基因工程二的基本操作程序知识讲解

1、理解获取目的的方法

2（重点、难点）理解表达载体的构建原理3、理解将目的到入受体细胞的方法4、理解目的的检测与鉴定可以采用不同的方法1、目的：编码蛋白质的结构（组文库↓DNA目的DNA目的DNA结构的核苷酸序—可在短时间内大专一性强，可产生自然工作量大，盲目性高— RNADNA边解旋边，半保30（③标记：一般为抗生素抗性或荧光等，其作用是鉴别受体细胞中是否含有目的目的（细胞。农杆菌Ti质粒上的T-DNA转移并整合到受体细胞的DNA上。80%转植物通过此种方法获得。②枪1987年中国科学家独创的植物授粉后花粉形成的花粉管还未愈合前剪去柱头滴加重组DNA，将目的导入动物细胞：常用显微注射法法方①农杆菌转化法：目的插入Ti质粒的T-DNA→农杆菌→导入植物细胞→稳定维持和表②枪显微注射法：目的表达载体提纯→取卵（卵）→显微注射→卵发育→新性状动①植物：可以是卵细胞（卵、体细胞（可经组织培养成为完整②动物：卵（因为体细胞的全能性受到严格限制①转生物的DNA上是否插入了目的，这是目的能否在真核生物中稳定遗传的关键。检测DNA②目的是否转录出了mRNA，这是检测目的是否发挥功能作用的第一步。检测方法同样是采用分子目的是否进入受之间目的是否转录目的是否翻译源性，也就是说目的已经被导入受体细胞内，反之，则说明目的没有进入受体细胞中 PCR扩增目的的原理是 ，PCR所使用的酶是 ，后者的形状 从文库获取PCR技术扩增人工合限制酶DNA双链DNA有一段已知目的的核苷酸序列DNA聚合酶耐高质粒从文库中获得、PCR技术扩增、人工合成氨基获取目的的方法有从文库中获取、PCR技术扩增目的和人工合成，其中文库包括组DNAPCR技术是在生物体外扩增。DNA片段，原理是DNA双链。前提条件是有一段已知目的的核苷酸序运送目的的载体常用的是质粒和，质粒为小型环状DNA分子【点评】本题考查目的的提取，需要理解三种获取目的的方法下列不属于获取目的方法的是 A．利用DNA连接酶目的B．利用DNA聚合酶目C．从文库中获取目的D．利用PCR技术扩增目【答案】【解析】目的可以从自然界中已有的物种中分离出来，也可以用人工的方法合成。目的主要指编码蛋（1）（2）（3）虫插入载体质粒中，然后导人棉花的卵中，结果抗虫在棉花体内没有表达。然后在插入抗虫的质粒中插入启动子（抗虫首端，导人棉花卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫的质粒中插入终止子（抗虫末端，再导人棉花卵，结果长成的植株有了抗虫能力。由以上过程推知，作为目的的运载体应具备的结构是（A．目的、启动 B．目的、终止C．目的、启动子、终止子D．目的、启动子、终止子、标【答案】【解析】本题考查表达载体的构建所需要的条件【点评本题属于信息材料题考查从中提取信息的能力当然有了课上的基础该题出来应该不成问题。（1）的特点：如果一个来自动物的目的含有内含子，就不能用于转植物，因为动物中内含子的剪接系统与植物的不同，植物不能将动物的内含子剪切掉，只能用该的cDNA。的产物如果是一要选择强启动子或组织特异性启动子。启动子有强有弱，选择强启动子可以增加转录活性，使产物量增多。如果希望在生物的某个组织表达，如只在植物中表达，就要选择中特异表达的启动子。要选择标记，如抗生素，以便选择出真正的转生物A．采用反转录的方法得到的目的有启动子、终止B．用同种限制酶处理质粒和含目的的DNA，可产生相同的黏性末端而形成重组DNA分D．启动子对于目的在番茄的叶肉细胞中的表达是不可缺少【答案】 【答案】农杆菌转化法是将目的导入植物细胞采用最多的方法。下图为农杆菌转化法示意图，请据图回答问题 Ti质粒原存在于 中，其上的T-DNA具有可转移到受体细胞并整合到受体细胞的 的特点，因此携带外源的DNA片段必须插入到 首先必须经过组织培养，人工合成的培养基一般包 、维生素等。植物体细胞发育成完整植株的过程说明植物细胞具 农杆菌转化法适于将目的导 和子植物，而不易于大多 若将相关的目的导入动物细胞或微生物细胞则常采 （1）DNA（2）DNA农杆菌细胞质 糖类无机盐植物激素双子叶植物叶植显微注射技术Ca2+（ ①检测受体细胞是否有目的；②检测受体细胞是否有致病③检测目的是否转录信使RNA；④检测目的是否翻译蛋白A．①②③B．②③④C．①③④【答案】【解析】目的的检测包括：检测转生物的DNA上是否插入了目的，方法是用DNA探针，使 B．大肠杆菌中检测到人胰岛