临床医学细菌培养-课件

国家医疗卫生标准与

细菌培养采样方法第一部分

国家医疗卫生标准无菌技术操作的重要性无菌技术操作是每个医务工作者凭良心做事的准则，无菌技术的管理，在医疗护理技术操作中,对于预防感染或交叉感染,提高疾病治愈率，起着重要的作用。无菌技术管理质量的优劣，直接影响着医疗质量的高低，这是保障病人顺利康复的一个较为重要的环节。因而，医务工作者必须注重加强细菌形态学和细菌生理学知识的学习，增强无菌观念；在工作中严格执行无菌操作原则和规程，并对外来人员（包括进修、实习生、参观访问者）进行无菌要求的指导和监督，防止菌尘增落，减少被污染的机会。同时，要以对工作、对病人负责的精神，一丝不苟、不怕麻烦地做好清洁、消毒、灭菌等一系列琐碎工作，每月进行空气及各种消毒物品的细菌培养，以确定菌落数量，鉴别细菌种类；确定病源，协助临床诊断传染病；有效控制室内细菌繁殖、感染，达到以下卫生标准。表1各类环境空气物体表面医护人员手细菌菌落总数卫生标准表1各类环境空气、物体表面、医护人员手细菌菌落总数卫生标准

1.2各类环境空气、物体表面、医护人员手不得检出致病性微生物不得检出乙型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌及其他致病性微生物。在可疑污染情况下进行相应指标的检测。母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿及儿科病房的物体表面和医护人员手上，不得检出沙门氏菌。

国家医疗用品卫生标准

2.1进入人体无菌组织、器官或接触破损皮肤、粘膜的医疗用品必须无菌。

2.2接触粘膜的医疗用品细菌菌落总数应≤20cfu/g或100cm2:：致病性微生物不得检出。

使用中消毒剂与无菌器械保存液卫生标准

3.1使用中消毒剂细菌菌落总数应≤100cfu/ml，致病性微生物不得检出。

3.2、无菌器械保存液必须无菌4、污物处理卫生标准污染物品无论是回收再使用的物品，或是废弃的物品，必须进行无害化处理。不得检出致病性微生物。在可疑污染情况下，进行相应指标的检测。

第二部分

采样方法

采样及检查原则

1.1操作者必须服装整齐，戴好口罩、帽子，剪短指甲；洗净双手；操作时做到三轻，即走路轻、开门轻、放置或取器皿动作轻。

1.2采样前，先将培养器皿分别用红笔标明取样标本序号。

采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h。若样品保存0—4℃条件时，送检时间不得超过24h。空气采样方法2.1采样时间选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。2.2采样高度与地面垂直高度80—150cm。2.3布点方法室内面积≤30m²，设一条对角线上取3点，既中心一点、两端各距墙1m处各取一点：室内面积＞30m²，设东、西、南、北、中5点，其中东、西、南、北点均距墙1m。2.4采样方法用9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min后送检培养。空气采样方法2.5操作时，前臂不能越过已打开的培养皿；放培养器皿时，要从内往外放，取时要从外往内，动作不能粗重，以免影响培养效果。2.6按照平开平放法或平开扣放法放置5分钟，即送检验室化验结果。物体表面采样方法

3.1采样时间选择消毒处理后4h内进行采样。

3.2采样面积被采表面＜100cm²，取全部表面：被采表面≥100cm²，取100cm²

3.3采样方法用5×5cm²的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭纸1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭纸，连续采样1—4个规格板面积，用无菌剪剪去手接触部分，将棉拭纸放入装10ml采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭纸直接涂抹物体的方法采样。放入物品前后，瓶口必须按常规在酒精灯上烘烤，然后盖好盖塞送细菌培养。

实物采样（液体培养试管)

进行实物培养的目的，主要是确定使用中实物是否有细菌污染。培养实物有：器械、针线、胶片、硬外导管、手套、敷料、凡士林纱等。1、进行实物采样时，从细菌室取来的液体培养试管不能倒立，以免受污染。同时，标明培养物品。2、无菌持物钳（镊子）和培养的物品，应同时进行培养，以便确定细菌来源是持物钳或是物品。3、由两人操作，在无菌操作下，一人打开无菌试管，将瓶口和瓶盖在酒精灯上烘烤片刻；另一人用无菌持物钳夹持准备培养的无菌物品。如是化学浸泡物品，必须注意避免液体滴入试管内；将物品放入试管中，应注意不能碰及试管口，以免影响培养效果。4、放入物品后，瓶口必须按常规在酒精灯上烘烤，然后盖好塞盖送细菌培养。5、或用培养试管采样液的棉拭纸进行采样，方法同上。创伤伤口、手术伤口分泌物细菌培养标本采样1、同前采样及检查原则2、标本采集：采取标本时，先用无菌生理盐水清洗病灶表面的污染杂菌，然后用无菌拭子提取病灶分泌物送检。3、细菌培养及病原分离鉴定：标本无菌采集后立即送检，按实物采样方法采样。4、标本处理完毕，送细菌室作细菌培养和鉴定。

医护人员手采样方法（试管法）医务人员手采样目的：是为了检测医务人员的责任感，防止将带有细菌的手污染无菌伤口。1、按无菌操作要求，进行手细菌采样。2、选定抽查对象，（手术室参加手术者事先不能通知被抽查对象）。

4.1采样时间在接触病人、从事医疗活动前进行采样。

4.2采样面积及方法被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉拭纸一支在双手指曲面从指根到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面30cm²）并随之转动采样棉拭纸，用无菌剪剪去手接触部位，将棉拭纸放入装有10ml采样液的试管内送检。采样面积按平方厘米计算。

医护人员手采样方法

(营养琼脂平板采样法）

进行手划痕采样按常规洗手后，待消毒液稍干，即由其用食指在培养基上划“十”字痕。操作完毕，即送细菌室培养。如有细菌生长，应告知被抽查者，并追踪污染源。

医疗用品采样方法

5.1采样时间在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。

5.2采样量及采样方法可用破坏性方法取样的医疗用品，如输液（血）器、注射器和注射针等均参照《中华人民共和国药典》1990年版一部附录中《无菌检查法》规定执行。对不能用破坏性方法取样的特殊医疗用品，可用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹采样，被采表面＜100cm²，取全部表面；被采表面≥100cm²，取100cm²。使用中消毒剂与无菌器械保存液

6.1采样时间

采取更换或使用中的消毒剂与无菌器械保存液。

使用中消毒剂与无菌器械保存液

6.2采样量及方法

在无菌条件下，用无菌吸管吸取1ml被检样液，加入9ml稀释液中混均，对于醇类与酚类消毒剂，稀释液用普通营养肉汤即可；对于含氯消毒剂、含碘