FISH技术检测子宫颈上皮细胞hTERC基因扩增的临床应用研究课件

郑州大学一附院乔玉环

FISH技术检测子宫颈上皮细胞hTERC基因扩增的临床应用研究1编辑课件宫颈癌对中国妇女的高危害度中国妇女患宫颈癌比例15/10万，是仅次于智利的宫颈癌高发国家我国目前宫颈癌患者约40万人，每年新增患者15万，居女性生殖道肿瘤首位我国宫颈癌死亡率为11.34%，居女性癌症死亡率第二位，特别在西部地区，宫颈癌居女性癌症死亡率之首近年来性传播疾病使其迅速增加(性传播疾病)2编辑课件我国宫颈癌治疗现状缺乏早期干预、阻止发展的有效手段仍是以手术和放疗为主不同期别的宫颈癌还没有确立一个规范化的治疗标准3编辑课件看看这些英年早逝的艺人，她们死于宫颈癌……4编辑课件卫生部2007年课题（WKJ2007-3-001）5编辑课件★课题负责人：北京大学魏丽惠教授★课题参加单位：全国36家医院★郑州大学第一附属医院首批参加的医院之一，负责人为乔玉环教授6编辑课件★宫颈癌仍居女性生殖道恶性肿瘤之首★致病元凶是高危型人乳头瘤病毒（HPV）

★从感染高危型HPV至宫颈癌的发生通常需要一个相对较长的时间研究背景7编辑课件持续性HPV感染细胞分化失调控宫颈上皮内瘤变CINCIN1CIN2CIN3宫颈癌

Normal宫颈癌筛查和预防的前提和基础

8编辑课件65%自行消退20%持续存在15%进展CINⅠ的转归？？9编辑课件1宫颈癌前病变和早期宫颈癌的有效筛查2寻找能预测CIN“逆转”或持续进展为宫颈癌的可靠指标本领域的研究热点

10编辑课件宫颈病变筛查技术

–最佳方案

液基细胞学检查（TCT）宫颈病变筛查方案

高危型HPV-DNA检测11编辑课件TCT敏感性低（55%-75%）重复性差

HPV敏感度高阳性预测值低，大多HPV阳性患者自然转阴

宫颈病变筛查技术的不足

需要寻找新的有效检测指标或手段

12编辑课件人类染色体末端酶（hTERC）基因1995年由Feng等首次从肾癌293细胞系cDNA文库中筛选出，定位于3q26.3hTERC基因扩增可使细胞永生化，导致肿瘤产生宫颈细胞由非典型性增生向宫颈癌转变的过程中几乎都伴有3号染色体长臂（3q）的扩增对宫颈癌染色体不稳定的研究也显示，常见染色体3q的增加，其中，涉及到的最重要的基因hTERC基因13编辑课件hTERC基因扩增是宫颈癌变过程中的早期事件学者Heselmeyer等首次检测宫颈细胞涂片中的hTERC基因，发现hTERC基因扩增随细胞学病变的严重程度而增加，可作为预测宫颈高度病变的独立指标。我们研究组的初步研究结果表明，hTERC的扩增率与宫颈病变严重程度密切相关，在宫颈癌筛查中，可弥补TCT和HC2检测HPVDNA的不足

。cc.ppt14编辑课件资料与方法15编辑课件研究对象

2007.09～2008.11宫颈病变120例120.ppt慢性宫颈炎33例CIN70例cin.ppt宫颈癌17例

年龄18～56岁，平均年龄37.4±7.3岁16编辑课件研究方法

荧光原位杂交（fluorescenceinsituhybridization，FISH）GLPTERC/CSP3探针由北京金菩嘉医疗科技有限公司提供，按探针试剂盒说明进行操作

17编辑课件结果分析hTERC探针：GLP探针，标记红色荧光对照探针：CSP3探针，标记绿色荧光正常细胞判断：单个间期细胞红色及绿色信号各2个异常细胞判断：红色信号大于2个，且绿色信号不少于2个为hTERC基因扩增异常细胞18编辑课件结果判定阈值建立：采集20例正常宫颈细胞，使用上述方法进行FISH实验，每例至少分析100个细胞，统计出现hTERC基因异常扩增细胞数目的百分比。

阈值=平均数（M）+3×标准差（SD）本研究阈值为7.1%

阳性结果判定每例样本随机计数100个细胞，计算其中hTERC基因异常扩增细胞的百分比，如果百分比大于阈值，判定为阳性结果；如果小于阈值，判定为阴性结果；如果等于阈值，加大观测样本细胞数目。19编辑课件统计方法

采用SPSS13.0统计软件包，各组计数资料结果采用χ2检验及Fisher确切概率法。检验水准α=0.05。20编辑课件结果21编辑课件一、各组宫颈病变中hTERC基因扩增阳性率比较22编辑课件病变病理例数(n)hTERC基因扩增结果统计量值及P值阳性数阳性百分比慢性宫颈炎33618.19%χ2=41.415P=0.000CIN114214.29%CIN217635.29%CIN3392871.79%宫颈癌171694.12%表1各组宫颈病变患者宫颈脱落细胞中hTERC基因扩增阳性率比较23编辑课件

二、TCT和检测hTERC基因扩增诊断宫颈高度病变的比较

24编辑课件组织学确诊为宫颈高度病变73例（17例CIN2，39例CIN3和17例宫颈癌），其中，TCT结果≥ASCUS者46例，而TCT结果≥ASCUS者共62例中，有46例患者组织学确诊为宫颈高度病变因此，TCT诊断宫颈高度病变的敏感性为63.01%（46/73），特异性为75.81%（46/62）

TCT25编辑课件73例组织学确诊为宫颈高度病变患者中，宫颈脱落细胞中hTERC基因扩增50例

，而hTERC基因扩增的58例患者中，50例确诊为宫颈高度病变，

因此，hTERC基因扩增诊断宫颈高度病变的敏感性为68.49%（50/73）

，特异性为86.20%（50/58）。

hTERC基因扩增26编辑课件三、高危型HPV-DNA检测和hTERC基因扩增诊断宫颈高度病变的比较27编辑课件高危型HPV-DNA检测组织学确诊为宫颈高度病变的73例患者中，高危型HPVDNA阳性患者66例，而HPVDNA阳性者共106例中，有66例患者组织学确诊为宫颈高度病变，因此，高危型HPV-DNA检测诊断宫颈高度病变的敏感性为90.41%（66/73），特异性为62.26%（66/106）。

前已述及，hTERC基因扩增诊断宫颈高度病变的敏感性为68.49%

，特异性为86.20%。

28编辑课件图1：慢性宫颈炎细胞hTERC基因的表达，可见2个红色信号红色信号：GLPhTERC；绿色信号：CSP3(FISH法100倍)

29编辑课件图3宫颈癌细胞hTERC基因的异常扩增可见4个红色信号红色信号：GLPhTERC；绿色信号：CSP3(FISH法100倍)30编辑课件1hTERC基因扩增在宫颈癌的发生发展中起重要作用，在一定程度上可反映宫颈病变的恶性程度2FISH检测宫颈脱落细胞hTERC基因扩增对诊断宫颈高度病变具有较高的敏感度和特异度，可弥补目前宫颈癌筛查中的不足结论31编辑课件国内外学者也取得了相似的结论32编辑课件国外

HeselmeyerHaddad等首次应用FISH技术检测宫颈脱落细胞hTERC基因扩增，发现低度病变（LSIL）中hTERC阳性率为7%，高度病变（HSIL）为76%，四倍体细胞数和hTERC表达水平随病变的严重程度而增加，认为hTERC检测可作为筛查HSIL的独立指标。对这些病例随访发现，所有进展为CIN3或宫颈癌的CIN1/2患者都伴有hTERC扩增，而自愈的CIN1/2患者没有发现hTERC扩增，表明检测hTERC基因扩增可作为预测病情进展的指标。AmJPathol,2003,

33编辑课件hTERC检测临床意义正常、ASCUS和CIN1样本很少有TERC拷贝数的增加，63％CIN2和76％CIN3样本显示TERC拷贝数增加区分CIN2和CIN3与正常、ASCUS,及CIN1的灵敏度和特异性超过90%（区分宫颈细胞高度癌前病变与低度癌前发育异常）伴有hTERC基因扩增的癌前病变的病人有52%－96%的恶变可能。可预测CIN1/CIN2向CIN3发展的风险因素，其灵敏度是100%，特异性是70%.

FISH是进行宫颈癌筛查，早期诊断和风险预测的有效手段(AJPApril2005,Vol.166,No.4)34编辑课件有效进行子宫颈癌前病变的病理分级

——国内魏丽惠教授TBS分级正常/炎症ASCUSASC-HLSILHSILTERC基因扩增发生率（%）4.613.528.625.287.7病理分级正常/炎症CIN1CIN2CIN3原位癌TERC基因扩增发生率（%）4.27.369.285.195.7IGCS2008会议报告，中国医学论坛报报道35编辑课件1宫颈癌筛查、早期诊断的新途径和手段

2探索预测CIN发展到宫颈癌的新手段

3迎来宫颈癌防治领域的又一次飞跃

hTERC基因36编辑课件专家点评hTERC基因

中华妇产科学会主委郎景和教授认为：在TCT检查和HPV检测筛查宫颈癌的同时，检测hTERC基因扩增，有望成为协助宫颈癌及癌前病变诊断及预测癌前病变是否向宫颈癌进展的重要指标，从而造福广大妇女。2008年，美国安德森癌症研究中心研究表明，hTERC基因扩增与宫颈高度病变和宫颈鳞癌密切相关。37编辑课件CINⅠ的处理

——北京大学人民医院魏丽惠教授很多学者认为《2002年ASCCP方案》存在对CINⅠ的过度治疗，近年来大量临床资料证实CIN未经治疗即有较高的自然消退率，CINⅠ60%-90%在1-2年内逆转，而且癌变的几率极低。因此，对于无症状、细胞学为ASCUS和LSIL，即使转化区不可见，也不用颈管刮宫，也不必锥切或LEEP，建议严格随访。物理治疗并不能避免宫颈发生上皮内瘤变(CIN)或早期癌(ECC)，赵昀等报道的诊断为CINⅢ中，9例曾接受过宫颈物理治疗后宫颈表面光滑，说明物理治疗并不能避免CIN的发生。——来自《中国妇产科网》38编辑课件随访（涂片、HPV）≥Asc-us或HPV（+）连续二次涂片（-）HPV（-）合并宫颈糜烂等阴道镜检每年随诊物理治疗LEEPCIN1持续