快速诊断

(一)

形态学

电镜和免疫电镜——直接观察病毒光镜——大病毒和包涵体基因治疗（反义寡核苷酸、抑制病毒复制）酶免疫技术（EIA）等。RNA印迹杂交（northernblot）光镜——大病毒和包涵体4标本无菌采集与处理（加抗生素，除菌并防止污染）（2）二倍体细胞—在体外分裂50-100代后仍保持2倍体染色体数目的单层细胞。人工被动免疫(artificialpasstiveimmunity)：注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白，或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻获得特异性免疫，因而作用及时。（2）二倍体细胞—在体外分裂50-100代后仍保持2倍体染色体数目的单层细胞。各种癣症——外用抗真药（易复发）人工被动免疫(artificialpasstiveimmunity)：注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白，或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻获得特异性免疫，因而作用及时。动物接种选择易感动物及接种部位，观察发病情况血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，当后者的抗体效价比前者升高大于等于4倍时方有意义。（1）原代细胞—来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传2-3代。5血清学实验检查抗体（双分血清）胎盘球蛋白、丙种球蛋白（3）传代细胞—能在体外无限传代的细胞多由癌细胞或二倍体细胞突变而来。基因治疗（反义寡核苷酸、抑制病毒复制）细胞培养：分离病毒最常用的方法（二）检测病毒蛋白抗原用已知特异性抗体直接检测病毒蛋白抗原（简便、敏感、特异）常用方法：免疫荧光技术（IF）

固相放射免疫测定（SPRIT）

酶免疫技术（EIA）等。（三）检测病毒特异性IgM抗体

检测病毒特异性IgM抗体可诊断急性感染或证明病毒复制。（四）检测病毒核酸

1核酸杂交

斑点杂交（dothybridization）

原位杂交（insitehybridization）

DNA印迹杂交（Southernblot）

RNA印迹杂交（northernblot）

2

核酸扩增聚合酶链反应

（polymerasechainreaction，PCRDNA）连接酶链反应（ligasechainreaction，LCR）反转录PCR（ReversetranscrptasePCR，RT—PCR(RNA)

3

基因芯片技术（genechip）

第三节真菌学诊断标本直接镜检深部标本染色标本G染色G+圆形大小不均有芽生孢子分离培养沙氏培养基菌落观察角质标本不染色标本10%KOH观察菌丝、孢子类型大小颜色皱摺鉴定动物实验（致病性真菌）接种观察发病情况死亡后取标本进一步鉴定皮肤超敏反应快速诊断血清学实验核酸检测真菌毒素检测死疫苗活疫苗类毒素新型活疫苗基因工程疫苗重组载体疫苗第四节特异性预防与治疗一、人工主动免疫(artificialactiveimmunity)：将疫苗(vaccine)或类毒素接种于人体，使机体产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施，主要用于预防。合成疫苗亚单位疫苗DNA疫苗转基因植物疫苗治疗性疫苗抗毒素抗菌血清胎盘球蛋白、丙种球蛋白细胞免疫制剂二、人工被动免疫人工被动免疫(artificialpasstiveimmunity)：注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白，或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻获得特异性免疫，因而作用及时。但这些免疫物质不是病人自己产生的，故维持时间短。主要用于治疗或紧急预防。二病毒的分离培养与鉴定（virusisolationanddetermination）（三）检测病毒特异性IgM抗体（2）二倍体细胞—在体外分裂50-100代后仍保持2倍体染色体数目的单层细胞。一标本的采集与送检（principleofcollectionspecimen）二病毒的分离培养与鉴定（virusisolationanddetermination）RNA印迹杂交（northernblot）一般采取病人的血清进行试验，故称为血清学诊断(serologicaldiagnosis)。干扰素及干扰素诱生剂治疗一标本的采集与送检（principleofcollectionspecimen）类型大小颜色皱摺（二）病毒的数量与感染性测定酶免疫技术（EIA）等。血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，当后者的抗体效价比前者升高大于等于4倍时方有意义。（3）传代细胞—能在体外无限传代的细胞多由癌细胞或二倍体细胞突变而来。一标本的采集与送检（principleofcollectionspecimen）（2）二倍体细胞—在体外分裂50-100代后仍保持2倍体染色体数目的单层细胞。（3）形成包涵体：某些病毒在细胞浆或核内增殖后形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。一般采取病人的血清进行试验，故称为血清学诊断(serologicaldiagnosis)。（1）原代细胞—来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传2-3代。——抑制病毒基因转录鸡胚培养不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。两种人工免疫的比较区别要点人工主动免疫人工被动免疫免疫物质抗原抗体或细胞因子等接种次数1-3次1次免疫出现时间慢（注射后2-4W）快（注射后立刻出现）免疫维持时间长（数月~数年）短（2-3W）用途多用于预防多用于治疗或应急预防三、细菌感染的治疗抗菌药物种类（抗生素及人工合成化学制剂）主要作用机制影响细胞壁合成影响细胞膜功能影响细菌蛋白合成影响细菌核酸合成四、病毒感染的治疗药物治疗核苷类药物——抑制病毒基因复制

——抑制病毒基因转录蛋白酶抑制剂天然药物（中草药）其他药物（金刚烷胺）干扰素及干扰素诱生剂治疗基因治疗（反义寡核苷酸、抑制病毒复制）免疫治疗（特异性抗体、免疫调节剂、治疗性疫苗等。五、真菌的治疗各种癣症——外用抗真药（易复发）深部真菌病——除去诱因，提高免疫力，用抗真菌药物（副作用大）致病菌的检验程序标本直接涂片染色镜检分离培养与鉴定病原菌抗原检测其它检测形态、结构、染色性涂片镜检菌落特征生化反应药敏试验血清学反应沉淀反应协同凝集免疫荧光对流免疫电泳酶免疫测定免疫印迹细菌代谢产物（气相色谱）细菌核酸（PCR）噬菌体分离细菌素测定分子生物学技术动物试验二病毒的分离培养与鉴定（virusisolationanddetermination）

（一）病毒的分离方法动物接种选择易感动物及接种部位，观察发病情况鸡胚培养不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。细胞培养：分离病毒最常用的方法（1）原代细胞—来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传2-3代。（2）二倍体细胞—在体外分裂50-100代后仍保持2倍体染色体数目的单层细胞。（3）传代细胞—能在体外无限传代的细胞多由癌细胞或二倍体细胞突变而来。

四、病毒感染的快速诊断

(一)

形态学

电镜和免疫电镜——直接观察病毒光镜——大病毒和包涵体动物接种选择易感动物及接种部位，观察发病情况（3）传代细胞—能在体外无限传代的细胞多由癌细胞或二倍体细胞突变而来。死亡后取标本进一步鉴定DNA印迹杂交（Southernblot）（三）检测病毒特异性IgM抗体动物接种选择易感动物及接种部位，观察发病情况电镜和免疫电镜——直接观察病毒类型大小颜色皱摺（2）二倍体细胞—在体外分裂50-100代后仍保持2倍体染色体数目的单层细胞。RNA印迹杂交（northernblot）因此，用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。3基因芯片技术（genechip）一标本的采集与送检（principleofcollectionspecimen）（1）原代细胞—来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传2-3代。免疫治疗（特异性抗体、免疫调节剂、治疗性疫苗等。1早期（前驱期、急性期、发病前1~2天）——抑制病毒基因转录5血清学实验检查抗体（双分血清）但这些免疫物质不是病人自己产生的，故维持时间短。一标本的采集与送检（principleofcollectionspecimen）光镜——大病毒和包涵体一标本的采集与送检（principleofcollectionspecimen）各种癣症——外用抗真药（易复发）四、病毒感染的快速诊断（3）形成包涵体：某些病毒在细胞浆或核内增殖后形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。主要用于治疗或紧急预防。一标本的采集与送检（principleofcollectionspecimen）抗体的量常随感染过程而增多，表现为效价（滴度）的升高。用已知病毒抗原检测病人血清中相应抗体以诊断病毒性疾病（中和实验、补体结合实验、血凝抑制实验、凝胶免疫扩散等）RNA印迹杂交（northernblot）基因治疗（反义寡核苷酸、抑制病毒复制）细胞培养：分离病毒最常用的方法2根据不同病毒感染，采集不同部位标本血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，当后者的抗体效价比前者升高大于等于4倍时方有意义。（2）二倍体细胞—在体外分裂50-100代后仍保持2倍体染色体数目的单层细胞。核苷类药物——抑制病毒基因复制二病毒的分离培养与鉴定（virusisolationanddetermination）抗菌药物种类（抗生素及人工合成化学制剂）4标本无菌采集与处理（加抗生素，除菌并防止污染）（1）原代细胞—来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传2-3代。主要用于治疗或紧急预防。（1）原代细胞—来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传2-3代。一般采取病人的血清进行试验，故称为血清学诊断(serologicaldiagnosis)。免疫治疗（特异性抗体、免疫调节剂、治疗性疫苗等。原位杂交（insitehybridization）1早期（前驱期、急性期、发病前1~2天）细胞培养：分离病毒最常用的方法DNA印迹杂交（Southernblot）4标本无菌采集与处理（加抗生素，除菌并防止污染）电镜和免疫电镜——直接观察病毒2根据不同病毒感染，采集不同部位标本（二）病毒的数量与感染性测定（3）形成包涵体：某些病毒在细胞浆或核内增殖后形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。一标本的采集与送检（principleofcollectionspecimen）RNA印迹杂交（northernblot）一般采取病人的血清进行试验，故称为血清学诊断(serologicaldiagnosis)。一标本的采集与送检（principleofcollectionspecimen）基因治疗（反义寡核苷酸、抑制病毒复制）酶免疫技术（EIA）等。第四节特异性预防与治疗细胞培养：分离病毒最常用的方法一般采取病人的血清进行试验，故称为血清学诊断(serologicaldiagnosis)。一标本的采集与送检（principleofcollectionspecimen）（1）出现细胞病变效应（CPE）：即某些病毒在细胞内增殖引起的特有的细胞病变（细胞变圆、聚集、坏死、脱落等）细胞培养：分离病毒最常用的方法一般采取病人的血清进行试验，故称为血清学诊断(serologicaldiagnosis)。一标本的采集与送检（principleofcollectionspecimen）四、病毒感染的快速诊断（三）新分离病毒的鉴定斑点杂交（dothybridization）基因治疗（反义寡核苷酸、抑制病毒复制）人工被动免疫(artificialpasstiveimmunity)：注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白，或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻获得特异性免疫，因而作用及时。常用方法：直接凝集试验、乳胶凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、ELISA。四、病毒感染的快速诊断（2）二倍体细胞—在体外分裂50-100代后仍保持2倍体染色体数目的单层细胞。动物接种选择易感动物及接种部位，观察发病情况（2）形成细胞融合（多巨核细胞）二病毒的分离培养与鉴定（virusisolationanddetermination）（1）原代细胞—来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传2-3代。四、病毒感染的快速诊断一标本的采集与送检（principleofcollectionspecimen）各种癣症——外用抗真药（易复发）3基因芯片技术（genechip）5血清学实验检查抗体（双分血清）DNA印迹杂交（Southernblot）抗菌药物种类（抗生素及人工合成化学制剂）细菌代谢产物（气相色谱）（2）二倍体细胞—在体外分裂50-100代后仍保持2倍体染色体数目的单层细胞。抗体的量常随感染过程而增多，表现为效价（滴度）的升高。RNA印迹杂交（northernblot）抗菌药物种类（抗生素及人工合成化学制剂）（3）形成包涵体：某些病毒在细胞浆或核内增殖后形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。鸡胚培养不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。细胞培养：分离病毒最常用的方法基因