免疫分析演示文稿

免疫分析演示文稿当前第1页\共有39页\编于星期五\2点第一节酶免疫分析仪一、酶免疫分析技术的分类：酶免疫分析(enzymeimmunoassay，EIA)

根据是否需要分离结合与游离的酶标记物，可分为:

酶扩大免疫测定均相酶免疫测定克隆酶供体免疫测定

液相酶免疫法非均相酶免疫测定固相酶免疫法(酶联免疫吸附测定enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）当前第2页\共有39页\编于星期五\2点需要了解的基本概念酶免疫测定（EnzymeImmunoassay,EIA)均相酶免测定对象为小分子抗原或半抗原，主要用于药物测定异相酶免测定需经过结合的标记物和游离的标记物的分离才能测定.分离的方法主要通过固相载体，故此法称为固相酶免疫测定ELISA。ELISA的测定模式:双抗体夹心法间接法竞争法当前第3页\共有39页\编于星期五\2点双抗体夹心法（三明治法）原理固相支持物表面包被抗体标记抗体待测物当前第4页\共有39页\编于星期五\2点夹心法的剂量--反应关系曲线信号强度（Y）线性范围待测物浓度（X）Hook效应当前第5页\共有39页\编于星期五\2点竞争法的原理固相支持物表面待测物包被抗体标记抗原当前第6页\共有39页\编于星期五\2点竞争法的剂量--反应关系曲线待测物浓度（X）信号强度（Y）线性范围当前第7页\共有39页\编于星期五\2点间接法原理包被体待测抗体包被抗原标记抗体（二抗）当前第8页\共有39页\编于星期五\2点俘获法原理俘获抗体（二抗）待测抗体标记抗原包被体当前第9页\共有39页\编于星期五\2点双抗原夹心法原理包被体待测抗体包被抗原标记抗原当前第10页\共有39页\编于星期五\2点

我们把采用酶标的方法测定物质含量的设备称为酶标仪。一般简单的酶标仪只有读数、数据处理的功能，还需要配置孵育箱，洗板机，人工操作步骤繁琐。全自动酶联免疫系统集加样品、加试剂、孵育、震荡、洗板、读数、数据处理7大功能于一体。当前第11页\共有39页\编于星期五\2点二、酶免疫分析仪的类型、工作原理及基本结构微孔板固相酶免疫测定仪器(酶标仪)半自动微孔板ELISA分析仪全自动微孔板ELISA分析仪管式固相酶免疫测定仪器小珠固相酶免疫测定仪器磁微粒固相酶免疫测定仪器等当前第12页\共有39页\编于星期五\2点有单通道和多通道两种类型工作原理与主要结构和光电比色计相同不同之处在于：

比色液的容器是塑料微孔板以垂直光束通过待测液通常使用光密度OD来表示吸光度1、微孔板固相酶免疫测定仪器当前第13页\共有39页\编于星期五\2点当前第14页\共有39页\编于星期五\2点当前第15页\共有39页\编于星期五\2点2、半自动微孔板式ELISA分析仪在酶标仪的基础上再配置:加液器温育器洗板机测读仪

测定中需由手工将微孔板移至下一步骤的仪器中进行。当前第16页\共有39页\编于星期五\2点3、全自动微孔板式ELISA分析仪自动化酶免疫分析系统由:加样系统温育系统洗板系统判读系统机械臂系统液路动力系统软件控制系统等组成当前第17页\共有39页\编于星期五\2点当前第18页\共有39页\编于星期五\2点温育箱反应板迭式存储器当前第19页\共有39页\编于星期五\2点X-Y头架当前第20页\共有39页\编于星期五\2点

样品架

50根装

50×3当前第21页\共有39页\编于星期五\2点

4根独立上下吸移管当前第22页\共有39页\编于星期五\2点

检

测

光

纤当前第23页\共有39页\编于星期五\2点

反应板

反应板夹具当前第24页\共有39页\编于星期五\2点

清洗装置当前第25页\共有39页\编于星期五\2点

供水箱

废水箱当前第26页\共有39页\编于星期五\2点检测时间:以乙肝两对半（立可读）为例

仪器操作各单元如下（满板）加样品时间：6-7分钟；9-10分钟（使用液面传感器）加酶时间：4分46秒(洗5遍，不浸泡)加两种显色剂A、B共：5分30秒加终止液：2分42秒读板时间：2分58秒当前第27页\共有39页\编于星期五\2点优势自动化程度高：

前后处理一体化设计，减少人与样品的接触机会，降低感染。各种自动安全检测能。稳定：

只要避免人为操作错误，可连续数年良好工作。准确：

不存在交叉感染。反应振荡，确保检测准确。当前第28页\共有39页\编于星期五\2点高速：

加注、读板速度快扩展性：

软件可升级，样本量增加，可联机使用用户做主更多：

开放式试剂

WINDOW操作系统中/英/日自选操作界面自定义编程自动/自定义时间表无限存档当前第29页\共有39页\编于星期五\2点4、管式固相酶免疫测定仪1990年德国推出的全自动管式ELISA分析系统和配套试剂用链霉亲和素包被的聚苯乙烯管、生物素结合的抗原或抗体，辣根过氧化物酶标记的抗体和显色底物ABTS测定中标准曲线可使用2星期，每次测定只需一点定标测定的精密度CV在3%左右当前第30页\共有39页\编于星期五\2点5、微粒固相酶免疫测定仪美国生产自动酶免疫分析仪应用聚苯乙烯微粒（颗粒直径0.47μm）作为固相，特异抗体或抗原包被在微粒上。第一次抗原抗体反应后，将反应液通过特制的玻璃纤维膜，聚苯乙烯微粒吸附在玻璃纤维膜上，液体则通过膜滤出。以后的反应在膜上进行，标记酶为ALP，底物为4-甲基伞酮磷酸酶，反应后进行荧光测定。当前第31页\共有39页\编于星期五\2点6、磁微粒固相酶免疫测定仪

瑞士出品的分析系统由分光光度测读仪、磁铁板和试剂组成：试剂包括：抗异硫氰酸荧光素（FITC）抗体特异抗体或抗原包被的磁微粒（颗粒直径1μm）FITC结合的特异抗体或抗原碱性磷酸酶标记的特异抗体或抗原底物酚肽（phenolphthalein）磷酸酯反应结束后将试管架放在磁铁板上，磁微粒被磁铁吸引至管底，完成固相与液相的分离。酶作用后反应液呈粉红色。什么样的反应当前第32页\共有39页\编于星期五\2点磁颗粒ELISA是将两株单抗分别标记酶和异硫氰酸荧光素(FITC)，另将一抗FITC抗体经化学反应与磁颗粒偶联，制成可磁化固相通用分离剂。测定时将样品和两种标记单抗加至试管中温育，然后加入可磁化抗FITC颗粒分离剂，生成夹心免疫复合物，洗涤，加酶底物显色。当前第33页\共有39页\编于星期五\2点三、酶免疫分析仪的性能评价和维护保养（一）评价指标和方法1．滤光片波长精度检查及其峰值测定2．灵敏度和准确度3．通道差与孔间差检测4．零点飘移5．精密度评价6．线性测定7．双波长评价当前第34页\共有39页\编于星期五\2点重点是光学部分

1．滤光片波长精度检查

2．通道差与孔间差检测当前第35页\共有39页\编于星期五\2点四、酶免疫分析仪的临床应用１．病原体及其抗体的检测