DB15-T 2995-2023牧草中抗坏血酸的测定 邻苯二胺荧光法

ICS65.020.01CCSICS65.020.01CCSB04内蒙古自治区地方标准DB15/T2995—2023牧草中抗坏血酸的测定邻苯二胺荧光法DeterminationofascorbicacidinforageDeterminationofascorbicacidinforagegrasso-phenylenediaminefluorometry2023-05-112023-06-11内蒙古自治区市场监督管理局发布前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC19）归口。本文件主要起草人：王文曦、吴洪新、云颖、康博洋、盈盈、刘宇宁、湖日尔、张燕东、赵丽君、刘鹏斌、李润航、朝鲁孟、刘江英、刘洪林、卫媛、降晓伟、赵志惠、李坤娜、李薇、付慧。牧草中抗坏血酸的测定测定邻苯二胺荧光法范围本文件规定了新鲜牧草中的抗坏血酸邻苯二胺荧光光度的测定方法。本文件适用于新鲜牧草中抗坏血酸的测定。（GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3术语和定义3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理试样L(+)-抗坏血酸经活性炭氧化为L(+)-脱氢抗坏血酸后，与邻苯二胺反应生成有荧光的喹唔啉，其荧光强度与L(+)-抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定试样中L(+)-抗坏血酸总量。5试剂和材料(CH3COOH30%。(HPO3)nHPO338%。(CH3COONa)。硼酸(H3BO3)。邻苯二胺(C6H8N2)。200g（75μm～177μm）1L（1+9）1h～2h110℃～12010h20g/L115g40mL250mL冷却后加水至500mL于4℃冰箱可保存7d～10d。(500500g10003g500g/L100mL200mg/L20mg100mL（1000（10002℃～8(100.0μg/mL):准确吸取抗坏血酸标准液10.0mL，（5.7）100GB/T6682338nm420nm1cm0.01mg0.01。按照GB/T14699.1GB/T20195提取5g～10g（0.01g于100mL100mL10.0mL于100mL200mL2g（5.6）1min测定5.00mL50.0mL5.00mL50.0mL2.5mL15min，50.0mL42h～3h2.5mL500g/L50.0mL，待测。标准曲线的制定准确吸取标准液氧化液[L(+)-抗坏血酸质量浓度10μg/mL]0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、分别置于10mL具塞刻度试管中,用水补充至2.0mL。另准确吸取“标准空白液”2.0mL于10mL带盖刻5.0mL（5.10）35min，338nm420nmL(+试样的测定2.0mL10mLmL35338nm420nmL(+按上述步骤，对同一试样进行平行试验测定。注：整个测定过程应在避光条件下进行。试样中抗坏血酸含量X按式（1）计算：

X=C×V×𝐹×(1)m 1000式中：式中：X——试样中L(+)-抗坏血酸的总量，单位为毫克每百克（mg/100g）；C——待测样液中L(+)-抗坏血酸的质量浓度，单位为微克（μg）；V——荧光反应所用试样体积，单位为毫升(mL)；F——试样溶液的稀释倍数；100——换算系数；M——实际检测试样质量，单位克(g)；1000——换算系数。结果用2次平行测定结果的算术平均值