实验5细菌的接种及分离培养

目的要求1、学习和掌握细菌分离与培养的各种基本技术；2、进一步熟悉和掌握无菌操作技术。当前第1页\共有21页\编于星期三\22点实验材料标本和菌种：咽拭子、葡萄球菌培养物、变形杆菌培养物；实验器材：接种环、接种针、酒精灯；培养基：普通琼脂平板、试管斜面、液体培养基、半固体培养基；当前第2页\共有21页\编于星期三\22点常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、玻璃涂棒等（见图－6）。图－6接种工具当前第3页\共有21页\编于星期三\22点细菌接种的基本程序灭菌接种环沾取标本接种灭菌接种环杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境当前第4页\共有21页\编于星期三\22点（一）细菌的分离方法培养基：固体平板培养基分离方法：划线分离法意义：该法主要是借助划线而将混杂的细菌在琼脂表面分散开，使单个细菌能固定在某一点，生长繁殖后形成单个菌落，以达到分离纯种的目的。细菌的分离培养方法当前第5页\共有21页\编于星期三\22点微生物的分离—平板划线法1.分区划线法：2.连续划线法：当前第6页\共有21页\编于星期三\22点微生物的分离—平板划线法当前第7页\共有21页\编于星期三\22点当前第8页\共有21页\编于星期三\22点分区划线法第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环当前第9页\共有21页\编于星期三\22点连续划线法当前第10页\共有21页\编于星期三\22点（二）细菌的接种法当细菌分离成纯种后，常需要接种到相关的培养基中，以测试其各种生物学性状。一般可用斜面、半固体、液体培养基来检验细菌的培养特性，相应培养基的接种方法有三种。当前第11页\共有21页\编于星期三\22点斜面接种法培养基：斜面固体培养基；接种方法：斜面培养基接种法；用途：扩增细菌、保存菌种；或用于观察其某些生化特性。当前第12页\共有21页\编于星期三\22点琼脂斜面培养基接种法当前第13页\共有21页\编于星期三\22点穿刺接种半固体培养基：接种方法：穿刺接种法。用接种针垂直地穿入培养基中心至底部然后沿着原接种线将针拔出用途：检验细菌的运动性或观察细菌的生化反应。当前第14页\共有21页\编于星期三\22点液体培养基接种法培养基：液体培养基：接种方法：液体接种法从斜面菌种接入液体培养液从液体培养液接入液体培养液用途：扩增细菌，用于观察细菌的生长特性或测定其生化特性。当前第15页\共有21页\编于星期三\22点细菌培养法一般培养（需氧培养）：★培养温度：37℃（采用恒温培养箱）★培养时间：18～24h二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等当前第16页\共有21页\编于星期三\22点细菌在固体培养基中的生长现象菌落：★定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。★菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性★菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。当前第17页\共有21页\编于星期三\22点菌落当前第18页\共有21页\编于星期三\22点菌落与菌苔当前第19页\共有21页\编于星期三\22点细菌在液体培养基中的生长现象混浊沉淀：多见于