微生物实验报告答案

微生物实验报告答案微生物实验报告答案微生物实验报告答案微生物实验报告答案【篇一：微生物的革兰氏染色实验报告】=txt>二、实验目的：1、学习并初步掌握革兰氏染色法；2、认识革兰氏染色的原理；3、坚固显微镜的使用。三、实验原理：革兰氏染色是1884年丹麦病理学家christaingram氏创办的，是细菌学中最重要的鉴识染色法。染色步骤分为四个部分：1、初染：加入碱性染料结晶紫固定细菌图片；2、媒染：加入碘液，碘与结晶紫形成一种不溶于水的复合物；3、脱色：利用有机溶剂乙醇或丙酮进行脱色；g-和g+细胞壁的比较：1、阳性（g+）菌细胞壁特色：细胞壁厚，只有一层，主要由肽聚糖组成，肽聚糖含量高，构造亲近，脂类含量低。当乙醇脱色时，细胞壁肽聚糖层孔径变小，通透性降低，结晶紫和碘的复合物被保存在细胞壁内，复染后仍显紫色（如芽孢杆菌）。2、阴性（g-）菌细胞壁特色：细胞壁薄，由两层组成，内壁层和外壁层，细胞壁中脂类中脂类物质含量较高，肽聚糖含量较低，网状构造交联程度低，乙醇脱色时溶解了脂类物质，通透性加强，结晶紫与碘的复合物易被乙醇抽提出来，因此，革兰氏阴性菌细胞被脱色，当复染时，脱掉紫色的细胞的细胞壁又着上红色（比方大肠杆菌）。四、实验器械：1、菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌。2、溶液和试剂：革兰氏染液、草酸铵结晶紫染液、碘液、95%乙醇、番红复染液、水。3、仪器及其余用品：酒精灯、载玻片、显微镜、接种环、试管架、滤纸、滴管。五、实验步骤：1、取一个载玻片，将其洗净并沿一个方向擦抹洁净，直至液体不再其上缩短为止；将接种环整平，用灼烧过的接种环在混匀的菌种中取菌，按常例方法图片，应涂大，不宜过厚。2、翻开酒精灯，用火焰固定，不宜烤得太狠，不然菌种呈假阳性。3、轻旋结晶紫染液滴管，将其旋出，滴加1滴草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位（轻晃使其完满覆盖），染色40s。4、染色完成后倾去染液，水洗至流出水为无色。5、将玻片上残留水用滤纸吸去，待其干燥。6、在涂菌部位滴加碘液，覆盖1min。7、媒染完成后，倾去碘液，水洗至流出水无色。8、将玻片上残留水用滤纸吸去，待其干燥。9、将载玻片放在白色笔录本上，用滴管滴加95%乙醇脱色，脱色30~40s，不宜脱色太狠，不然菌种呈假阴性。、脱色完成后立刻用水洗去乙醇。、将玻片上残留水用滤纸吸去，待其干燥。12、滴加番红复染液，染色4min。13、染色完成后，水洗至流出水无色。14、吸去残留水并晾干。15、用显微镜察看并画图。用以上步骤完成：大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的混杂图片染色、大肠杆菌独自菌种染色、金黄色葡萄球菌独自菌种染色。六、注意事项：1、采纳活跃生长久菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。2、图片不宜过厚，免得脱色不完满造成假阳性。3、脱色是革兰氏染色能否成功的重点，脱色不够造成假阳性，脱色过分造成假阴性。七、实验结果与讨论：1、结果：绘出高倍镜下察看的菌体图像。2、思虑题：1）写出常有的革兰氏阳性菌与阴性菌，包含致病菌。2）革兰氏染色的原理是什么？印象要素有哪些？3）怎样考证你的染色结果能否正确？【篇二：微生物实验报告一】s=txt>学生实验报告院（部）生物科学与工程学院姓名学号专业生物工程班级同组人员课程名称微生物学类实验实验名称产酶微生物的分别、纯化与选育实验日期2013.11批阅日期成绩教师署名北方民族大学教务处制产酶微生物的分别、纯化与选育实验意义：酶是生物体内进行生物化学反响的催化剂，在生物体中已发现的酶有2500多种。因为酶促反响的特异性强，反响平和，安全无毒，环境污染少，在冲刷剂、皮革、纺织、诊疗、制药等领域拥有宽泛的应用价值。能由工业生产的50多种酶制剂蛋白酶、淀粉酶等，大部分是由霉菌、细菌、链霉菌和酵母菌生产的。经过本实验，学会从自然界中分别产酶微生物的方法，军中的纯化技术及其高产菌的选育技术。蛋白酶产生菌的分别与纯化1.1实验目的：学习从自然界中分别蛋白酶产生菌并纯化。1.2实验原理好多细菌和霉菌产生蛋白酶，细菌中的芽孢杆菌是常有的蛋白酶产生菌。本实验将土壤样品（或其余样品）悬液加热办理，杀死非芽孢细菌及其余微生物后进行划线分别获取芽孢杆菌，将其接种到酪蛋白平板进行培育，依据酪蛋白平板的水解圈作初筛。也可直接将细菌或霉菌接种到酪蛋白平板进行培育，分别精选其余蛋白酶产生菌。1.3实验仪器与资料土壤样品或其余富含蛋白质的样品、牛肉膏蛋白胨培育基平板、酪蛋白平板、无菌水（带玻璃珠）、芽孢染色液；显微镜、恒温水浴锅、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、量筒等。1.4实验方法与步骤1.4.1配制酪素培育基：牛肉膏0.3g、nacl0.5g2.0g，蒸馏水100ml左右，调理ph7.6-8.0。1.4.2配制土壤样品：

，酪素

1.0g

，琼脂1）采集土壤样品，用无菌水制备1：10土壤悬液。2）取1：10土壤悬液5ml，此后将悬液按10、10、10、10

梯度稀释，注入试管中。

-1-2-3-43）将这些试管放入

75-80

℃水浴中热办理

10min

，以杀死非芽孢细菌。1.4.3灭菌与接种：1）将培育基灭菌办理。1.4.4.蛋白酶产生菌的纯化：1）依据酪蛋白平板的水解圈作初筛，精选出单菌落的蛋白酶产生菌。2）将精选出的单菌落用平板划线法接种到牛肉膏蛋白胨培育基上，此后将平板倒置放于培育箱中24—48h。1.4.5芽孢杆菌的染色判断1）挑去菌落涂片固定。2）滴加1——2滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必需时可增添少量染液4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再退色为止。5）用番红水溶液复染1分钟，水洗至水为无色。6）待干燥后，置油镜察看，芽孢呈绿色，菌体呈红色。1.4.6蛋白酶产生菌的保存培育：1）用斜面划线法，取纯化判断后的菌种接种于斜面上，放于培育箱中24—48h。2）将培育后的菌种置于冰箱中保存。1.5实验结果：在含酪蛋白的平板上，产蛋白酶的芽孢杆菌可形成蛋白质水解圈。自然界中分其余微生物各菌株间产蛋白酶活力有很大差别，有些芽孢杆菌酶活力超出4000u/ml。1）描绘你所分其余蛋白酶产生菌的菌落特色和个体形态特色；答：第一组：a:原液培育基表面出现大面积菌落，难以挑出所需单调菌落；b:10培育基表面菌落好多，但未发现与所需菌落有关特色；c:10培育基表面基本未出现菌落：d:10、10均发现与所需菌落特色吻合的菌落，连续培育待进一步纯化。第二组：a：原液培育基表面出现大面积菌落，难以划分-2-3-4-1b:10培育基表面基本未出现菌落c:10培育基表面基本未出现菌落：d:10、10培育基表面均发现与所需菌落特色吻合的菌落，连续培育待进一步纯化2）报告你所分其余蛋白酶产生菌的初筛（水解圈与菌苔直径的比值）结果。答：求的均匀hc值=1.7-1-2-4-31.6注意事项1）土壤悬液加热办理的温度和时间应正确控制；2）点接含酪蛋白的平板时，接种量及接种面积要基真同样。1.7分析与讨论在酪蛋白平板上水解圈与菌落直径比值大的菌落，其蛋白酶活力不用然大，因此，对初精选出的水解圈与菌落直径比值大的菌落要进行发酵培育，进一步对发酵液进行酶活力测定。1.8思虑题1）对所精选的菌株怎样进一步提升酶活力？请写出设想和方案；答：采纳蛋白酶产量较高的原始菌种，扩大培育后，采纳低浓度的菌悬液，进行紫外线时间梯度照耀，采纳一个突变率较高，成活率也较高的时间，大量量的进行紫外照耀诱变，此后在明胶固体培育基平板上精选水解圈较大的菌株接种，培育后测定水解酶活性，进一步精选出高产菌株。2）蛋白酶有哪些方面的应用。答：蛋白酶宽泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。微生物蛋白酶，主要由霉菌、细菌，其次由酵母、放线菌生产。产酶微生物菌种的选育生物的遗传信息的改变是经过基因突变、基因重组和基因转移来进行的。基因突变，又称点突变（pointmutation），包含自觉突变和惹起突变，前者是未经人为施加诱变剂办理而发生的突变，后者是经人为施加诱变剂办理而获取的突变。两种突变都是因为一个或几个碱基的增添、缺失或置换而惹起的，因此实质同样，不同样的但是惹起突变的频次比自觉突变的频次要高得多。这一部分的实验是以紫外线为例介绍了物理要素对微生物的诱变作用。本实验中，学生将精选出的蛋白酶的产生菌株作为出发菌株经过紫外线即物理要素对微生物的诱变作用，对以上菌株进行选育工作。特以蛋白酶产生菌株作为出发菌株，经过紫外线的诱变作用，依据透明圈直径与菌落直径的比值，可初步确立蛋白酶的高产菌株为例来介绍本实验内容。2.1实验目的经过实验察看紫外线和亚硝基胍等理化要素对微生物的诱变效应，并掌握基本方法。2.2实验原理基因突变可分为自觉突变和惹起突变。好多物理要素、化学要素和生物要素对微生物都有诱变作用，这些能使突变率提升到自觉突变水平以上的要素称为诱变剂。紫外线（uv）是一种最常用的物理诱变要素。它的主要作用是使dna双链之间或同一条链上两个相邻的胸腺嘧啶间形成二聚体，阻碍双链的分开、复制和碱基的正常配对，从而惹起突变。紫外线照射惹起的dna损害，可由收复生酶的作用进行修复，使胸腺嘧啶二聚体解开恢还原状。因此，为了防备收复生，用紫外线照耀办理以及办理后的操作应在红光下进行，而且照耀办理后的微生物放在暗处培育。本实验分别以紫外线作为单因子诱变剂办理产生蛋白酶的菌株，根据试验菌诱变后在蛋白酶培育基上透明圈直径的大小来指示诱变效应。一般来说，透明圈越大，蛋白酶活性越强。2.3实验仪器与资料精选出的蛋白酶的产生菌株、酪素培育基、无菌生理盐水、无菌水试管等；1ml无菌吸管、玻璃涂棒、血细胞计数板、显微镜、紫外线等（15w）、磁力搅拌器、台式离心计、震荡混杂器等。2.4实验方法与步骤1）菌悬液的制备：①取培育48小时生长旺盛的出发菌株斜面4-5支，用10ml无菌生理盐水将菌苔洗下，倒入盛有玻璃珠的小三角烧瓶中，振荡30分钟，以打坏菌块。②用显微镜直接计数法计数，调整细胞浓度为每毫升10个。2）平板制作：将酪素培育基熔解后，冷至55℃左右时倒平板18套，凝结后待用。8【篇三：微生物生理生化反响实验报告】txt>姓名系年级2011级生科2班组别四科目微生物学实验题目微生物的生理生化反响微生物的生理生化反响一、【实验目的】证明不同样微生物对各样有机大分子物质的水解能力不同样，从而说明不同样微生物有着不同样的酶系统。2.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。3.认识糖发酵的原理和在肠细菌坚定中的重要作用。4.掌握经过糖发酵鉴识不同样微生物的方法。认识吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌判断中的意义和方法。二、【实验仪器与试剂】菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、一般变形杆菌、产气肠杆菌培育基：培育基：固体淀粉培育基、固体油脂培育基（大分子水解试验）；葡萄糖发酵培育基、乳糖发酵培育基（内装有倒置的德汉氏小管）（糖发酵试验）；蛋白胨水培育基（吲哚试验）；葡萄糖蛋白胨水培育基；试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水、仪器：酒精灯、接种针、培育皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管三、【实验原理】在所有生活细胞中存在的所有生物化学反响称之为代谢，代谢过程主假如酶促反响过程，因为各样微生物拥有不同样的酶系统，因此他们能利用的底物不同样，或虽利用同样的底物但产生的代谢产物却不同样，因此可以利用各样生理生化反响来鉴识不同样的细菌，特别是在肠杆菌科细菌的判断中，生理生化试验据有重要的地位。淀粉的水解：因为微生物对淀粉这类大分子物质不可以直接利用，必然靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物汲取利用.胞外酶主要为水解酶,经过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内.如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精,双糖和单糖；而淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其四周的淀粉，在淀粉培育基上培育用碘办理其菌落四周不呈蓝色，而是无色透明圈，据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。油脂的水解：在油脂培育基上接种细菌，培育一段时间后察看菌苔的颜色，若出现红色斑点，则说明其中菌可产生疏解油脂的酶。糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴识微生物的生化反响,在肠道细菌的判断上特别重要.绝大部分细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差别.有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)平和体(如氢气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气.比方大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。产酸后再加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会采集到一部分气体。若细菌不可以使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。5.imvc实验主要用于迅速鉴识大肠杆菌和产气肠杆菌。1）吲哚试验：是用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培育基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反响生成玫瑰色的玫瑰吲哚。但其实不是所有的微生物都拥有分解色氨酸产生吲哚的能力，因此吲哚实验可以作为一个生物化学检测的指标。大肠杆菌吲哚反响阳性，产气肠杆菌为阴性。2）甲基红试验（mr）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者从而被分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，培育基就会变酸，使加入培育基中的甲基红指示剂由橙黄色转变成红色，即甲基红反响。大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。四、【实验步骤】1.淀粉水解实验1）倒平板：依据淀粉培育基配方配制固体淀粉培育基，灭菌，待培育基冷却至50℃左右，在酒精灯火焰旁倒平板，每组两个平板。（2）用记号笔在平板底部划成四部分。3）接种：在无菌操作台上，将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌分别在不同的部分点种，如图一所示，注意仅用接种针接触很少面积的培育基，在平板的反面对应部分贴上标签，标签上分别写上菌名，免得混杂。（4）培育：将平板倒置，在28℃温箱中培育两天。5）察看：拿出培育基，察看各样细菌的生长状况，翻开平板盖子，滴入少量卢戈氏碘液于平板中，轻轻旋转平板，使碘液均匀铺满整个平板，察看培育皿中菌落四周能否有无色透明圈，如有无色透明圈出现，说明淀粉已经被水解，为阳性，反之则为阴性。记录实验结果。图一：淀粉水解试验接种表示图图二：油脂水解试验接种表示图2.油脂水解试验1）倒平板：依据油脂培育基配方配制固体油脂培育基，灭菌，待培育基冷却至50℃左右，充分振荡，使油脂均匀散布，在酒精灯火焰下倒平板，每组两个平板。（2）用记号笔在在平板底部划成四部分。3）接种：在无菌操作台大将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌分别划十字线接种于平板相对应部分的中心，如图二所示，并贴好标签，标签上注明菌种的名称。（4）培育：将平板倒置，在28℃温箱中培育两天。5）察看：拿出平板，察看菌苔颜色，假如出现红斑点，说明脂肪水解，为阳性反响。记录实验结果。3.葡萄糖发酵实验1）培育基的配制：依据糖发酵培育基配置葡萄糖发酵培育基，分装至试管中，用胶头滴管往德汉氏小管中注满培育基，再把德汉氏小管倒置放入试管中，注意不要让德汉氏小管中进入空气，每组五只试管，灭菌。2）接种：待培育基冷却至常温时，在无菌操作台上，取葡萄糖发酵培育基试管2支接入大肠杆菌，再取两只接入一般变形杆菌，接种后轻摇试管，使其均匀，防备倒置的小管进入气泡，第五支不接种，作为比较。在各试管外壁上贴上标签，标签上分别注明发酵培育基的名称和所接种的细菌菌名。3）培育：把接种后的试管放在试管架上，把试管连同试管架放入培育箱中于28℃下培育两天。（4）察看：察看各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡，并记录实验结果。4.乳糖发酵实验1）培育基的配制：依据糖发酵培育基配置乳糖发酵培育基，分装至试管中，用胶头滴管往德汉氏小管中注满培育基，再把德汉氏小管倒置放入试管中，注意不要让德汉氏小管中进入空气，每组五只试管，灭菌。2）接种：待培育基冷却至常温时，在无菌操作台上，取乳糖发酵培育基试管2支接入大肠杆菌，再取两只接入一般变形杆菌，接种后轻摇试管，使其均匀，防备倒置的小管进入气泡第五支不接种，作为比较。在各试管外壁上贴上标签，标签上分别注明发酵培育基的名称和所接种的细菌菌名。（3）培育：把接种后的试管放在试管架上，把试管连同试管架放入培育箱中于28℃下培育两天。（4）察看：察看各试管颜色变化及德汉氏小管中有无气泡，并记录实验结果。5.吲哚试验1）培育基的配制：依据蛋白胨水培育基配方配制培育基，分装至试管中，每组五只试管，在高压蒸气锅内灭菌。（2）接种：待培育基冷却后，在无菌操作台大将大肠杆菌接入2支蛋白胨水培育基，产气肠杆菌接入2支蛋白胨水培育基，节余一只试管不接种，作为空白比较，贴好标签。3）培育：把接种后的试管放在试管架上，把试管连同试管架放入培育箱中于28℃下培育两天。（4）察看：往培育后的蛋白胨水培养基内加入3~4滴乙醚，摇动数次，静置1min，待乙醚上涨后，沿试管避渐渐加入2滴吲哚试剂。在乙醚和培育物之间产生红色环状物为阳性反响。察看加入试剂后试管内的