第13章 遗传病的诊断

PAGEPAGE12第十三章遗传病的诊断展、策略、常用技术、应用、问题和展望等问题。一、基本纲要了解遗传病诊断的常规临床诊断方法。了解系谱分析方法和注意事项。了解遗传病生化学诊断的基本方法。掌握细胞遗传学诊断的基本方法和技术。掌握基因诊断的基本原理和主要方法。掌握现症患者诊断、症状前诊断、产前诊断的基本方法。了解基因诊断技术的应用。二、习题（一）选择题（A型选择题）家系调查的最主要目的。A．了解发病人数 B．了解疾病的遗传方式 C．了解医治效果D．收集病例 E．便于与病人联2．不能进行染色体检查的材料。A．外周血 B．排泄物 C．绒毛膜 D．肿瘤 E．皮3．生化检查主要是指针的检查。A．病原体 B．DNA C．RNA D．微量元素 E．蛋白质和4．症状前诊断的最佳方法。A．基因检查 B．生化检查 C．体征检查 D．影像检查 E．家系调5．羊膜穿刺的最佳时间在孕周时。A．2 B．4 C．10 D．16 E．30绒毛取样法的缺点。取材困难 B．需孕期时间长 C．流产风险D．绒毛不能培养 E．周期长基因诊断与其他诊断比较，最主要的特点在。A．费用低 B．周期短 C．取材方D．针对基因结构 E．针对病变细胞时，可考虑进行基因连锁检测方法进行基因诊断A．基因片断缺失 B．基因片断插入 C．基因结构变化未D．表达异常 E．点突变核酸杂交的基本原理。变性与复性 B．DNA复制 C．转D．翻译 E．RNA剪切PCR特异性主要取决。循环次数 B．模板量 C．DNA聚合酶活D．引物的特异性 E．操作技术PCR最主要的优点在。周期短 B．灵敏度高 C．费用低D．准确性高 E．操作方便通过PCR-RFLP（正常）200bp/100bp；母亲（正常）300bp/400bp；儿子（患者）100bp/400bp；现检测到二胎结果是100bp/300bp，现判断这个胎儿。正常 B.携带者 C.患者 D.需性别确定后才能判断 E.现无法判13．染色体检查的指征有 。A．发育障碍 B．智力低下 C．反复流产 D．两性畸形 E．以上都14．不能用于染色体检查的材料有 。A．全血 B．血清 C．活检组织D．羊水细胞 E．受精卵细15．有下列指征者应进行产前诊。A．夫妇之一有致畸因素接触史的 B．习惯性流产的孕妇C．夫妇之一有染色体畸变的 D．35岁以上高龄的 E．以上都携带者不可以通过下进行检查A．群体水平 B．细胞水平 C．生化水平 D．基因水平 E．临床水17．下检测材料不能检测基因表达异常。A．cDNA B．线粒体DNA C．RNA D．蛋白质和酶 E．代谢产18．不能作为分子遗传标记的。A．单拷贝序列 B．微卫星DNA C．RFLP D．VNTR 19．核酸杂交结果判断的依据。A．信号出现时间 B．信号位置和强度 C．信号数D．信号种类 E．信噪比基因芯片技术的缺点在。A．大规模 B．微量化 C．高通量 D．自动化 E．费用21．对于单个碱基的突变，不能采技术检测。A．DNA测序 B．PCR-ASO C．PCR-SSCP D．PCR E．基因芯片作为遗传标记不符合的条件。片断较短 能够用于基因连锁分析 群体中表现多D.孟德尔式遗传 E.不受环境影响苯丙酮尿症的诊断不应考虑进。A．临床诊断 B．血清检查 C．尿液检查D．染色体检查 E．分子诊24．家系分析应注意的事项。A．资料的可信程度 B．资料的完整程度C．应尽可能地扩大家系范围 D．观察指标必须相同 E．以上都遗传疾病病史的采集主要内容。一般病史 B.家族史 C.婚姻史D.生育史 E.以上都是通过家系分析可以判断疾病。发病史 B.遗传方式 C.遗传度D.种类 E.严重程度染色体检查（或称核型分析）是确的主要依据单基因病 B.分子病 C.染色体病D.多基因病 E.线粒体病下不是染色体检查的指征。智力低下者 B.继发性闭经 C.多发性流D.性腺以及外生殖器发育异常者 E.35岁以上的高龄孕妇染色体检查技术使用最多的是材料。羊水 B.活检组织 C.外周血 D.组织培养物 E.骨髓生化检查特别适用于下疾病的检查。分子病 B.先天性代谢缺陷 C.免疫缺陷D.遗传代谢缺陷病 E.以上都是不能用于生化检查的材料。血液 B.活检组织 C.细胞D.尿液 E.阴道分泌物等通过酶活性检测的遗传代谢缺陷病。白化病 B.组氨酸血症 C.苯丙酮尿症D.半乳糖血症 E.以上都是下个体不属于携带者。携带有隐性致病基因，本人表现正常的个体；B.C.携带有致病基因，迟发个体；D.携带有显性致病基因,病情较轻的个体；E.染色体平衡易位或倒位的个体。绒毛取样可以在妊娠早周进行。A．5 B．9 C．16 D．20 E．30脐带穿刺时间最好在妊周左右进行。A．6 B．10 C．18 D．20 E．30胎儿镜检查的最佳时间是妊周～20周。A．8 B．12 C．18 D．24 E．30从孕妇外周血中获取胎儿细胞的方法。流式细胞仪分离技术 B.磁式细胞分选技术 C.细胞培养D.显微操作分选法密度 E.以上都是对致病基因已知、并且定位基本确定但其结构序列还不清楚的疾病，可以考虑取基因诊断的方法。mRNA检测 B.基因连锁分析 C.基因突变的检D.DNA印迹杂交 E.DNA测序基因诊断除了应用于遗传病外,还可以应用。后天基因突变引起的疾病 B.病原体检测C.个体识别、亲子关系判定 D.法医物证 E.以上都40．不属于核酸印迹杂交的方法。A.DNA印迹杂交 B.RNA印迹杂交 C.点杂交D.液相杂交 E.原位杂交目前在实验室手工测序常用方法。小片段重叠法到加减法 B.化学降解法 C.自动测D.Sanger双脱氧链终止法 E.基因芯片技术基因诊断的基本技术。核酸杂交 B.聚合酶链反应 C.DNA测序D.基因芯片技术 E.以上都是镰状细胞贫血的基因诊断为探针作Southern杂交时，就会出现同的DNA条带。α珠蛋白基因 B.β珠蛋白基因 C.γ 珠蛋白基因D.δ珠蛋白基因 E.ε 珠蛋白基因血友病A的基因诊断,由于FⅧ基因组织结构庞大，分子病理学改变复杂，对基因的产前诊断可以通进行。Southern杂交 B.DNA测序 C.RFLP连锁分析D.基因芯片技术 E.原位杂交A.PCR-ASOD.基因芯片技术B.PCR-SSCPE.以上都是C.DNA测序目前常用A.PCR-ASOD.基因芯片技术B.PCR-SSCPE.以上都是C.DNA测序目前常用PCR法进行检测p53突变的热点。A.外显子5-8B.外显子9-11C.外显子9-10D.外显子2-4E.外显子10-1146.分子诊断技术已经方面得到应用。遗传病诊断 B.肿瘤诊断 C.DNA分型D.病原体检测 E.以上都是呈常染色体显性遗传的PD（PARKI）致病基因定位。A.2p13 B.6q25.2-27 C.4q21-q23 D.7p24 少年型PD（PARK2）。常染色体显性遗传 B.常染色体隐性遗传 C.X连锁显性遗传D.X连锁隐性遗传 E.多基因遗传PD的易感基因包括 。多巴胺转运载体 B.多巴胺受体 C.N-甲基转移D.异哇胍4-羟化酶 E.以上都是病史采集中应详细记录的内容包。发病原因 B．发病过程 C．发病时间、地D．治疗情况 E．以上都是通过症状和体征的了解，有助于提示患者可能A．发病原因 B．遗传方式 C．疾病类型D．发病机理 E．遗传度53．Down综合征的确定必须通A．病史采集 B．染色体检查 C．症状和体征的了D．家系分析 E．基因检查影响家系分析资料准确度的因。个体的文化程度 B．家系成员的分散程度 C．被调查者的年D．记忆和判断能力 E．以上都是进行家系分析时必须注意的遗传学问题包。A．外显不全、延迟显性 B．新突变基因、易位基因C．动态突变、基因组印迹 D．主基因和遗传背景、基因和环境综合作E．以上都是不能用生化检查确诊的疾病。分子病 B．先天性代谢缺陷 C．免疫缺陷D．染色体病 E．多基因病生化检查除了对蛋白质和酶结构或功能活性的检测外，还包括了。A．反应底物的检查 B．中间产物的检查 C．终产物的检D．受体与配体的检查 E．以上都是通过酪氨酸酶活性检测的遗传代谢缺陷病是 。A．白化病 B．枫糖尿病 C．半乳糖血D．戈谢病 E．进行性肌营养不良通过精氨酸代琥珀酸裂解酶活性检测的遗传代谢缺陷病A．组氨酸血症 B．酪氨酸血症I C．黑朦性痴呆D．精氨酸琥珀酸尿症 E．糖原贮积病I型通过苯丙氨酸羟化酶活性检测的遗传代谢缺陷病A．高苯丙氨酸血症B．苯丙酮尿症C．半乳糖血症D．胱硫醚尿症E．酪氨酸血症I糖原贮积病I型需要检测的酶。肝磷酸化酶 B．支化酶 C．红细胞脱支D．α-1,4-葡萄糖苷酶E．葡萄糖-6-磷酸酶苯丙酮尿症的血清检测物。赖氨酸B．苯丙氨酸C．D．酪氨酸E．酪氨酸进行性肌营养不良需要检测的酶。A．氨酰脯氨酸酶 B．支化酶 C．肌酸磷酸激D．肝磷酸化酶 E．β葡萄糖苷酶枫糖尿病的尿液检测物。磷酸乙醇胺 B．赖氨酸 C．组氨D．酮衍生物 E．γ-氨基丁酸苯丙酮尿症检测苯丙氨酸羟化酶所使用的材料A．肾细胞B．肝细胞C．成纤维细胞D．白细胞E．红细胞产前诊断的物理诊断可以采用的方法是A．B超 B．X线 C．胎儿镜 D．电子监护 E．以上都是不宜做产前诊断的情况。要求仅做胎儿性别的检查 B．妊娠时间过长C．出现先兆流D．有出血倾向者 E．以上都是当羊水中甲胎蛋(AFP)浓度过高时，可能意味着胎儿A．无脑 B．开放性脊柱裂 C．脊髓脊膜膨出D．死胎 E．以上都有可能绒毛取样法的优点。可以在妊娠早期进行 B．引起流产的风险比较高C．不宜进行长期培养 D．标本容易被细菌、霉菌污E．制备染色体的质量不容易控制基因诊断中用于分析基因结构的材料。蛋白质 B．rRNA C．DNA D．tRNA E．mRNA第三代遗传标志是指 。A．RFLP B．STR C．SNP D．VNTR E．Amp-RFLP确定蛋白结构和种类的有效方法。mRNA检测 B．蛋白质检测 C．酶检测D．DNA的检测 E．产物代谢检测基因芯片技术的缺点。诊断时间短 B．检测费用较高 C．可以检测基因的多态性D．能检测基因突变 E．多个基因、多个位点的同时检测PCR-RFLP是将聚合酶链反应与RFLP方法结合的一种检测技术。该技术适用由DNA序列的差异，造成。内切酶位点的变化 B．新的酶切位点的产生 C．原酶切位点的消D．内切酶位点的移位 E．以上都是初步检测p53基因突变的方法。A．PCR-RFLP B．PCR-SSCP C．PCR-ASO D．RT-PCR E．Q-PCR探索在转录和翻译水平上疾病发生的科学称。分子细胞学 B．分子诊断学 C．分子病理学D．分子免疫学 E．分子生理学胚胎着床前诊断是在囊细胞期进行细胞的染色体核型分析和原位杂交。A．4个 B．8个 C．16个 D．32个 E．64个未来的基因诊断的主要发展方向。胚胎着床前诊断 B．母体外周血中胎儿细胞分析技术C．对常见病进行分子诊断 D．多发病进行分子诊断 E．以上都基因诊断存在的问题主要。准确性 B．稳定性 C．复杂性 D．基因歧视 E．以上都是基因诊断所使用的技术。生物学方法 B．分子生物学方法 C．细胞生物学方D．生物化学方法 E．免疫学方法（二）填空题遗传疾病诊断的主要内容包、 。病史采集的关键是材料的 和 ，应重点记录 、 、和 。进行家系分析时必须注意的几个遗传现象、 。除外周血可以制备染色体外和 等都可以作为检查材料。．生化检查主要是对蛋白质和酶结构或功能活性的检测。该方法特别适等遗传病的检查。此外生化检查还包、 的检查。生化检查的材料主要、 等。携带者的检出方法大致可分8．产前诊断主要从四个方面进行、 。产前诊断主要取材的方法有。基因诊断的基本技术包。未来的分子诊断将朝着三个主要方向发展。基因探针是一段带有标记的，与待测基因有关的核酸序列。目前基因探针要三种。根据杂交的分子和方式不同，分子杂交分、 五种主要技术。PCR经常结合其他技术进行基因诊断，这些技术包括、 和 。基因诊断的途径2种。常染色体显性杂合子个体的症状前诊断方法有三种，包、 。植入前诊断的基本技术主要涉及三个方面、 。（三）是非判断题病情况，这有助于判断疾病的遗传方式。常比较高。子病、先天性代谢缺陷、免疫缺陷等遗传病的检查。产前诊断主要从细胞培养、染色体检查、分子诊断三个方面进行。术已很成熟，成为产前诊断的主流方法。基因诊断是应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构或表达水平取基因连锁检测方法进行基因诊断。物样品，精细地研究各种状态下分子结构变异，了解组织细胞基因表达情况。单链构象多态性技术原理是当双链DNAα珠蛋白基因发生（GAG）变为缬氨酸（GTG。传学诊断，并将胚胎植入子宫。（四）名词解释题1．携带者（carrier）2．系谱分析(pedigreeanalysis)3．产前诊断（prenataldiagnosis4．绒毛取样法(chorionsampling)5．基因诊断（genediagnosis）6．聚合酶链反应（polymerasechainreaction,7．遗传标志（geneticmarker）8．核酸杂交(nuclearhybridization)9．基因芯片技术(genechiptechnique)PCR-RFLP基因探针（Probe）荧光原位杂交技术（fluorescentinsituhybridygation，13．症状前诊断（pre-symptomaticdiagnosis）14．新生儿筛查（neonatalscreening）15.植入前遗传学诊断（preimplantation geneticdiagnosis,PSD）（五）问答题对现症遗传病患者诊断的主要内容有哪些？家系分析在遗传病诊断中有何意义？进行家系分析时应注意哪些问题？什么是症状前诊断？如何何进行症状前诊断？何谓产前诊断？怎样进行产前诊断？产前诊断的适应征有哪些？可进行产前诊断的材料有哪些？怎样获得这些材料？基因诊断的途径有哪几种？基因诊断的基本方法有哪些？各方法的基本原理是什么？PCR-RFLPPPCR-ASOPCR-SSCP和传统的诊断方法相比，基因诊断有什么优点？13．染色体检查的适应证有哪些？14．什么是生物化学检查？它是怎样诊断遗传病的？15．什么是植入前遗传学诊断？其基本技术主要涉及哪几个方面？有一对夫好他们已有一个孩子死于β地中海贫血，现在还有一个正常的儿子，他们要求知道正在怀孕的这个孩子是否会受累？你已经从羊水中得到胎儿的DNA，应用β-5'10kbHindⅢRFLP，得到了如图所示的β段，根据你的分析，这个胎儿是患者吗?三、参考答案（一）A型选择题11.B 12.B 13.E 14．B 15．E 16.A 17.B 18.A 19.B20.E 21.D 22.A 23.D 24.E 25.E 26.B 27.C 28.B29.C 30.E 31.C 32.E 33.D 34.B 35.C 36.C 37.E 38.B39.E 40.D 41.D 42.E 43.B 44.C 45.E 46.A 47.E 48.C49.B 50.E 51.E 52.C 53.B 54.E 55.E 56.D 57.E 58.A59.D 60.B 61.E 62.B 63.C 64.D 65.B 66.E 67.E 68.E69.A 70.C 71.C 72.D 73.B 74.E 75.B 76.C 77.B 78.E79.E 80.B（二）填空题病史采集；症状与体征；家系分析；染色体检查；生化检查；基因诊断完整性；真实性；生育史；家族史；婚姻史外显不全；延迟显性；新突变基因；动态突变；易位基因；基因组印迹羊水；胸腹水；活检组织；组织培养物；骨髓与配体粪便；血液；活检组织；尿；脱落细胞；阴道分泌物临床水平；细胞水平；酶与蛋白质水平；基因水平仪器诊断；细胞学方法、生化学检查；分子生物学方法羊膜穿刺法；绒毛取样法；脐带穿刺；孕妇外周血胎儿细胞富集核酸杂交；聚合酶链反应；DNA行分子诊断基因组探针、cDNA探针、寡核苷酸探针斑点杂交、Southern杂交、Northern杂交、Western印迹杂交、原位杂交14．PCR/ASOPCR-RFLPmultiplex、PCR—SSCPPCR-DGGE直接诊断、间接诊断家系分析法和风险估计、生化学检查、基因分析胚胎组织微活检、PCRFISH（三）是非判断题的检出率常常比较低。对。错。应为：产前诊断主要通过胎儿形态特征检查、生物化学检查、染色体分析、DNA分析来进行诊断。5．错。应为：从孕妇外周血中获取胎儿细胞的方法则是一个十分安全的方法。目前这项技术还不很成熟，还没有成为产前诊断的主流方法。对。病，可以考虑采取基因连锁检测方法进行基因诊断。对。对。β珠蛋白基因（βglobin，β发生了突变，其谷氨酸残基（GAG）变为缬氨酸（GTG。胚胎进行遗传学诊断，确定正常后再将胚胎植入子宫。（四）名词解释题是指表现型正常，但携带有致病遗传物质的个体。具体指：①携带有隐性致携带有致病基因，迟发个体；④染色体平衡易位或倒位的个体。天畸形做出准确的诊断。入子宫，达到胎盘处后吸取一定数量的胎儿绒毛组织。应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构或表达水平的变化而做的或辅助临床诊断的技术，称为基因诊断（ genediagnosis，又称为分子诊断（moleculardiagnosis。DNA聚合酶反应特异性扩增某一DNA片段的技术。所谓遗传标志是群体中存在多态性而遗传上遵循孟德尔规律的，同时不受环HLADNA是从核酸分子混合液中检测特定大小的核酸分子的传统方法。其原理是核酸后又可依碱基配对规律形成双链结构。基因芯片技术是大规模、高通量分子检测技术。将许多特定的寡核苷酸片段或基因片段作为探针，有规律地排列固定于支持物上，形成矩阵点。样品统对每一探针上的荧光信号做出比较和检测，得出所要的信息。PCR-RFLPRFLPDNA是一段带有标记的，与待测基因有关的核酸序列。素标记探针，以检测探针和分裂中期的染色体或分裂间期的染色质的杂交。是针对一些常染色体显性(AD)遗传病的杂合子个体的一种诊断方法。PSD正常后再将胚胎植入子宫。（五）问答题DNARNA家系分析是诊断遗传疾病的重要步骤，从先证者入手，尽可能多的调查其亲症状前诊断是针对一些常染色体显性(AD)遗传病的杂合子个体的一种诊断方法。可以避免他将致病基因传递给后代，减少遗传病的发病率。常染色体显性杂合子个体的症状前诊断方法有三种（1）家系分析法和风险估计先确定遗传病的遗传方式，然后根据遗传规律，分析该家系中每个成员的基因型。在家系分析时，有些成员的基因型容易确定，有些成员两种基因型都有可能（可疑携带者，必须作进一的检查和估计风险（2）生化学检查 酶和蛋白水平的测定（包括代谢中产物的测定采用负荷试验和酶活性测定方法，目前对于一些分子代谢病杂合子的检测有一定的意义（3）基分析 从分子水平即利用DNA或RNA分析技术直接检出杂合子，特别是对一些致病基因的性质和异常基因产物还不清楚的遗传病，或用一般生化方法不能准确检测的遗传病，例如，慢性进行性舞蹈病、DMD、PKU等，进行基因分析具有快速、准确的特点。产前诊断称为宫内诊断，是对胚胎或胎儿在出生前是否患有某种遗传病或先染色体检查、分子诊断等；②生化检查，如特殊蛋白质、酶、代谢底物、中间产物和BX根据遗传病的严重程度和发病率的高低，可将产前诊断的适应征排列如下：35岁以上的高龄孕妇；③夫妇之一有开放性神经管畸倾向者，则不宜做产前诊断，另外应拒绝仅要求仅做胎儿性别的检查。可用于产前诊断的材料主要是羊水、羊水细胞、胎儿绒毛组织、胎儿血液、BB儿细胞的方法则是一个十分安全的方法。随着技术进步，该方法正向着实用性发展，成为非损伤性产前诊断的发展方向。但目前这项技术还不很成熟，还没有成为产前诊断的主流方法。研究较多的富集方法有：流式细胞仪分离技术，磁式细胞分选技术，细胞培养法等。⑥通过子宫冲洗和人工授精。基因诊断的途径有2基因及其分子病理学的了解程度和致病基因本身突变型的复杂性。直接诊断是直接检测致病突变的基因。它通常使用基因本身或紧邻的DNAPCR断，它适用已知基因异常的疾病。间接诊断，也称基因连锁分析，是当致病基因虽然已知但其异常尚属未知时，或致DNADNA性位点作为标记。RFLP、VNTR、SSCP、AMP－FLP常用的基因诊断基本技术包括以下几种：①核酸杂交：是从核酸分子混合液中检测特定大小的核酸分子的传统方法核酸杂交反应是一对一的反应即膜上有一个被检测分子时相应就有一个标记的探针分子与它杂交其原理是核酸变性和复性理论即双链的核酸分子在某些理化因素作用下双链解开而在条件恢复后又可依碱基配对规律形成双链结构。杂交通常在一支持膜上进行，因此又称为核酸印迹杂交根据检测样品的不同又被分为 DNA印迹杂交（Southernblot、RNA印迹杂交（Northernblot、点杂交和原位杂交。②聚合酶链反应：用聚合酶链反应来扩增靶SangerSangerDNADNADNADNADNADNA合成出准确互补链，在合成时，某种dNTPDNAddNTP3′3′-OHDNADNA1cm2上排列成千上DNA/RNAPCRPCR-RFLPRFLPDNA消失等，通过酶切后电泳图谱的判断，达到确定检测结果。该方法包括①PCR。即利DNAPCRPCR，DNAPCRDNAPCRDNADNAPCR-ASOASO（Allele-specificoligonucleotide，ASO）PCR-ASODNA中的同源序列。由于探针比较短，当被检DNAPCR。即利用一对或数对特异性引物，将目标DNAASOPCRHLAPCRPCR-ASO范围只有几十个碱基，跨度太小，这些都是该方法的缺陷。SSCP(single-strandconformat