作业指导书医疗器械无菌检测操作指引,直接接种法,薄膜过滤法

制定XXX确認:日期制定XXX确認:日期:2-Mar-19修定版次:2XXXXXX文件編號XXX1of8工作指引名称:无菌检测方法操作指引适用范围ScopeBI的无菌检测及评估.参考文件NormativereferenceISO11737-2,Sterilizationofmedicaldevices—Microbiologicalmethods—Part2:Testsofsterilityperformedinthedefinition,validationandmaintenanceofasterilizationprocessISO13485Medicaldevices—Qualitymanagementsystems—Requirementsforregulatorypurposes2023XIH无菌检查法COP09定义Definitions无菌sterile:无存活的微生物.开发,确认或重确认的一部份,确定产品上是否存在活微生物的技术操作.生物指示剂biologicalindicator(BI):对特定灭菌过程具有确定抗力的染菌测试系统.样品份额sampleitemportion(SIP):从产品上取的用于测试的规定局部.职责Responsibility试验员:具备微生物方面学问,生疏测试操作,负责产品的测试及报告.试验工程师:生疏测试,指导试验员测试,检查测试报告.质量主管/经理:负责审批测试报告.检测程序Testprocedure测试预备检测设备干净工作台超声清洗机细菌过滤器生化培育箱高压蒸汽灭菌锅XXXXXX文件編號XXX2of8工作指引名称:无菌检测方法操作指引检测用品,冲洗液:0.1%蛋白胨水溶液,0.9%NaCl,PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液;养分肉汤或胰蛋白胨大豆肉汤,胰蛋白胨大豆琼脂培育基;剪刀,镊子,微孔滤膜(0.45m);酒精灯,75%酒精,培育皿,培育缸/管,试管;依据检测需要,按规定要求配制好培育基,稀释液和冲洗液;将配制好的培育基,稀释液和冲洗液分装到三角瓶中密封并用白纸包住封口,微孔滤膜用水润湿放入培育皿中,剪刀,镊子,培育皿,培育缸/管,试管,细菌过滤器不锈钢杯用分别用白纸包好,12130min;超声清洗机和细菌过滤器用75%酒精擦洗干净;试验前两小时翻开干净工作台,无菌室,30min,在开启紫外灯时人员必需远离,以免灼伤眼睛和皮肤造成人身损害;全部检测用品,样品由传递窗递入无菌室.测试样品份额(SIP)的选择:假设验证生物负载在产品上是均匀分布的,SIP可以是该产品的任何部份,否则样品应包含能代表所制产品的每种相应材质而随机选取的产品部位.假设生物负载分布,可以从认为对灭菌工艺最有挑战性的产品部份选取SIP.可在长度,质量,SIP:SIPSIP的类型质量产品类型植入类(无渗透吸取型)粉尘类衣服类植入类(可渗透吸取型)管道类(管径全都)液体类样品测试前包装应完整,应先用75%酒精对包装外表进展清洁再传入传递窗;在无菌测试前,应先验证测试方法的适用性,以证明所承受的方法适合于样品的无菌检测,检测方法参照《抑細菌抑真菌試驗》;方法验证试验可与样品的无菌检测同时进展,或外发至具有微生物检验资质的试验室进展;阳性比照:应依据样品的特性选择阳性比照菌:XXXXXX文件編號XXX3of8工作指引名称:无菌检测方法操作指引无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的样品,以金黄色葡萄球菌为比照菌;抗革兰阴性菌为主的样品,以大肠埃希菌为比照菌;抗压氧菌的样品,以生孢梭菌为比照菌;抗真菌的样品,以白色念珠菌为比照菌;阳性比照试验的菌液制备方法同《抑細菌抑真菌試驗》;加菌量小于100cfu,样品用量同样品的无菌测试每份培育基接种的样品量;48～72小时应生长良好.阴性比照:样品的无菌测试时,应取相应培育基,稀释液,冲洗液同法操作,作为阴性比照.阴性比照不得有菌生长.无菌测试有以下两种方法:直接接种法:将样品直接接种到培育基中或将可生长培育基参与到样品里进展培育,观看是否有菌生长;薄膜过滤法:将微生物从样品上移除分别后,再接种到培育基中进展培育,观看是否有菌生长;直接接种法医疗器械的无菌检测方法应首选直接接种法;SIP接种于含有足以浸没样品的适量培育基的无菌容器中直接培育;培育基的用量应能浸没整个样品或SIP;假设样品无法直接放入容器中,可在灭菌前对产品进展拆分单独包装,或在测试培育前进展拆分;样品放入培育基后可适当的搅拌;假设样品具有抑菌作用,可参与适量的无菌中和剂或外表活性剂,或加大每个容器的培育基用量.薄膜过滤法由于某些医疗器械的特性如具有抑细菌抑真菌的作用,而不能选用直接接种法时,可选择薄膜过滤法;在选用薄膜过滤法时应留意洗提技术,洗提力气和操作过程中的污染对测试结果的影响;无菌测试样品的洗提技术应与该样品的生物负载测试技术全都,检测方法可参照《產品生物負載檢測》;XXXXXX文件編號XXX4of8工作指引名称:无菌检测方法操作指引操作步骤:将样品包装去除,用无菌镊子将样品放入超声清洗机中,如样品过大而无法放入可将样品进展适当拆分;将样品浸入含有适量洗脱液的超声清洗机中,参与适量的稀释液和外表活性剂,以洗脱液浸没样品外表为准;翻开超声清洗机,5min,超声清洗频率不应过高,以免造成微生物死亡;清洗完毕后将样品取出,洗脱液在细菌过滤器上进展过滤,应留意滤膜在使用前后的完整性;洗脱液经薄膜过滤后,PH7.0气化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜,每张滤膜每100ml;过滤完成取出滤膜,2等份,置于含培育基的容器中,其中一份作阳性比照用.培育及观看:将上述含培育基的容器按规定温度培育,培育期间应逐日观看并记录是否有菌生长;

培育基养分肉汤/养分肉汤/

培育温度30～35℃30～35℃

培育时间14天7天如在参与样品后或在培育过程中,培育基消灭浑浊,714天后,不能从外观上推断有无微生物生长,可取该培育液适量转种至同各颖培育基中,细菌培育2天,3天,观看接种的同种颖培育基是否再消灭浑浊,或取培育液涂片,染色,镜检,推断是否有菌.结果推断阳性比照管应生长良好,阴性比照管不得有菌生长,否则试验无效;假设样品管均澄清,或虽显浑浊但经确证无菌生长,判样品符合规定;假设样品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长,判样品不符合规定,除非能充分证明试验结果无效,即生长的微生物非样品所含;当符合以下至少一个条件时,方可判试验结果无效:无菌测试所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌测试的要求;回忆无菌测试过程,觉察有可能引起微生物污染的因素;XXXXXX文件編號XXX5of8工作指引名称:无菌检测方法操作指引样品管中生长的微生物经鉴定后,确证是因无菌测试中所使用的物品或无菌操作技术不当引起的.测试假设经确认无效,应重试.重试时,重取同量样品,依法检查,假设无菌生长,判样品符合规定;假设有菌生长,判样品不符合规定.检测报告编号规章:SterilityTestingReportForSterileProductsTL-YY-XXYY:年份XX:流水号BiologicalIndicatorSterilitytestReportBI_S_YY-XXXYY:年份XXX:灭菌批流水号文件保存期限:10年.附录SterilityTestingReportForSterileProductsBiologicalIndicatorSterilitytestReport制定:XXX确認:日期制定:XXX确認:日期2-Mar-19修定版次:2XXXXXX文件編號XXX6of8工作指引名称:无菌检测方法操作指引7.1SterilityTestingReportForSterileProductsXXXXXX文件編號XXX7of8工作指引名称:无菌检测方法操作指引附录7.2BiologicalIndicatorSterilitytestReportXXXXXX文件編號XXX8of8工作指