兽医生物制品处理技术-灭活技术（兽医生物制品技术）

常用灭活剂烷化剂甲醛灭活剂结晶紫苯酚Β-丙酰内酯常用灭活剂理化性质：无色有刺激性的气体,易溶于水和乙醇,36%-40%水溶液称为福尔马林,为无色透明液体，呈弱酸性,有强烈的刺激性。1.甲醛常用灭活剂灭活机制:使微生物蛋白质变性，从而使微生物丧失毒性和繁殖力，达到灭活作用。灭活浓度:需氧细菌:0.1%-0.2%厌氧菌:0.4%-0.5%灭活病毒:0.05%-0.4%,多用0.1%-0.3%。作用温度与时间：37-39℃、24h以上,有的需要更长时间。常用灭活剂例：猪肺疫灭活苗，0.1%，37-38℃,7-12h气肿疽灭活苗，0.5%，37-38℃,72-96h破伤风类毒素，0.4%，37-38℃,21-23d常用灭活剂不论是杀菌或脱毒，使用甲醛或其他灭活剂，灭活剂的浓度及处理时间都要根据实验的结果来确定。常用灭活剂甲醛灭活原则：低浓度、短时间达到彻底灭活。疫苗灭活结束时,应加入过量的焦亚硫酸钠（硫代硫酸钠）中止反应。常用灭活剂灭活机制:破坏病毒核酸芯髓，使病毒完全丧失感染力，而又不损害其衣壳蛋白，免疫原性不受破坏。常用的烷化剂:N-乙酰乙烯亚胺(AEI)、二乙烯亚胺(BEI)及缩水甘油醛(GDA)等。2.烷化剂常用灭活剂（1）N-乙酰乙烯亚胺(AEI)为淡黄色透明液体，有轻微氨臭味，能与水或醇任意混合。主要用于口蹄疫病毒的灭活。0.05%,30℃灭活8h。灭活结束需加入2%的硫代硫酸钠阻断灭活。（2）二乙烯亚胺(BEI)主要用于口蹄疫病毒的灭活。0.02%（3）缩水甘油醛(GDA)主要用于口蹄疫病毒的灭活,也可用于新城疫病毒、大肠杆菌、噬菌体的灭活。烷化剂常用灭活剂3.结晶紫一种碱性染料，别名甲基青莲或甲紫。带有金属光泽的绿色结晶或深绿色结晶状粉末,易溶于水和乙醇，溶液呈紫色。常用灭活剂灭活机制:主要是它的阳离子与微生物蛋白质带阴电的羧基形成弱电离化合物,妨碍了微生物的正常代谢,扰乱微生物的氧化还原作用，从而起灭活作用。例：疫苗:猪瘟结晶紫疫苗、猪水泡病细胞毒结晶紫疫苗等；诊断制剂:鸡白痢诊断抗原。常用灭活剂4.苯酚又称石炭酸，无色结晶或白色熔块,有特殊气味,有毒及腐蚀性,易潮解,溶于水及有机溶剂,在空气和阳光中易被氧化变红。常用灭活剂灭活机制:使微生物蛋白质变性或抑制特异酶系统的活性(如脱氨酶、氧化酶等),从而导致微生物死亡。通过它在细胞膜上的表面活性作用而损害细菌细胞膜，使胞浆漏出，菌体溶解。使用浓度:0.2%:抑制一般细菌的生长。1%以上:杀菌。芽孢和病毒对苯酚耐受力则很强。常用灭活剂5.β-丙酰内脂(BPL)又名羟基丙酰-β-内酯，一种良好的病毒灭活剂。理化性质：无色有刺激气味的液体,对皮肤、黏膜和眼睛有强烈的刺激性，对动物有致癌性。不稳定,37℃2h后能自行水解为无毒物质，必须于玻璃瓶内、5℃密封保存。常用灭活剂灭活机制:破坏病毒的核酸芯子,不损害衣壳蛋白,能保持良好的免疫原性。主要用于狂犬病灭活苗的制备。常用灭活剂6.硫柳汞理化性质：无色结晶或乳白色粉末，微有特殊气味，易溶于水，溶于乙醇，不溶于乙醚、苯。在空气中稳定，在日光下不稳定，故应密闭避光保存。用途：用作生物制品的防霉和消毒剂，对霉菌、细菌和病毒都有一定的灭活作用。百日咳菌苗作为灭活剂。工作浓度：常用浓度为0.01%-0.02%。灭活的方法灭活的方法物理灭活热灭活、超声波灭活、紫外线灭活和γ射线灭活化学灭活利用化学药品或酶

常用很少用灭活的方法1.物理灭活热灭活最早由Smith等研制猪霍乱灭活菌苗时提出。该法简单易行，但加热杀死微生物的方法比较粗糙，容易造成菌体蛋白质变性，因而免疫原性受到明显影响。灭活的方法超声波裂解细胞灭活应放在冰浴中间断进行。灭活的方法紫外线灭活效果不够确实，曾发生过经紫外线灭活的强毒重新活化的例子。灭活的方法γ射线灭活应根据被照射物的容量大小选择照射距离和照射强度。γ射线灭活柜γ射线灭菌包装袋灭活的方法目前，除诊断抗原尚采用物理灭活（主要是热灭活）外，一般很少用。灭活的方法2.化学灭活利用化学药品或酶使微生物、活性物质的一些结构发生改变，从而丧失生命力、感染性、毒性或活性。灭活的方法化学灭活法是目前采用最多的灭活法，但化学灭活的效能常受灭活剂种类、剂量和作用温度、pH、时间等因素影响，因此必须进行筛选最佳的灭活条件。在特定条件下，物理灭活与化学灭活也可联合用于某些生物制品的灭活。影响灭活效果的因素灭活效果:一是指灭活的完全性,即