细菌真菌放线菌培养基配方

。一．细菌培育基：肉膏蛋白胨培育基是一种广泛用于培育细菌的培育基,肉膏蛋白胨培育基的主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。肉膏蛋白胨培育基1.药品比例：3g10g，Nacl5g15～20g1000mL，PH7.4～7.62.试验器材：1mol/LNaOH、、KNO

、NaCl、KHPO·3HO、MgSO·7HO、FeSO·7H

O、4.5mL63 2 4 2 4 2 4 2管，10%酚液，49.5mL)1三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、称量纸、牛角匙、pH号笔、线绳、纱布、酒清灯。电炉、高压蒸气灭菌锅、超净工作台.配置方法称药品：按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯中称量，用热水溶解后倒入大烧杯。蛋白胨极易吸潮，故称量时要快速。加热溶解：在烧杯中参加少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。假设配制固体培育基，则将称好的琼脂放入己溶解的药品中，再加热溶化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最终补足所失的水分。调pH：检测培育基的pH，假设pHlmol/LNaOH，边加边搅拌，pHpHlmol/LHClpHpH各离子的浓度。过滤：液体培育基可用滤纸过滤，固体培育基可用4利培育的观看。但是供一般使用的培育基，这步可省略。分装：按试验要求，可将配制的培育基分装入试管或三角瓶内。分装时可用漏斗以免使培育基沾在管口或瓶口上而造成污染。分装量：固体培育基约为试管高度的l/5，灭菌后制成斜面。分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。半固体培育基以试管高度的1/3的外形、大小和松紧度要适宜，四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起到防止杂菌侵入3/58塞代替棉塞。包扎：加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸，以防灭菌时57包一层牛皮纸，用绳扎好。然后用记号笔注明、培育基名称、组别、日期。121.320min。如因特别状况不能准时灭菌，则应故人冰箱内暂存。摆斜面：灭菌后，如制斜面，则需趁热将试管口端搁在一根长木条上，并1/2。37℃24～48h，无菌生长即可使用，或贮存于冰箱或清洁的橱内，备用。二.放线菌培育基:高氏合成一号培育基是一种用于培育放线菌的合成培育基,培养基中的可溶性淀粉作为碳源和能源，KNO3

2

、MgSO4

和FeS04

作为无机盐等高氏合成一号培育基药品比例：可溶性淀粉20gNaCI0．5gKNO1g3

．3H

O0．5g2 MgSO4

2．7H

O0．5g2FeSO

．7HO0．01g4 2琼脂15～25g水1000mlpH7.4～7.6试验器材：试管，锥形瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，培育基分装器，天平，高压蒸汽灭菌器，PH〔、称量和溶化按配方先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，再参加少于所需水量的沸水中，连续加热，使可溶性淀粉完全溶化。然后再称取其他各成分，并依次溶化，对微量成分FeSO

．7H

O4 2液，按比例换算后再参加。待全部试剂完全溶解后，补充水分到所需的总体积。配制固体培育基时，将称好的琼脂放入已溶的试剂中，在加热溶化，最终补充所损失的水分。pHPH1mol/LNaOH,边滴边搅拌，并随时用pHpH,直至pH7.61mol/LHCI、分装和加塞将配制的培育基分装入试管内，在试管口或锥形瓶口上塞上棉塞。、包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用一根麻绳扎好。用记号笔注明培育基名称、组别、配制日期。、灭菌1210C,20min,0.103MPa、搁置斜面500C左右，将试管口端搁在玻璃棒上。斜面的斜度1/3。、无菌检查370C24～28h，以检查灭菌是否彻底。三．真菌培育基：马铃薯糖琼脂培育基〔马丁氏培育基〕马铃薯糖琼脂培育基药品比例

O0.5g5g，葡萄糖l0g15～20g1000mL，自2 4 4 2然pH此培育液1000ml1%孟加拉红水溶液3．3ml。临用时每100ml1%链霉素液0．3ml。〔孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂，对真菌无抑制作用，因而真菌在这种培育基上可以得到优势生长，从而到达分别真菌的目的〕试验器材KH2PO4，MgSO4?7H2O，蛋白胨，葡萄糖，琼脂，孟加拉红，链霉素；试管，三角烧瓶，量筒，玻棒，培育基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅配制方法称量和溶解：先计算后称量，按用量称取各成分，并将其溶解在少于所需的水中。待各成分完全溶解后，补充水分到所需体积。再将孟加拉红配成1%的水溶液，在1000mL3.3mL，混匀后，参加琼脂加热溶化，方法同牛肉膏蛋白胨培育基配制。分装、包扎、灭菌及无菌检查同牛肉膏蛋白膝培育基配制。链霉素的参加：链霉素受热简洁分解，所以临用时，将培育基溶化后待温451%的溶液(配好的链霉素溶液保存于-2100mL培育基中加10.3m3μ四．灭菌承受高压蒸气灭菌法进展灭菌，步骤如下：首先将内层锅取出，再向外层锅内参加适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。切勿遗忘加水，同时水量不行过少，以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。放回内层锅，并装入待灭菌物品。留意不要装得太挤，以免防碍蒸气流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与锅壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧全都，勿使漏气。用电炉或煤气加热，并同时翻开排气阀，使水沸腾以排解锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加到渐渐上升。当锅20min灭菌的主要因素是温度而不是压力。因此锅内冷空气必需完全排尽后，才能关上排气阀，维持所需压力。灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“0”时，翻开排气阀，旋松螺栓，翻开盖子，取出灭菌物品。压力肯定要降到“0”时，才能翻开排气阀，开盖取物。否则就会因锅内压力突然下降，使容器内的培育基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培育基而发生污染，甚至灼伤操作者。将取出的灭菌培育基，需摆斜面的则摆成斜面，然后放入3724h，经检查假设无杂菌生长，即可待用。五．土壤微生物的分别取土壤：取表层以下5～10cm4℃冰箱中暂存。制备稀释液(要无菌操作)0.5g49.5mL5～10min，使土样充分打散，即成为10-2的土壤悬液。10-20.5mL4.5mL10-310-3～10-8的稀释液。留意：操作时管尖不能接触液3次，每次吸上的液面要高于前一次，以削减稀释中的误差。六．混菌法测定菌落数的方法(110-7、10-61mL，分别接人相应标号的平皿中，每个稀释度接两个平皿。然后取冷却至50℃的牛肉膏琼脂培育基，分别倒入以上培育皿中(1.5～2mm但不沾湿皿的边缘，待琼脂凝固即成细菌平板。倒平板时要留意无菌操作。10-5、10-4105～61mL1基，用与细菌一样的方法倒入平皿中，便可制成放线菌平板。10-2、10-31mL，分别接入相应标号的平皿中，每个稀释度接两个平皿。在溶化的马铃薯培育基中，每100mL1mL，轻轻摇匀，然后用与细菌一样的方法倒入平皿中，便可制成真菌的平板。4．培育：将接种好的细菌、放线菌、真菌平板倒置，即皿盖朝下放置，于28～30℃1～2d5～7d3～5d。观看生长的菌落，用于进一步纯化分别或直接转接斜面。七.〔一〕平板制作及划线分别方法。倒平板：按无菌操作要求，在火焰旁操作。划线分别：使用接种环，从待纯化的菌落或待分别的斜面菌种只沾取少量菌样，在相应培育基平板中划线分别，划线的方法多样，目的是获得单个菌落。培育：方法同“土壤稀释分别”。〔二〕斜面接种和穿刺接种斜面接种〔〕，然后用无菌操作方法，把待接菌种接入以上颖培育基斜面上。接种的方法是，用接种环沾取少量待接菌种，然后在颖斜面上“之”字形划线，方向是从下部开头，始终划至上部〔图3—4A〕。留意划线要轻，不行把培育基划破。3048h，放线菌、霉菌培育至孢子成熟方可取出保存。穿刺接种取两支颖半固体牛肉膏蛋白胨柱状培育基，做好标记〔写上菌名〕、接种日期，接种人等〕。接种的方法是，用接种针沾取少量待接菌种，然后从柱状培育基的中心穿入其底部〔但不要穿透〕，然后沿原刺入路线抽出接种针，留意接种针不要移动。30℃恒温培育，24h八、留意事项1．称药品用的牛角匙不要混用，称完药品应准时盖紧瓶盖。调pH不同培育基各有配制特点，要留意具体操作。一般土壤中，细菌最多，放线菌及真菌次之，而酵母菌主要见于果园及菜园土壤中，故从土壤中分别细菌时，要取较高的稀释度，否则菌